BTN120310型T7 RNA聚合酶价格厂家

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名称：BTN120310型T7 RNA聚合酶价格厂家
规格：1000U
产地：国产|进口
编号：BTN120310
品牌：百奥莱博
英文名：T7 RNA Polymerase
T7 RNA聚合酶是一种高度特异识别T7启动子序列的DNA依赖的5´→3´RNA聚合酶，它可以催化单链或双链DNA T7启动子下游NTP的掺入，合成与T7启动子下游的模板DNA互补的RNA。

产品特点：
1．对于T7启动子有高度的特异性，用于体外RNA(含小RNA)的合成。
2．能识别修饰的NTP(生物素标记、地高*(代"辛")标记、荧光素标记的NTP)，可用于标记探针。
3．所得RNA可用于下列后续实验：核酸杂交、基因组DNA序列分析、核糖核酸酶保护测定、反义RNA合成，体外翻译，RNA剪接、RNA二级结构分析、RNA-蛋白质相互作用、核酸扩增、siRNA、miRNA等小RNA。

产品组成：

 

成分	规格
T7 RNA聚合酶(20U/μL)	50μl
5×反应缓冲液	250μl
说明书	1份

储存条件：低温运输，-20℃保存，有效期一年。

使用方法：

一、制备DNA模板(本试剂盒不含所需试剂，此处信息仅供参考)
PCR片段和质粒DNA都可以用作体外转录的模板，但是必须注意以下几点。
⑴必须使用线性化的DNA。如果是质粒DNA，则必须先用适当的限制性内切酶切成线状。
⑵ 需要转录的DNA序列的上游必须有T7启动子。如果模板是PCR产物，则可以在设计引物时将T7启动子序列(5´TAA TAC GAC TCA CTA TAG GG 3´)加上。如果是将DNA片段克隆到载体上，则需要选择有T7启动子的载体，并且克隆位点必须位于T7启动子下游。
⑶ 需要转录的DNA序列的下游端最好不要是3´突出。如果是3´突出(比如选择了Pst I来线性化质粒)，则最好用T4 DNA聚合酶修平。
⑷必须保证DNA模板中没有RNase。由于提取质粒DNA的过程中一般要使用大量的RNase A，因此质粒DNA一般都有严重的RNase A污染，所以在用作模板前，最好采取胶回收得方法回收质粒DNA。并且加入少量总RNA一起保温，然后电泳检测RNA是否被降解，以此来判断纯化的DNA模板是否有残留RNase A。

二、体外转录反应(本试剂盒不含除酶和反应液之外的相关试剂)
1．在一个RNase-free的塑料离心管中，在室温下(不是在4℃下)按次序加入下列成分：

成分	加入量	备注
DNA模板		如果使用质粒DNA,必须反复酚-*仿抽提去除残留的RNase,然后再乙醇沉淀质粒DNA
PCR片段	50ng左右
质粒DNA	1μg左右
RNase抑制剂
5×反应缓冲液	4μl	需室温时使用
NTP(2.5mM each)	4μl
T7 RNA聚合酶	0.5-1μL
RNase-free水	补水到20μL

注：此为20μL反应体系的用量，对其他反应体系，各成分的用量可以按比例增减。如果需要标记RNA探针，则需要订购NTP分开的试剂盒。如果需要得到加帽RNA，则需要加入自备的加帽修饰核苷酸。
2．37℃保温1-2小时。
 注意：延长保温时间并不能提高产量。
3．70℃加热10分钟灭活T7 RNA聚合酶。
4．取1-3μL电泳检测转录效果。一般1μg DNA可以合成5-10μg的RNA。
5．得到的RNA可以放-80℃保存。

三、如果需要去除DNA模板(仅产品不提供所需试剂)
1．在体外转录体系中加入1μL自备的RNase-free DNase(3-5U/μL)。
2．37℃保温15-30分钟。
3．补水到100μL。
4．用自备的等体积(100μL)的Tris饱和酚-*仿抽提一次去除残留的DNase和RNA聚合酶。
5．加200μL微量核酸沉淀剂(用前需要摇晃混匀)，振荡后15000rpm离心3～5分钟，弃上清。
6．加入1mL 75%乙醇，震荡10秒后15000rpm离心3～5分钟，弃上清。
7．短暂离心数秒，用枪头吸弃上清。晾干，所得沉淀即体外转录所得的RNA。可溶于RNase-free水中后立即使用或放-80℃长期保存。

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·RNase A溶液(10mg/mL)
编号：BTN3160
英文名称：RNase A Solution(10mg/mL)
规格：1.5mL
本产品是浓度为10mg/mL的RNase A溶液，不含DNase和蛋白酶活性，可以用于DNA提取(包括质粒DNA提取)时和蛋白质纯化时去除RNA污染。

储存条件：低温运输，-20℃保存，有效期一年。


·蛋白酶K溶液
编号：BTN80911
英文名称：Proteinase K Solution
规格：5mL
本产品是浓度为10mg/mL的蛋白酶K溶液，可以直接加入到各种溶液中降解其中的蛋白质。可以用于核酸纯化、原位杂交、DNA脉冲电泳和蛋白指纹图谱分析等实验。

储存条件：低温运输，-20℃保存，有效期一年。

·组织培养专用蛋白酶抑制剂
编号：BTN130531
英文名称：Protease Inhibitor for Tissue Culture
规格：1mL
本产品就是混合各种蛋白酶抑制剂而得的200×浓缩液，溶剂为DMSO。组织培养时，各种分泌蛋白会不同程度的被各种外源和内源性蛋白酶降解。为防止分泌蛋白的降解，需要在培养基中添加各种蛋白酶抑制剂。

产品特点：
1. 即开即用，不需要单独购买每个成分再配制。
2. 抑制谱广，由多种蛋白酶抑制剂组成，能特异性抑制丝*酸蛋白酶、半胱*酸蛋白酶、天门冬*酸蛋白酶及*基肽酶等各种蛋白酶活性。
3. 它可以与各种组织培养基兼容，在培养基中加入1/200体积即可。

储存条件：低温运输、-20℃保存、有效期两年。


BTN120310型T7 RNA聚合酶价格厂家关键词：T7 RNA聚合酶,BTN120310,T7 RNA Polymerase

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