Benzonase核酸酶供应

特别声明：本产品及我公司所售其他产品均为科研类试剂产品，严禁用于药物、医疗及其他非科研用途。

百奥莱博专业生产供应Benzonase核酸酶供应，我公司销*(代"售")全品类的分子生物学试剂，价格优惠，欢迎广大科研工作者垂询订购。

名称：Benzonase核酸酶供应
规格：500U
产地：国产|进口
英文名：Benzonase Nuclease
品牌：百奥莱博
Benzonase是由粘质沙雷氏菌分泌的、由两个大小为26 kD的亚基组成的一种广谱核酸酶，由Benzon公司最先商品化，故名Benzonase。其活力比DNase I 强34倍，能以相同的效率酶切单联和双链DNA和RNA，将其消化成3-5 碱基长度(杂交限度以下)的5´-单磷酸寡核苷酸。其活性需要Mg2+，最佳pH在6-10 之间，最适温度在35-44℃。本产品是在野生型的Benzonase的基础上经过基因工程改进而得。

产品特点：
1．微量本产品就能高效降解所有形式(包括单链，双链，线性和环状)的DNA和RNA，尤其适合从细胞裂解物中去除核酸，降低样品粘度而不影响蛋白电泳图谱。
2．在有变性剂存在的条件下(如4M 尿素)还有活性，可以直接加入很多蛋白裂解液中。
3．降解核酸完全，符合FDA 关于核酸污染的处理规程，可以用于工业生产。
4．可以用于蛋白提取、2D凝胶电泳、Western Blot、免疫沉淀等实验。

储存条件：低温运输、-20℃保存，有效期两年。

活性定义：在标准反应体系内30分钟内使OD260改变1.0的酶量，相当于彻底降解37μg DNA的酶量。

使用方法：

一、酶的稀释
本产品浓度为1U/μL，如果需要稀释Benzonase，需要自备酶稀释液，稀释液的配方是：50mM Tris-HCl pH8.0，20mM NaCl，2mM MgCl2。
在稀释液中的Benzonase 只能在4℃放置数天。

二、用于去除核酸的标准试验(用户可以以此为参考设计自己的实验)将500ng鲑鱼精DNA 溶解在50mM Tris-HCl pH8.0，1mM MgCl2，0.1mg/mL BSA中，然后加入90U的Benzonase，37℃保温4小时，只剩下0.2ng可以杂交检测的DNA，如果23℃保温4小时，只剩下0.5 ng可以杂交检测的DNA。如果0℃保温4小时，只剩下1ng可以杂交检测的DNA。

三、用于降低E.coli 裂解液的粘度的标准试验(用户可以以此为参考设计自己的实验)
将7.5 g E.coli 悬浮于15mL悬浮液(10mM Tris-HCl pH9.0，1mMEDTA，6mM MgCl2)中，加入适量的本产品，然后将悬浮液经过弗氏压碎器破碎后迅速置于0℃冰上。

客户可以根据下表自行选择加入本产品的量

 

本产品在裂解液中的浓度	得到不粘稠裂解液所需孵育时间 (不粘稠是以得到可滴落的E.coli裂解液为标准)
0.24U/mL	＞60min
2.4U/mL	15min
8U/mL	5min
24.0U/mL	1.25min

答客问：
Q：什么情况下应该使用Benzonase核酸酶？
A：Benzonase核酸酶的应用领域包括：降低样品粘度以利操作(例如重组蛋白纯化，哺乳动物细胞裂解特下游要求粘度较低等情况)：减少存放的外周血单核细胞(PBMC)的结块现象，蛋白复性前高质量包涵体的制备，去除带负电荷的核酸对双向SDS-PAGE蛋白样品的影响。
Q：怎样灭活Benzonase核酸酶？如何去除？
A：采用EDTA螯合金属离子会可逆地抑制Benzonase活性，极端条件会造成不可逆失活，例如100mM NaOH，70℃处理30分钟等，Benzonase可以用色谱法从目的产物中分离出去，由于这种核酸内切酶极其稳定，建议在终产物中要求不含有核酸酶的应用中不要使用Benzonase。
Q：我的Benzonase核酸酶遗忘在桌上了，还能用吗？
A：根据破坏性稳定性测试，Benzonase 核酸酶非常稳定，即使在37℃下孵育数月仍能保持>90%的活性。
Q：我需要使用别的缓冲液，哪些条件是Benzonase 核酸酶必需的？哪些条件会降低它的活性？
A：Benzonase核酸酶的活性需要1-2mM Mg2+，而在单价阳离子浓度>50%，磷酸浓度>20mM，硫*(代"酸")铵浓度>25mM等情况下，Benzonase的活性会降低50%
Q：Benzonase核酸酶与蛋白酶抑制剂混合物兼容吗？
A：可以兼容，但是对于含有EDTA 配方的蛋白酶抑制剂混合物要特别小心，EDTA浓度大于1mM时会抑制Benzonase的活性。
Q：我的目的蛋白不溶，需要进行变性条件纯化，Benzonase 核酸酶能在尿素环境消化核酸吗？
A：实际上Benzonase核酸酶在有尿素(浓度可达6M)的情况下会增加活性，在尿素浓度为6M时活性先增加，随着时间处长活性又有降低。
尿素7M时，Benzonase核酸酶15分钟后出现变性并失活。但是在酶失活前多数核酸已经降解了。如果Benzonase 核酸酶的原浓度较高时会部分补偿7M 尿素的影响。

关于Benzonase核酸酶供应的更详细说明，请致电我公司咨询，我们将以最饱满的热情为您提供解答，此外，我公司专业供应下列产品：

·柱式真菌DNA大量提取试剂盒(玻璃珠法)
编号：BTN80926
英文名称：Fungus DNA Column large-scale extraction kit(Glass bead method)
规格：4次
本试剂盒在柱式真菌DNA提取试剂盒(BTN70901)基础上改良而得大提升级产品，主要用于大量快速从各种真菌材料中提取基因组DNA。

产品特点：
1.处理量大，一次可以处理1-3g 各种真菌组织。
2. 纯度高，OD260/280一般在1.8以上。不含污染和抑制剂，得到的DNA可以不经稀释直接用于酶切、PCR、real-timePCR、multiplex PCR、RAPD、RELP、AFLP、Southern Blotting，microsatellite analysis等各种后续分子生物学实验。
3. 采用玻璃珠法破碎细胞，属于物理方法，远比基于蜗牛酶或破壁酶的温和化学破壁法重复性好，也不容易带入外援真菌DNA。
4.产率一般在10-100μg/g真菌样品。离心吸附柱最大吸附量为800μg。
5. DNA片段长度一般在20-40kb左右。
6.适用范围广，适用于度大多数真菌材料，包括酵母(S.cerevisiae、S.pomb、Pichia pastoris)等。

试剂盒组成：

成分	规格
溶液A	40ml
溶液B	40ml
溶液C	100ml
大提离心吸附柱	4套
通用洗柱液	200ml
DNA洗脱液2.0	5ml
酸洗玻璃珠，400μm	40g
说明书	1份

储存条件：常温运输,4℃保存，有效期一年。

使用方法：
1. 对菌液：取60-100mL 过夜培养的真菌菌液(OD600一般在1以上)到干净的塑料离心管中，12000rpm离心2分钟弃上清留沉淀。
2. 对菌落：用接种针在在培养基上刮取尽可能多的真菌菌落(约1 g)，转移到装有20mL 无菌水的干净的塑料离心管中，洗涤下接种环上的菌体。12000rpm离心2分钟弃上清留沉淀。
3. 对孢子材料，一般取1-3g左右，直接加入到离心管中，在材料中加入无菌水20mL，振荡半分钟后12000rpm离心2分钟弃上清留沉淀。
4.沉淀中加入10mL溶液A和10 克的玻璃珠，涡旋震荡10分钟，可以延长震荡时间。
5. 加入10mL的溶液B，涡旋震荡5分钟，12000rpm离心2分钟，将上清液全部转移到一个50mL的干净的塑料离心管中。
6.在上清中加入3倍体积的溶液C，颠倒数次混匀后，分三次上离心吸附柱，每次上柱后均先室温放置2分钟，然后12000rpm离心1分钟，倒掉穿透液，再第二次上柱，重复上面的操作，直到挂柱步骤完成。
7. 将20mL 通用洗柱液加入离心柱，12000rpm离心1分钟，弃穿透液。
8. 重复上步操作一次。
9. 12000rpm 空甩1分钟去除残留液体。
10. 将离心柱放置在一新的50mL塑料离心管中，加入500μL DNA 洗脱液2.0。
11.室温放置5分钟后12000rpm离心1分钟，管底即为真菌DNA样品，吸取离心管中的DNA溶液重新滴加在吸附柱上，离心洗脱以收集更多的DNA。
12. 所得DNA可立即使用，也可长期保存在－20℃。
13. 注：如离心机转速不能达到12000rpm，可以用最大转速离心10-15min 代替12000rpm离心1-2min。


Benzonase核酸酶供应关键词：Benzonase核酸酶,Benzonase Nuclease,BTN101001


·*霉素干粉
编号：BTN60102
英文名称：Chloramphenicol Powder
规格：1g
*霉素是白色至微黄色针状结晶或片状结晶。分子式为C11H12Cl2N2O5，分子量为323.13。真空时升华。无臭,味苦。易溶于醇类,微溶于乙*(代"醚"),不溶于*、石油醚和植物油。水溶液呈中性。熔点150.5～151.5℃。在干燥时稳定，在弱酸性和中性溶液中较安定，煮沸也不见分解，遇碱类易失效。

结构式：


储存条件：常温运输、4℃保存、有效期一年。

·EDTA溶液
编号：BTN131181
英文名称：EDTA Solution
规格：1mL
本产品是0.2M EDTA溶液，专用于终止各种需要*离子的酶反应。

储存条件：低温运输和-20℃保存、有效期一年。

·大提柱式动物DNA提取试剂盒
编号：BTN80923
英文名称：Animal DNA Column large-scale extraction kit
规格：4次
本试剂盒在柱式动物DNA提取试剂盒(BTN71206)基础上改良而得的大提升级产品，主要用于大量快速提取新鲜或冷冻的动物组织中的基因组DNA。

产品特点：
1.处理量是柱式动物DNA提取试剂盒的10-20倍。
2. DNA 纯净，大多数DNA样品的OD260/280 值在1.8-1.9之间，无可见的RNA污染，可直接用于PCR、酶切、杂交等后续反应。
3. DNA产率一般在0.5-2mg/g(具体跟组织有关)。
4.快速，整个过程室温操作约需20分钟。
5. 安全无毒，本试剂盒对人体无毒，无腐蚀性和刺激性气味。

试剂盒组成：

成分	规格
溶液A	100ml
溶液B	100ml
大提离心吸附柱	4套
通用洗柱液	100ml
DNA洗脱液	10ml
说明书	1份

储存条件：常温运输及保存、有效期一年。

使用方法：
1.溶液A和溶液B在放置在4℃放置可能会产生沉淀，用前需要在65℃水浴中加热直到沉淀全部溶解，用前还需要充分摇匀。
2. 估算组织细胞的用量。每次大量提取一般需要1-5g动物组织、剪切成小块。
3. 先将剪切成小块的动物组织，放入50mL塑料离心管中，加入25mL溶液A，然后用匀浆器匀浆。匀浆时会产生泡沫，但不影响提取效果。
4. 65℃保温5分钟。
5. 12000～15000g室温离心3～5分钟。
6.小心将上清液转移到一新的50mL塑料离心管中。
 注意：下面第7-9 步的*仿抽提操作可以省略，直接进入第10 步，但DNA的产量会低30%左右，OD260/280不受影响。
7. 加入5mL的自备*仿，振荡器上充分振荡混均30秒。
8. 12000～15000g室温离心3～5分钟。
9.小心将上清液转移到一新的离心管中。
10. 加入等体积的溶液B，充分混匀。
11.一次或分两次上柱，每次上柱后室温放置2分钟。12000～15000g室温离心半分钟，弃穿透液。
12. 加25mL 通用洗柱液到离心吸附柱中，12000～15000g室温离心半分钟，弃穿透液。
13. 重复上步一次。
14. 12000～15000g室温再离心半分钟。此步十分重要，否则残留的通用洗柱液会污染DNA。
15. 将离心吸附柱转移到一新的50mL塑料离心管中，加入1mL 通用洗脱液。
16.室温放置离心吸附柱1-2分钟。
17. 12000～15000g室温离心半分钟，离心管中溶液即为DNA样品，可以立即使用或存放于冰箱待用。


Benzonase核酸酶供应关键词：Benzonase核酸酶,Benzonase Nuclease,BTN101001


·印迹膜抗体稀释液
编号：BTN81208
英文名称：Antibody Dilution Buffer
规格：250mL
本产品用于稀释Western Blot抗体，即开即用，方便快捷。

产品组成：

成分	规格
抗体稀释液成分一	100ml
抗体稀释液成分二	0.5g
说明书	1份

储存条件：常温运输，4℃保存，有效期一年。

使用方法：

一、转膜(湿法电转移，本产品不含相关试剂)
1．制备湿法电转液：将湿法电转液干粉全部溶解在1L去离子水中得20×湿法电转液，用时用去离子水稀释20倍预冷待用。
2．根据PAGE胶的大小剪切同样大小的滤纸和各边都大1mm的硝酸纤维素膜(以下简称膜)。避免手直接接触膜。
3．将切好的膜浸泡在新鲜稀释的1×湿法电转液(下简称转移液)中15-20分钟。
 注意：最好用镊子夹住膜的一边轻轻置于转移液上，只让膜下层不转移液接触，通过毛细管作用使整个膜浸湿。避免让膜沉入转移液中，否则膜不转移液之间形成的气泡会阻止膜的湿润。
4．在容器中将两块海绵垫、六层滤纸用转移液浸湿。
5．在转移夹上依次放上一张浸湿的海绵垫、三层浸湿的滤纸、一块PAGE胶(只要分离胶部分)、一张浸湿的膜、三层浸湿的滤纸、一张浸湿的海绵垫。
 注意：每叠加层一定要用玻棒来回擀几遍以擀走里面的气泡。膜两边的滤纸绝对不能相互接触，否则电转移时会发生短路，烧坏装置。
6．合起转移夹幵放入转移槽中(一定要注意方向，转印带负电荷的蛋白质时电极方向是膜正胶负；转印带正电荷的蛋白质时，电极方向是膜负胶正)，然后用预冷的转移液灌满转移槽。
7．插上电极，一般在冷却条件下用100V恒压转移30-60分钟或冷室中14V转移过夜。
 注意：一定要检查电流的大小，电流一般在0.1-0.4A。应根据蛋白分子量的大小确定转膜时间，对于小分子量的蛋白，转膜时最好垫2张或更多张膜(最多可10 张)，即使白质已经转过了第一张膜，还会在其它膜上检测到；对于大分子量的蛋白，转膜时电压要高一点，时间也要延长一点，开始最好也用两块或多张膜。转移时间长的时候特别要注意加强降温措施。如果目的蛋白转移效率低，可以在转移液中加终浓度为20%的甲醇或0.1%的SDS。
8．终止转移后，取出膜，幵在膜上剪去一个小角以标记方向。如有必要可用自备的各种染液对胶或膜进行染色以确定蛋白质转移效率。

二、封膜(本产品不含相关试剂)
1．将膜转移至杂交袋中，加5-10mL Western封膜液后热密封杂交袋开口。
2．室温下用脱色摇床摇动杂交袋30-60分钟。

三、与一抗二抗结合
1．用5mL Western抗体稀释液(配制方法：将抗体稀释液成分二干粉到入成分一溶液中，溶解后即可。未用完的抗体稀释液需-20℃保存)将自备的一抗稀释至适当的倍数(一般需要稀释10-100000倍使用，最佳稀释倍数跟一抗效价相关，需摸索)。
2．剪开杂交袋的一角，倒去封膜液，加入5mL新鲜稀释的一抗溶液，加热密封杂交袋开口。
3．室温下在脱色摇床上摇动杂交袋30-60分钟。
4．用抗体稀释液将自备的HRP或AP标记的二抗稀释至适当浓度(一般需要稀释500-4000倍。最佳稀释倍数跟二抗效价相关，需摸索)。
5．剪开杂交袋的一角，倒去一抗溶液(可留存)，加入5mL新鲜稀释的二抗溶液，加热密封杂交袋开口。
6．室温下在脱色摇床上摇动杂交袋30-60分钟，也可过夜孵育。
7．剪开杂交袋的一角，倒去二抗溶液(可留存)。
8．剪开杂交袋，用镊子取出膜，用Western洗膜液在器皿中洗3次，每次10分钟。
9．根据二抗的标记酶选择下面两种显色方法之一。

四、HRP显色检测(对HRP标记的二抗，本产品A型，本产品不含相关试剂)
1．将膜平放，在吸附了抗原抗体的一面加入100-500μL TMB溶液A和100-500μL TMB溶液B，铺满整个膜表面(具体用量可按膜的大小增减)。
2．置于平式摇荡仪上，在室温下孵育2至5分钟，直至深蓝色条带出现。
3．用镊子夹起膜，放入去离子水中洗膜3次终止反应，每次30分钟。
4．空气中晾干后照相保存。
 注意：膜显色后的颜色在数小时后将会褪色，不能永久存在，故需要及时照相。

五、AP显色检测(对AP标记的二抗，本产品B型，本产品不含相关试剂)
1．用新鲜配制的1×AP缓冲液洗涤硝酸纤维素膜5分钟。
2．将膜转移到新配制的BCIP-NBT法AP显色液中，每cm2膜需要0.1mL显色液。新鲜配制BCIP-NBT法AP显色液(以10mL为例)的方法：将9mL去离子水、1mL 10×AP缓冲液、50μl BCIP溶液和50μl NBT溶液混匀。此溶液必须在1小时内使用。
3．室温摇晃5-30分钟显色(37℃可加速反应)。
4．显色到合适程度后用自备去离子水洗膜3次终止反应，每次30分钟。
5．用吸水纸吸干膜上的水分，避光干燥保存或在一周内照相。

六、Western抗体清除剂(说明：此处理可能会使蛋白质失去某些表位，本产品不含相关试剂)
1．将膜浸泡在Western抗体清除剂中，70℃摇晃孵育30分钟，去除一抗和二抗。用Western洗膜液洗膜两次，每次10分钟。
2．膜即可用于下一次Western检测的膜封堵步骤。

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