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- 详细信息
- 技术资料
- 库存:
469
- 英文名:
cwECL Western Blot Kit
- 保质期:
长期
- 供应商:
北京百奥莱博科技有限公司
- 保存条件:
2~8℃
特别声明:本产品及我公司所售其他产品均为科研类试剂产品,严禁用于药物、医疗及其他非科研用途。
北京百奥莱博专业生产销*(代"售")北京低背景ECL化学发光检测试剂盒价格厂家,我公司供应的分子生物学试剂品类齐全,且具有优势价格,欢迎新老客户垂询订购。
名称:北京低背景ECL化学发光检测试剂盒价格厂家
编号:WE0307
品牌:百奥莱博
英文名:cwECL Western Blot Kit
规格:50ml|250ml
产地:国产|进口
低背景化学发光检测试剂盒是免疫印迹实验中与辣根过氧化物酶(HRP)配套使用的的低背景底物检测试剂盒。本产品能够在HRP的催化下发生化学反应而发光,可用于检测固定在膜上的蛋白质等生物大分子。其高灵敏度能够检测ng级别的抗原,发光信号强
烈持久,可以使用照相技术(X-光胶片曝光)或者其他成像方法(如荧光或化学发光成像仪)进行检测。
试剂盒组成:
| 组成 | 50ml | 250ml |
| cwECL-A(Luminol) | 25ml | 125ml |
| cwECL-B(Peroxide) | 25ml | 125ml |
注意事项:
1、在与膜发生接触过程中,请佩戴手套且使用干净镊子等洁净器材,避免蛋白污染及高背景。
2、避光条件下,配制好的化学发光检测底物工作液可在室温下稳定保存8小时。阳光或其他强光会影响工作液,故应避免强光长时间的照射。正常实验室灯光短时间照射不影响工作液的使用。
3、百奥莱博提供多种蛋白转移用膜、封闭液、一抗、酶标二抗、缓冲液等,详情请查询公司网站。
操作步骤:
1、二抗孵育完毕后,将印迹膜充分洗涤。
2、根据需要量,将cwECL-A和cwECL-B按照1:1的比例等体积混合,配制为发光检测底物工作液(一张8 cm×6 cm的膜大约使用1ml工作液)。
3、弃去洗涤缓冲液,将发光底物工作液滴加在印迹膜上,确保工作液覆盖整张膜,室温孵育3-5分钟。
4、用移液器吸去多余发光底物工作液,将印迹膜置于两层干净的塑料薄膜之间,此过程应小心完成,避免膜与膜之间产生气泡。
5、在暗室内进行X-光胶片曝光,或将膜放置到化学发光成像仪内,按照仪器说明书进行检测。
| 问题 | 可能原因 | 解决方法 |
| 胶片反相(白色条带,黑色背景) | 系统中HRP过量 | 稀释HRP标记物至少10倍以上 |
| 膜上出现棕色或黄色条带 | ||
| 暗室中看到强烈发光 | ||
| 发光信号持续时间过短 | ||
| 信号较弱或者无信号 | 发光反应系统中HRP 过多,消 耗底物过快,引起信号迅速降低 |
稀释HRP标记物至少10倍以上 |
| 抗原/抗体量不够 | 增加抗原/抗体使用量 | |
| 蛋白转移率低 | 优化转移系统 | |
| 高背景 | 系统中HRP 过量 | 稀释HRP标记物至少10倍以上 |
| 封闭不足 | 优化封闭程序 | |
| 封闭试剂选择不当 | 选择另一种封闭试剂 | |
| 冲洗不充分 | 增加冲洗时间,次数 | |
| 曝光过度 | 减少曝光时间 | |
| 抗原/抗体浓度过高 | 降低抗原/抗体使用浓度 | |
| 蛋白条带为点状 | 蛋白转移失败 | 优化转移过程 |
| 膜未平衡 | 按照说明书处理膜 | |
| 胶片与膜之间有气泡 | 曝光前去除所有气泡 | |
| 出现非特异条带 (高背景、信号维持时间较短) |
系统中HRP过多 | 稀释HRP标记物 |
| 出现非特异条带 (背景干净信号维持时间正常) |
一抗用量过多 | 进一步稀释一抗 |
| SDS 导致非特异结合 | 在实验过程中避免使用SDS |
储存条件:2~8℃,避光保存
北京低背景ECL化学发光检测试剂盒价格厂家极具性价比,此外,我公司正火爆促销以下产品:
·AP标记山羊抗兔IgG(H+L)
编号:WE0391
英文名称:Goat Anti-Rabbit IgG, AP Conjugated
规格:100μl
本产品为碱性磷酸酶标记的经亲和纯化的山羊抗体,特异识别兔IgG,对其他种属IgG无明显交叉反应,检测灵敏度高,本底低,可用于Western Blot和ELISA检测。AP即碱性磷酸酶,可以催化BCIP/NBT等底物显色或催化适当的化学发光试剂产生化学发光。
免疫原:兔IgG
缓冲液:0.01M Tris-HCl,0.25M NaCl,50%甘油,pH8.0
稳定剂:15 mg/ml BSA(不含IgG和蛋白酶)
防腐剂:0.05%叠氮*
应用范围:WB(1:2000-10000)、ELISA(1:2000-20000)
·高效无内毒素质粒大量提取试剂盒
编号:WE0167
英文名称:NoEndo Plasmid Maxi Kit
规格:2次|10次
本试剂盒提供一种简单快捷高效提取无内毒素质粒的新方法,在碱裂解法裂解细胞的基础上,采用独特的硅基质膜吸附技术,高效专一结合质粒DNA;同时采用特殊的缓冲液系统和除内毒素过滤器,有效去除内毒素、基因组DNA、RNA、蛋白等杂质。本试剂盒所得质粒纯度高、提取量大,特别适用于细胞转染,同时也可用于DNA测序,PCR,体外转录,内切酶消化等实验。
为什么使用本试剂盒?:内毒素是质粒提取中常见的污染物,由于真核细胞对内毒素非常敏感,因此,如果质粒中含有内毒素会大大降低真核细胞转染效率。
试剂盒组成:
| 组份 | 2次 | 10次 |
| Buffer P1 | 30ml | 125ml |
| Buffer P2 | 30ml | 125ml |
| Buffer E3 | 30ml | 125ml |
| Buffer PS | 15ml | 30ml |
| Buffer PW(浓缩液) | 10ml | 50ml |
| Endo-Free Buffer EB | 10ml | 30ml |
| RNase A(10 mg/ml) | 600μl | 2ml |
| 推柄 | 2个 | 10个 |
| 内毒素过滤器FQ | 2个 | 10个 |
| 吸附柱DQ及收集管 | 2套 | 10套 |
| 离心管(50ml) | 2个 | 10个 |
自备试剂:无水乙醇、异丙醇。
实验前准备及重要注意事项/strong>:
1、所有组分可在干燥、室温(15~30℃)环境稳定保存1年,将吸附柱置于2~8℃可保存更长时间,加入RNase A的Buffer P1 置于2~8℃可稳定保存6个月。
2、Buffer P1 在使用前先加入RNase A(将试剂盒中提供的RNase A 全部加入),混匀,置于2–8℃保存。使用前需在室温中放置一段时间,恢复至室温后使用。
3、第一次使用前应按照试剂瓶标签的说明在Buffer PW中加入无水乙醇。
4、使用前请先检查Buffer P2 和Buffer E3是否出现结晶或沉淀,如有结晶或沉淀现象,可在37℃水浴几分钟,即可恢复澄清。
5、注意Buffer P2和Buffer E3含有刺激性物质,请戴手套操作,使用后应立即盖紧盖子。
6、使用Buffer PS处理过的吸附柱最好立即使用,避免放置时间过长影响使用效果。
7、提取质粒的量和纯度与细菌培养浓度、菌株种类、质粒大小、质粒拷贝数等因素有关。
操作步骤:
1、取150ml过夜培养的菌液,加入离心管(自备)中,12000×g离心2-3分钟收集细菌,尽量吸弃全部上清。
2、向留有菌体沉淀的离心管中加入12ml Buffer P1(请先检查是否已加入RNase A),使用移液器或涡旋振荡器充分混匀,悬浮细菌沉淀。
注意:如果菌块未彻底混匀,将会影响裂解效果,使提取量和纯度偏低。
3、向离心管中加入12ml Buffer P2,温和地上下颠倒混匀8-10次,使菌体充分裂解,室温放置3-5分钟。此时溶液应变得清亮粘稠。
注意:温和混匀,不要剧烈震荡,以免打断基因组DNA,造成提取的质粒中混有基因组DNA片段。如果溶液未变得清亮,提示可能菌量过大,裂解不彻底,应减少菌体量。
4、向离心管中加入12ml Buffer E3,立即上下颠倒混匀8-10次,此时出现白色絮状沉淀,室温放置5分钟。12000×g离心10分钟,将上清全部倒入除内毒素过滤器中,慢慢推动推柄(Plungers)过滤,滤液收集在干净的50ml离心管(自备)中。
注意:Buffer E3 加入后应立即混匀,避免产生局部沉淀。
5、向滤液中加入0.3倍滤液体积的异丙醇,上下颠倒混匀。
注意:加入异丙醇过多容易导致RNA污染。
6、柱平衡:向已装入收集管中的吸附柱中加入2ml Buffer PS,12000×g离心2分钟,倒掉收集管中的废液,将吸附柱重新放回收集管中。
7、将步骤5中滤液与异丙醇的混合溶液转移到平衡好的吸附柱(已装入收集管)中。
8、6000-12000×g离心2分钟,倒掉收集管中的废液,将吸附柱重新放回收集管中。
注意:吸附柱的最大容积为15ml,所以第7步中所得溶液分多次过柱。如果离心机转子倾角较大时,建议加入吸附柱的溶液体积不超过10ml,以防发生漏液现象。
9、向吸附柱中加入10ml Buffer PW(请先检查是否已加入无水乙醇),6000-12000×g离心2分钟,倒掉收集管中的废液。
10、重复步骤9。
11、将吸附柱重新放回收集管中,12000×g离心5分钟,倒掉废液,将吸附柱置于室温数分钟,以彻底晾干吸附柱中残余的漂洗液。
注意:这一步的目的是将吸附柱中残余的乙醇去除,乙醇的残留会影响后续的酶促反应(酶切、PCR等)。
12、将吸附柱置于一个新的离心管中,向吸附膜的中间部位加入1-3ml Endo-Free BufferEB,室温放置2-5分钟,12000×g离心5分钟,将质粒溶液收集到离心管中。-20℃保存质粒。
注意:
1)为了增加质粒的回收效率,可将得到的溶液重新加入到吸附柱中,室温放置2-5分钟,12000×g离心5分钟,将质粒溶液收集到离心管中。
2)质粒拷贝数较低或>10 kb时,Endo-Free Buffer EB在65-70℃水浴预热,可以增加提取效率。
储存条件:室温(15~30℃)
北京低背景ECL化学发光检测试剂盒价格厂家关键词:cwECL Western Blot Kit,低背景ECL化学发光检测试剂盒,WE0307
F030711 BIOTIN标记羊抗乙肝核心抗原抗体 Polyclonal Goat Anti-HBcAg*BIOTIN
柠檬酸—柠檬酸*缓冲液(1mol/L,pH6.0) 100ml|500ml
BL1330 通用引物 Oligo T16
NF-257 冻干抗人PA血清
BOC-L-酪*酸 Erythromycin 3978-80-1
甲基纤维素溶液(2×,1.8%) 250ml
M0111 HRP标记物复合稳定剂
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Kodak F-5定影液 500ml
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北京低背景ECL化学发光检测试剂盒价格厂家关键词:cwECL Western Blot Kit,低背景ECL化学发光检测试剂盒,WE0307
SJ0820 *百里香酚蓝
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N-三(羟甲基)甲基-2-*基乙磺酸 PBS(Phosphate buffer saline) powdered 7365-44-8
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16423-68-0 赤藓红B(四碘荧光素)Erythrosin B
004000 牛血清白蛋白
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高分子量蛋白Marker(43-200KD) 20次
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北京低背景ECL化学发光检测试剂盒价格厂家
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