GST琼脂糖凝胶价格

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北京百奥莱博科技有限公司专业生产供应GST琼脂糖凝胶价格，产品信息：

类别：蛋白质研究

英文名：Glutathione-Sepharose Resin

产品名	产品编号	包装规格
GST琼脂糖凝胶	WE0269	10ml

英文名：Glutathione-Sepharose Resin

编号：WE0269

规格：10ml

  本产品为基于三甘醇(16原子间隔臂)的谷胱甘肽琼脂糖，可快速、温和、特异性地纯化包含谷胱甘肽结合序列的非变性蛋白质，如谷胱甘肽-S-转移酶(GST)、谷胱甘肽过氧化物酶等，尤其适用于在大肠杆菌、昆虫细胞和哺育动物细胞中表达的GST融合表达蛋白。该填料具有很好的物理和化学稳定性，使用寿命长，使用方便，批次重复性好，可一步分离得到纯度较高的目标蛋白，纯化条件温和，可保证蛋白的活性。

 

支持物：CL-6B琼脂糖凝胶

载量：5-10 mg GST标签蛋白/ml 填料

粒径：50-160μM

 

注意事项：

1、请勿将 GST琼脂糖凝胶冷冻、干燥和离心，整个纯化过程中切忌凝胶脱水变干。

2、蛋白层析应使用高纯度的试剂和水，层析前缓冲液应用0.45μM滤膜过滤后使用。另外为防止柱子阻塞，上柱前建议将裂解液进行离心，或者使用0.45μM滤膜过滤。

3、GST 融合蛋白与还原型谷胱甘肽的结合比较缓慢，为获得最大结合量，上样流速建议为：0.2-1ml/min(6ml层析柱)，0.5-2ml/min(12ml层析柱)。对于吸附效果不好的样品，可以先把介质和样品混合，轻轻振摇 2-4小时，再装柱，用平衡缓冲液进行重新平衡、洗脱等操作，另外在细菌抽提试剂中添加5 mM DTT，可以显著提高GST标签结合能力。

4、不同的 GST 融合蛋白取得最佳纯化效果所需还原型谷胱甘肽浓度、洗脱体积和洗脱时间可能有所不同。必要时需对流穿液、洗脱液进行 SDS-PAGE 以及 Western 杂交分析，以确定最佳纯化条件。

5、GST 融合蛋白以包涵体形式存在时不能与介质结合，必须先进行变性、复性、透析处理后才能用介质进行纯化。建议优化蛋白表达条件尽量使蛋白可溶性表达。

6、如后续实验需要除去洗脱液中还原型谷胱甘肽，可采用超滤或透析的方法。

 

使用方法：

 

I 缓冲液的准备

1、结合缓冲液(PBS)：10 mMNa2HPO4，1.8 mMKH2PO4，140 mMNaCl，2.7 mMKCl，pH7.4

2、洗脱缓冲液：10 mMNa2HPO4，1.8 mMKH2PO4，140 mMNaCl，2.7 mMKCl，10 mM还原型谷胱甘肽(GSH)，pH7.4。将0.1 g还原型谷胱甘肽(GSH)溶于30ml 结合缓冲液，或将0.25 g溶于75ml结合缓冲液中。

3、再生缓冲液1：0.1 MTris-HCl，0.5 MNaCl，0.1% SDS，pH8.5

4、再生缓冲液2：0.1 M Sodiumacetate，0.5 MNaCl，0.1% SDS，pH4.5

 

II 样本制备

1、收集菌体后，每100 mg菌体(湿重)加1-5ml细菌蛋白抽提试剂(每1ml细菌蛋白抽提试剂中加入10μl蛋白酶抑制剂混合物)，如有需要可以超声裂解菌体。

注意：

1)当提取物粘度高时，建议加入DNase I和Lysozyme。每1ml 细菌抽提试剂中加入1μlDNase I(1000U/ml)，2μl Lysozyme(50 mg/ml)，DNase I和Lysozyme可单独从我公司购买，货号：Lysozyme(WE0214)、 DNase I(WE0213A)，或直接从我公司购买WE0261细菌蛋白抽提试剂盒，包含细菌蛋白抽提试剂、DNase I、Lysozyme和蛋白酶抑制剂混合物。

2)超声过程中保持菌液处于冰浴中，超声条件依赖于所使用的超声仪功率，探头种类，容器的大小形状，需实验中自己摸索，应避免连续超声导致溶液过热，可分成短时间，多次超声，最终以菌液变清即可。

2、10000rpm，4℃离心15分钟，将上清转移至新的已预冷的离心管中，然后用预冷的PBS Buffer重悬沉淀(每50ml裂解液的沉淀加入3ml PBS)。

3、分别取10μl上清和沉淀悬液进行SDS-PAGE电泳检测，以确定蛋白存在于上清或沉淀中。若目的GST融合蛋白形成包涵体(不可溶蛋白)，应在纯化以前以适当的方式进行溶解和重折叠。

 

III 组装层析柱

1、将Glutathione-Sepharose Resin混合均匀直至重悬，用吸管移取适量的填料至层析柱中。室温静置10分钟，待凝胶与溶液分层后，把底部的出液口打开，让乙醇通过重力作用缓慢流出。

注意：

1)填料的上层是乙醇保护液，将填料与乙醇一起混匀，以每ml填料纯化5-10 mg GST标签蛋白计算，取需要的填料与乙醇混合液加入层析柱中。

2)如果乙醇不流出，可以给柱子一个外力，例如用大拇指对柱口轻轻按压一下，迫使乙醇流出。

3)本实验都是通过重力作用使溶液流出。

2、加入5倍柱体积的去离子水洗涤，再用10倍柱体积的结合缓冲液平衡，平衡结束后即可上样。

注意：柱体积指的是填料的体积。

 

Ⅳ GST融合蛋白的纯化

1、将层析柱的出口连接上紫外蛋白监测仪，根据紫外蛋白监测仪观察280 nm处的吸收值来监控层析柱流出蛋白情况。

2、上样：将制备的蛋白样品用结合缓冲液等体积稀释后，加入到已平衡好的层析柱中，建议上样流速为： 0.5-1ml/min(6ml层析柱)，1-2ml/min(12ml层析柱)。观察280 nm吸收情况并收集流穿蛋白。

注意：

1)样品在上柱前可以离心或0.45μM微孔滤膜过滤。或者使用本试剂盒中附带的一块筛板，使用时先将筛板加至填料的上层，该筛板可用于杂质较多的蛋白的过滤，防止过多的杂蛋白堵塞柱子的作用。再将处理好的样品负载上柱，但是筛板放入柱子后就不易取出。

2)通过控制加入的菌体裂解液的速度或流出速度来控制柱流速，流速过快会影响柱效。

3、洗涤：使用10倍柱体积的结合缓冲液过柱，洗涤杂蛋白，观察280 nm吸收情况并收集杂蛋白。建议洗涤流速为0.5-1ml/min(6ml层析柱)，1-2ml/min(12ml层析柱)。

注意：建议洗涤液中加入蛋白酶抑制剂终浓度为1mM，如蛋白酶抑制剂混合物，以抑制蛋白酶活性。

4、洗脱：使用10-15倍柱体积的新鲜配制的洗脱缓冲液过柱，洗脱目的蛋白，观察280 nm吸收情况并收集目的蛋白。建议洗涤流速为0.5-1ml/min(6ml层析柱)，1-2ml/min(12ml层析柱)。

5、蛋白检测：分别取等量的流穿液，洗涤液和目的蛋白洗脱液进行SDS-PAGE以分析蛋白的层析情况。

6、洗脱后，依次用3-5倍柱体积的结合缓冲液和3-5倍柱体积的去离子水洗涤填料，再用2-3倍柱体积的20%乙醇洗涤(乙醇要将填料浸没)，封柱后2～8℃保存。

 

Ⅴ 柱再生

当填料使用多次后，结合效率会有下降，可用以下方法再生，提高填料的使用寿命和蛋白质的结合效率。

1、使用5倍柱体积的再生缓冲液1洗涤填料，而后用5-10倍柱体积超纯水洗涤。

2、使用5倍柱体积的再生缓冲液2洗涤填料，而后用5-10倍柱体积超纯水洗涤。

3、保存：使用2-3倍柱体积的20%乙醇洗涤，将层析柱的头尾密封后(乙醇要将填料浸没)2～8℃保存。

4、再次使用时加入5倍柱体积的去离子水将乙醇洗涤后，使用10倍柱体积的结合缓冲液平衡填料，平衡结束后即可上样。

 

储存条件：2～8℃，避免冷冻

GST琼脂糖凝胶价格专业优质供应商：北京百奥莱博科技有限公司

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编号	类别	名称
WE0183	DNA纯化	游离DNA提取试剂盒
WE0105	核酸扩增(PCR)	BAmp DNA Polymerase
WE0328	细胞凋亡与增殖	Annexin V-PE/7-AAD凋亡流式检测试剂盒
WE0370	HRP标记抗体	HRP标记驴抗鸡IgY(IgG)(H+L)
WE0189	DNA纯化	高纯游离DNA中量提取试剂盒(负压法)
WE0176	DNA纯化	血液基因组DNA提取试剂盒
WE0301	蛋白质研究	X光暗盒(12.7cm×17.8cm)
WE0319	蛋白质研究	EDTA缓冲液(IHC抗原修复液，50×)
WE0135	核酸扩增(PCR)	SuperSYBR Mixture(高含量ROX校正染料)
WE0130	核酸扩增(PCR)	Real-time RT-PCR MasterMix
WE0398	DNA纯化	游离DNA样本保存管(10ml)
WE0354	一抗	抗β-Actin单克隆抗体
WE0331	免疫检测	抗GST标签琼脂糖介质
WE0213	工具酶	DNase I(不含RNase)
WE0271	蛋白质研究	Protein A琼脂糖凝胶
WE0124	核酸扩增(PCR)	高效多重PCR Mix
WE0118	核酸扩增(PCR)	结核分枝杆菌基因分型试剂盒(VNTR-9)
WE0310	蛋白质研究	TBST(pH8.0,10×)
WE0274	蛋白质研究	蛋白标准溶液BSA
WE0391	二抗	AP标记山羊抗兔IgG(H+L)
WE0334	一抗	HRP标记抗V5标签单克隆抗体
WE0318	蛋白质研究	柠檬酸缓冲液(IHC抗原修复液，100×)
WE0120	核酸扩增(PCR)	血液直接PCR扩增试剂盒
WE0143	核酸扩增(PCR)	快速实时荧光定量PCR预混体系(高含量ROX校正染料)
WE0337	一抗	抗Flag标签单克隆抗体
WE0234	基因结构和功能	cfDNA文库定量试剂盒(Illumina平台)

 

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