可调式易错PCR试剂盒现货

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百奥莱博专业生产销*(代"售")可调式易错PCR试剂盒现货，我公司供应的分子生物学试剂品类齐全，且具有优势价格，欢迎新老客户垂询订购。

名称：可调式易错PCR试剂盒现货
产地：国产|进口
编号：BTN160903
英文名：Controlled Error-prone PCR Kit
品牌：百奥莱博
易错PCR是利用Taq DNA多聚酶不具有3´→5´校对功能的特性，在一定条件下(如不同的dNTP浓度、Mg浓度和MnCl2存在)能够按较高的机率引入随机引入突变。如果有适当的选择方法，则可从构建的突变库选出所需突变体。易错PCR和常规PCR的比较如下：


产品特点：
1. 即开即用，十分简单方便，尤其在生物制药和酶学研究领域显示出了它的优越性。
2. 配方经过精心优化，实验人员在一定范围内可以控制突变率，一轮PCR的突变率范围在2-8突变/1000bp，更高的突变率可以通过多轮PCR达到。
3.可用于连续易错PCR，只需把上一次易错PCR的产物用作下一次易错PCR的模板即可，使每一次获得的小突变累积而产生重要的有益突变。
4.可以扩增的DNA片段更长，达到3kb，对于3kb以上的产物，建议分段扩增。

试剂盒组成：

 

成分	规格
Taq DNA聚合酶(5U/μL)	100μl
易错PCR专用dNTP 2.0,10×	300μl
易错PCR Mix 2.0,10×	300μl
易错PCR专用MnCl2	300μl
易错PCR专用dGTP	300μl
超纯水	1ml

储存条件：低温运输，-20℃保存，有效期为一年。

使用方法：

1. 将模板DNA稀释到1ng/uL。将引物稀释到10uM。
 注意：引物是决定易错PCR成败的关键因素，设计引物时要保证其Tm在70℃，长度在25-30nt之间，GC含量在45%-60%之间，3端GC含量低，并且没有发夹结构。
2. 根据每1000bp的预期突变数按下表确定易错PCR的反应条件中MnCl2和dGTP的用量。表中的A表示易错PCR专用的MnCl2，B表示易错PCR专用的dGTP：

预期突变数	2个	3个	4个	5个	6个	7个	8个
A的用量(μl)	0	1.0	2.5	4.0	4.0	4.0	4.0
B的用量(μl)	0	0	0	1.0	2.0	3.0	4.0

3.以30μL的标准PCR反应体系为例，如果反应体系不是30μL，各成分需要按等比例增加或减少。在一干净的PCR管中，加入下列成分
 注意：可以先计算出超纯水的用量，优先加水

成分	用量
超纯水	根据第2步加
易错PCR Mix,10×	3μl
易错PCR 专用dNTP，10×	3μl
易错PCR 专用MnCl2	根据上步
易错PCR 专用dGTP	根据上步
自备DNA模板(1ng/μl)	1μl
自备PCR引物(10μM each)	1μl each
Taq DNA聚合酶(5U/μl)	1μl

4. 按已经优化的PCR条件进行一定循环数的PCR(循环数与突变率的关系见下表)，然后取5μL电泳检查。如果没有优化的PCR条件，一般可以先尝试下面的PCR条件(对1Kb长的模板而言)：

PCR前变性	94℃ 3分钟
易错PCR(循环30次)	94℃ 1分钟
	45℃ 1分钟
	72℃ 1分钟

注：易错PCR一般不需要热启动，也不需要在PCR结束后做延伸处理。长度每增
加1Kb，时间延长1分钟。易错PCR循环次数决定每个核苷酸位置的突变几率，进而决定每个PCR产物可能的突变位点数，所以所需循环数由客户根据需要改动。
5.电泳检测是否得到预计长度的PCR产物。
6. 克隆片段进行功能筛选、或者克隆后进行测序分析突变率、或者用此轮PCR的产物为模板，进行下一轮的易错PCR。

疑难解答：
Q：现象：没有PCR产物。
A：可能原因：一是引物没有优化，可以重新设计引物；二是模板DNA太少，可以增加用量；三是模板不纯，最好先胶回收；四是溶解DNA的溶液中有EDTA，降低了PCR反应体系的Mg离子浓度，可以适当补加Mg离子。
Q：现象：太多的PCR条带或PCR条带模糊一片。
A：可能原因：一是PCR循环数太多；二是复性温度太低；三是延伸时间太长；四是引物没有优化，可以重新设计引物；五是PCR条件没优化，可以使用touch-down PCR；六是模板有其他DNA污染；七是DNA模板质量不高或者浓度太高。
Q：如果需要更高的突变率，如何办？
A：可以使用连续多次易错PCR来提高突变率。但最好先用胶纯化回收PCR片段,再用于下一轮易错PCR。此外不能用少于千分之一的第一次PCR产物作为第二轮易错PCR的模板，否则多样性将受到影响。第三轮易错PCR最好使用所有第二轮的PCR产物作为模板，但需要在10mL体系中完成(可以分成很多100μL体系进行)。


除可调式易错PCR试剂盒现货外，我公司正在打折促销以下产品：

·末端脱氧核苷转移酶(TdT酶)
编号：BTN120312
英文名称：Terminal Deoxynucleotidyl Transferase
规格：500U
末端脱氧核苷转移酶 TdT是一种模板非依赖型DNA聚合酶，催化在寡核苷酸、单链和双链DNA的3´-OH重复添加脱氧核糖核苷酸。TdT反应需要含有至少3个碱基的短序列作为引物。以RNA为模板时，TdT性能严格依赖于受体RNA 3´-末端的三级结构和核苷酸的种类。总的来说，TdT对RNA模板的作用效率比DNA模板低。

产品特点：
1．通过Okayama-Berg法给载体或cDNA加上互补同聚尾。
2．线性双链DNA的各类3´-OH末端同聚物加尾。
3．本寡聚脱氧核苷酸和DNA标记。
4．5´-RACE(快速扩增cDNA末端)。
5．凋亡反应的原位定位。

产品组成：

成份	规格
末端脱氧核苷转移酶	25μL(20U/μL)
5×反应 Buffer	0.4mL
使用手册	1份

储存条件：低温运输，-20℃保存，有效期一年。

活性定义：1个活性单位是指在37℃、60分钟内将1nmol脱氧核糖核苷酸掺入多聚核苷酸片段(吸附在DE-81上)所需的酶量。

使用方法：
1．建议按照下表添加如下反应成分
DNA 3´端加尾反应(20μL体系)：

5×反应Buffer	4μL
DNA片段	1pmol of 3´-ends
dATP or dTTP或dGTP or dCTP	130pmol或60pmol
末端脱氧核苷转移酶	1.5μl(30U)
补超纯水到	20μL

DNA 3´端加尾标记反应(50μL体系)：

5×反应Buffer	10μL
线性DNA	10pmol
标记的核苷酸(约10TBq/mmol)	1.85MBq
末端脱氧核苷转移酶	2μl(40U)
补超纯水到	50μL

2．37℃反应15 min。
3．70℃加热10分钟或添加2μL的0.5M EDTA溶液灭活酶，终止反应。


可调式易错PCR试剂盒现货关键词：可调式易错PCR试剂盒,Controlled Error-prone PCR Kit,BTN160903

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