23491-52-3型Hoechst 33342干粉促销

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百奥莱博专业生产销*(代"售")23491-52-3型Hoechst 33342干粉促销，我公司供应的分子生物学试剂品类齐全，且具有优势价格，欢迎新老客户垂询订购。

名称：23491-52-3型Hoechst 33342干粉促销
规格：10mg
产地：国产|进口
编号：BTN130865
Hoechst 33342是一种可透过细胞膜并对DNA染色的细胞核染色试剂，它在嵌入双链DNA后释放强烈的蓝色荧光。Hoechst 33342常用于细胞凋亡检测，染色后用荧光显微镜观察或流式细胞仪检测。Hoechst 33342-DNA的激发和发射波长分别为350nm和460nm。

CAS号：23491-52-3
分子式：C27H28N6O·3HCl
分子量：561.93

储存条件：低温运输，-20℃干燥避光保存，有效期一年。

关于23491-52-3型Hoechst 33342干粉促销的更详细说明，请致电我公司咨询，我们将以最饱满的热情为您提供解答，此外，我公司专业供应下列产品：

·植物RNA提取试剂盒(无酚无*仿柱式提取)
编号：BTN160906
英文名称：Plant RNA Column extraction kit(No phenol and no chloroform)
规格：50次
本试剂盒是在柱式植物RNA提取试剂盒(BTN71203)的基础上经过配方和流程优化得到的无*仿升级产品，它结合了植物RNA提取试剂盒的高效性、快捷性以及无*仿处理的安全性。

试剂盒特点：
1. 免酚和*仿处理，操作安全可靠。
2. 简单快速，处理一个样品只需要约十分钟。
3. RNA 纯度更高，平均 OD260/280一般都在2.0左右，能够有效去除大多数植物中的多糖污染。
4. 目前已测试过上百种植物。
5. 得到的RNA可直接用于RT-PCR、Northern杂交、cDNA 合成等实验。
6. 性价比高于进口的柱式植物RNA提取产品。

试剂盒组成：

 

成分	规格
溶液A	50ml
溶液B	50ml
离心吸附柱	50套
通用洗柱液	50ml
RNA 洗脱液	10ml
说明书	1份

储存条件：常温运输和保存，有效期一年。

使用方法：
1. 估算组织细胞的用量。每次微量提取一般需要100-200mg植物叶片、或50-100mg植物种子、或200-500mg植物果实。
2. 先将新鲜植物组织剪切成小块(保存在RNAhold中的植物组织需用纸吸去RNAhold液体后再剪切成小块)，放入10-15mL塑料离心管中，加入1mL溶液A，然后用匀浆器匀浆5-20秒。匀浆时会产生泡沫，但不影响提取效果。也可以使用液氮砚磨法破碎植物组织，砚磨完后加入1mL溶液A。注意：溶液A在4℃放置后可能会产生沉淀，使用前必须放在65℃水浴使沉淀彻底溶解并充分摇匀后再取用。
3. 将匀浆物或砚磨物转移至干净的1.5mL塑料离心管中(可以不必转移非液体的细胞碎片)。有的植物组织(比如果实)含有大量水份，匀浆液会多于1mL，转移时也只取1mL。
4.室温12000～15000g离心3～5分钟，管底沉淀为细胞破碎物。
5. 将上清液(约0.6mL)转移到另一干净的1.5mL塑料离心管中。
6. 加入等体积的溶液B，充分颠倒混匀。如果有沉淀产生(对某些植物，属于正常现象)，千万不要去掉沉淀，一定要把所有的混合物上柱。
7. 将一半的溶液(如果有沉淀，则先混匀)转移到离心吸附柱中，13000-15000g室温离心半分钟，弃穿透液。
8. 将剩下的一半溶液(如果有沉淀，则先混匀)转移到同一离心吸附柱中，13000-15000g室温离心半分钟，弃穿透液。
9. 加0.7mL 通用洗柱液，室温离心半分钟，弃穿透液。再加0.3mL 通用洗柱液，室温离心半分钟，弃穿透液。一般样品如此洗涤两次即可，但如果在第7 步加入溶液B后有沉淀产生，则需要洗三次，每次加入的通用洗涤液的量分别为0.4、0.3和0.3mL。
10.室温离心半分钟。此步十分重要，否则残留的乙醇会影响RNA的使用。
11. 将离心吸附柱转移到RNase-free 收集管中，加入50-100μL RNA 洗脱液，室温放置1-2分钟。
12. 13000-15000g室温离心半分钟，离心管中溶液即为RNA样品，可以立即使用或存放于-80℃待用。
13. RNA 完整性的电泳检测：如果需要做Northern杂交，强烈建议用户使用甲醛变性胶进行RNA电泳，因为非变性胶不能分离所有的RNA分子(BioTechniques，28：414，2000)。
14. RNA产量产率测定：将5-10μl RNA 溶于TE缓冲液中(pH7.5-8.2 之间)检测其在OD260的光吸收。通过光吸收可以得出RNA浓度(1 OD260的RNA=40μg/mL)，进而计算出RNA的产量(浓度X 体积)和产率(RNA产量/组织用量)。
15. RNA 纯度测定：无污染的总RNA的OD260/OD280一般在1.8-2.1 之间(具体数值与其碱基组成和溶液成分等多种因素有关)，高于此范围则分别表示样品可能有蛋白质污染，但一般不影响RT-PCR等反应。


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·考马斯亮蓝R-250染色液
编号：BTN140209
英文名称：Coomassie Blue R-250 Stain Solution
规格：250mL
考马斯亮蓝R250是最经典的SDS-PAGE染色方法，本产品就是基于此方法而开发的产品。

产品特点：
1．即开即用，不需要自己单独准备所有溶液。
2．不需昂贵仪器，肉眼即可观察结果，不象其他纳克级的染色方法需要贵重的仪器设备(如SYPRO系列的高灵敏度的荧光染料需要荧光成像系统)。
3．与普通扫描仪等兼容，便于保存数据和后续处理。
4．考马斯亮蓝R250 尤其适用于SDS-PAGE电泳微量蛋白质的染色。

产品组成：

成分	规格
染色液	250ml
脱色液	250ml×3
说明书	1份

储存条件：常温运输和保存，有效期一年。

使用方法：
1．按常规方法进行蛋白电泳。
2．凝胶电泳停止后，切除浓缩胶，转移分离胶至染色容器中。
3．倒入30-40mL染色液，摇床上缓慢震荡3-4小时。
4．弃掉染色液，加入30-40mL 脱色液脱色。
5．重复脱色2-3次，直至背景透明，条带更清楚。


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·SP6体外转录试剂盒
编号：BTN91107
英文名称：SP6 in vitro Transcription Kit
规格：50次
本试剂盒是基于SP6 RNA聚合酶的RNA体外转录试剂盒，它利用含有SP6启动子的模版DNA，以NTP为底物，从SP6启动子下游开始合成与模版DNA中一条链互补的RNA，简单快速获得大量的RNA分子。

产品特点：
1. 即开即用，用户只需提供含SP6启动子的DNA模板即可以进行体外转录实验，不需要单独准备每一个成份。
2. 单溶液预配液，减少加样次数，避免了操作误差，增加了可重复性。
3. 模版DNA可以是线性化的质粒DNA，也可以是PCR扩增产物。
4.可以合成的RNA的最佳长度在20nt到2000nt之间。
5.产品配方经过精心优化，每μg DNA模版可以合成2-6μg RNA。
 得到的RNA可以用于RNA 结构研究、核酶生物化学、体外翻译、RNA-蛋白质相互作用、反义技术、SELEX技术和RNA干扰(RNAi)等实验。

试剂盒组成：

成分	规格
转录预配液(2×)	0.5mL
阳性对照DNA(1.3 kb片段)	20μL(10 ng/μL)
SP6 RNA聚合酶混合液	50μl
RNase-free水	1ml
说明书	1份

储存条件：低温运输，-20℃保存，有效期一年。

使用方法：
一、制备DNA模板
PCR片段和质粒DNA都可以用作体外转录的模板，但是必须注意以下几点。一是必须使用线性化的DNA。如果是质粒DNA，则必须先用适当的限制性内切酶切成线状。二是需要转录的DNA序列的上游必须有SP6启动子。如果模板是PCR产物，则可以在设计引物时将SP6启动子序列(5´ATT TAG GTG ACA CTA TAG AGN G 3´)加上，转录其实是从3端G AGN G中的第一个G开始。如果是将DNA片段克隆到载体上，则需要选择有SP6启动子的载体，并且克隆位点必须位于SP6启动子下游。三是需要转录的DNA序列的下游端最好不要是3´突出。如果是3´突出(如选择了Pst I来线性化质粒)，则最好用T4 DNA聚合酶修平。四是必须保证DNA模板中没有RNase。由于提取质粒DNA的过程中一般要使用大量的RNase A，因此质粒DNA一般都有严重的RNase A污染，所以在用作模板前，最好采取胶回收得方法回收质粒DNA。并且加入少量总RNA一起保温，然后电泳检测RNA是否被降解，以此判断纯化的DNA模板是否有残留RNase A。
二、体外转录反应
1.在一个RNase-free的塑料离心管中，在室温下(不是在4℃下)按次序加入下列成分：

成分	加入量	备注
DNA模板	xμL	总量在50 ng-1μg(如果模板是PCR片段，建议用50 ng左右；如果模板是质粒DNA，建议用1μg左右；如果用本产品提供的阳性对照，建议用4μL)
SP6转录预配液(2×)	10μl	本成分还含其他促进剂，所以是混合物
RNase-free水	补水到20μL

注：此为20μL反应体系的用量，对其他反应体系，各成分的用量可以按比例增减。如果需要标记RNA探针，则需要订购NTP分开的试剂盒。如果需要得到加帽RNA，则需要加入自备的加帽修饰核苷酸(本公司有各种加帽修饰核苷酸)。
2. 37℃保温1-2小时。注意：延长保温时间并不能提高产量。
3. 70℃加热10分钟灭活SP6 RNA聚合酶。
4. 取1-3μL电泳检测转录效果。一般1μg DNA可以合成 5-10μg的RNA。
5. 得到的RNA可以放-80℃保存。

若需进一步去除DNA模板，可参考下列操作步骤，但所用试剂需另行购买，本试剂盒不提供。
1.在体外转录体系中加入3-5U自备的RNase-free DNase(BTN90903；3-5U/μL)。
2. 37℃保温15-30分钟。
3. 补水到100μL。
4. 用等体积(100μL)的Tris饱和酚-*仿抽提一次去除残留的DNase和RNA聚合酶。
5.在上清中加200μL自备的微量核酸沉淀剂(BTN50903；用前需要摇晃混匀)，振荡后15000rpm离心3～5分钟，弃上清。
6. 加入1mL 75%乙醇，震荡10秒后15000rpm离心3～5分钟，弃上清。
7. 短暂离心数秒，用枪头吸弃上清。
8. 晾干半分钟，所得沉淀即去除DNA模板后的RNA。可溶于RNase-free水中后立即使用或放-80℃长期保存。

疑难解答：
1. 没有RNA产物。最常见原因是模板有RNase污染，可用纯化的RNA跟模板DNA一起保温，再检测RNA是否降解。还可以增加RNase Inhibitor用量，本试剂盒缓冲液和酶混合液中有RNase inhibitor，如果模板RNase污染严重，可能需要用户补加RNase inhibitor。
2. RNA产量低。最常见的原因是DNA模板。在转录序列的第一个和第二个碱基最好都是G，在前14个碱基内避免有U存在。
3. RNA长度比预期的短。可能是模板序列中有SP6 RNA聚合酶的终止序列。可以改用SP6体外转录试剂盒(启动子也必须改成SP6启动子)。
4. RNA长度比预计的长。SP6 RNA聚合酶跟Taq DNA聚合酶一样，有不依赖于模板的加尾功能，最多有一半的RNA可以带一个或两个碱基的尾巴。如果RNA长度比预计的长很多，使用的模板又是质粒DNA，则可能是质粒DNA线性化不彻底。
5. 5´单磷酸还是三磷酸。如果使用GTP，则得到的RNA是三磷酸，体外转录时如果保温时间太长(如12小时)，则有50%的三磷酸会变成单磷酸。如果在转录体系中加入GMP，则SP6 RNA聚合酶将优先使用GMP，所得RNA产物中5´端是单磷酸的比例将大大增加。
6. 如何得到带帽RNA？需加入带帽NTP类似物即可，本公司提供5种供选择。

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