柱式植物叶绿体DNA提取试剂盒说明书

特别声明：本产品及我公司所售其他产品均为科研类试剂产品，严禁用于药物、医疗及其他非科研用途。

百奥莱博专业生产供应柱式植物叶绿体DNA提取试剂盒说明书，我公司销*(代"售")全品类的分子生物学试剂，价格优惠，欢迎广大科研工作者垂询订购。

名称：柱式植物叶绿体DNA提取试剂盒说明书
产地：国产|进口
英文名：Plant Chloroplast DNA column extraction kit
编号：BTN120406
品牌：百奥莱博
本试剂盒是结合植物叶绿体纯化试剂盒和柱式植物DNA抽提试剂盒而推出的新兴产品,专门用于植物叶绿体DNA的快速提取。

试剂盒特点：
1. 纯度高,不含污染和抑制剂,可以直接用于酶切、PCR、real-time PCR、 mμLtiplex PCR、RAPD、RFLP、AFLP、Southern Blotting，microsatellite analysis等各种后续分子生物学实验,不会发生离心柱堵塞现象。
2.产率一般在1-2μg/1g叶片样品。OD260/280一般在1.8以上。DNA片段长度一般在40-50Kb左右。
3. 本产品足够15次提取,每次可处理30g叶片。
4. 已经成功用于菠菜,大豆,莴笋,白菜,烟草和甜菜等双子叶植物,也适用于单子叶等其他植物(可能需要优化条件)。

试剂盒组成：

 

成分	规格
叶绿体纯化匀浆液成分一	250mL×2
叶绿体纯化匀浆液成分二	3g
Percoll	60mL
带柄尼龙滤膜	1个
叶绿体DNA纯化溶液A	15mL
叶绿体DNA纯化溶液B	7.5mL
叶绿体DNA纯化溶液C	30mL
离心吸附柱	15套
通用洗柱液	15mL
DNA洗脱液2.0	10mL
说明书	1份

储存条件：常温运输和保存(但匀浆液成分二长期保存时需要放4℃)，保存期限一年。

使用方法：
注意：叶绿体对温度高度敏感,所以整个操作必须在冰上或者在冷室进行,所用器皿和溶液均需要在4℃预冷。离心时一定要在4℃进行,离心力以g而不是rpm计算。如果需要研究叶绿体的功能,提取还需要在昏暗的光线条件下进行。强烈建议用显微镜监控整个过程中叶绿体的回收情况。

一：叶绿体的纯化
1.实验前1-2天将植物放在暗室培养以减少叶绿体中淀粉颗粒的形成,否则离心时这些颗粒很容易使叶绿体破裂。叶片在实验前需先用自来水洗净,再用蒸馏水淋洗,去掉多余水分。如果叶片采集后不能立即处理,则保存时需要保持叶片湿润,即使如此,叶片的放置时间也不能超过一天。
2.计算实验所需叶绿体匀浆液的体积(下面简称匀浆液),本试剂盒一次实验可处理30 g叶片,对一般植物,每克叶片需要准备4mL匀浆液,则一次实验需要准备120mL匀浆液。对烟草和大豆,每克叶片需要6mL匀浆液,则一次实验需要准备180mL匀浆液。为了保险可以多配10%。
3.实验当天制备匀浆液。制备方法是：将自备的去离子水与试剂盒提供的匀浆液成分一在干净的玻璃或塑料容器中按4：1的比例混合,然后在每100mL混合液中加入匀浆液成分二干粉0.1g(终浓度为0.1%),轻柔搅拌10分钟后,所得溶液即为匀浆液。冰上预冷待用。匀浆液只能当天使用,不能放置。
4.预留1.5mL用于悬浮叶绿体,其余匀浆液转移到Waring匀浆机(即家用制备果汁的匀浆机)中,再快速将新鲜植物叶片的叶脉去除,再将叶片剪成1-3cm2大小的碎片,浸泡在匀浆机里面的匀浆液中。
5.低速匀浆10秒,避免起泡沫。用玻璃棒把液面的叶碎片按入到匀浆机底部,再低速匀浆10秒。
 注意：还可用Dounce玻璃匀浆器,Polytron匀浆机和研磨(加玻璃珠)等匀浆,但它们单次处理量小,需分成很多份处理后再汇集,非常不方便。
6.用带柄尼龙滤膜过滤匀浆液,用预冷的200mL量筒收集穿透液,再等分到4个预冷的50mL的塑料离心管中(每个管中的穿透液不要超过35mL)。带柄尼龙滤膜洗涤干净后可反复使用。
7.在水平转子离心机上4℃ 200g离心3分钟(对菠菜,白菜和莴笋材料)或400g离心1分钟(对甜菜材料),白色沉淀为未破裂的细胞或细胞核。其他植物材料则需要用户自己摸索最佳离心力。
8.将上清液(含叶绿体)转移到一个新的、预冷的50mL塑料离心管中。
9.在水平转子离心机上4℃ 1000g离心7分钟,小心弃上清,沉淀含叶绿体。
10.在沉淀中加入1.5mL预冷的匀浆液,手弹离心管底部使叶绿体重悬。
 注意：重悬时最好避免溶液起泡,也不要用枪头吹打,否则叶绿体容易破裂。沉淀下有白色淀粉属于正常现象,但重悬叶绿体时避免将白色淀粉重悬。
11.将4管叶绿体重悬液汇集(共约6mL),得到叶绿体粗提液。
12.如果对叶绿体DNA是否含细胞核DNA的要求不高,则叶绿体粗提液可以直接用于叶绿体DNA纯化,具体操作是在水平转子离心机上4℃ 1000g离心7分钟,小心弃上清,沉淀为叶绿体,直接用于DNA纯化(见步骤二)。
13.如果需要无细胞核DNA污染的叶绿体DNA,则按以下流程操作：在50mL塑料离心管中先加入6mL匀浆液成分一和4mL的Percoll,充分混合均匀得到40%的Percoll溶液,在其液面上小心铺上6mL的叶绿体粗提液,在水平转子离心机上4℃ 1700g离心6分钟,管底绿色沉淀为完整的叶绿体,液面的绿色部分为破碎的叶绿体。小心将上清去除后,直接将沉淀(完整叶绿体)用于叶绿体DNA纯化(见步骤二)。

二：叶绿体DNA的纯化(溶液A和溶液B容易产生沉淀,溶液B十分粘稠,均需65℃溶解并摇匀后待用)
14.将600μL预热的溶液A加入到叶绿体沉淀中后充分吹打混匀。
15.加入300μL预热的溶液B,震荡混匀10-30秒。
 注意：溶液B非常粘稠,可以采取称量方法称取300mg(约等于300μL)使用或将1mL枪头剪去一截后再吸取300μL使用。
16.65℃放置3～5分钟。如果室温放置,DNA产量会降低10-20%。
17.加入200μL自备*仿,震荡混匀10-30秒。
18. 12000rpm室温离心2分钟。此时上清液将变得透明,中间层有白膜。小心转移上清液(约0.8mL)到一个新的3-5mL离心管中,避免触及中间层的白膜,可留少量上清不取。
19.加入1.5倍体积(约1.2mL)的溶液C,颠倒混匀后先转移0.7mL到离心吸附柱中,室温放置至少2分钟。12000rpm室温离心1分钟,DNA将吸附在离心吸附柱的膜上,倒弃收集管中的穿透液。
20.再将剩余的溶液按上步方法上柱。
21.将0.5mL通用洗柱液加入到吸附柱中,12000rpm室温离心1分钟,弃穿透液。重复操作一次。空甩半分钟去除残留液体。
22.将离心吸附柱放置在一新的1.5mL塑料离心管中,加50-100μL DNA洗脱液2.0,室温放置3～5分钟。
23.12000rpm室温离心1分钟即得植物叶绿体DNA溶液,直接取5-10μL电泳检测,其余放冰箱备用。

关于柱式植物叶绿体DNA提取试剂盒说明书的更详细说明，请致电我公司咨询，我们将以最饱满的热情为您提供解答，此外，我公司专业供应下列产品：

·胰蛋白酶(质谱级)
编号：BTN131029
英文名称：Trypsin，MS Grade
规格：100μg
胰蛋白酶是丝*酸蛋白酶，可特异性地切开赖*酸和精*酸残基的羧基端。胰蛋白酶这种严格的特异性是蛋白质鉴定的基础。天然胰蛋白酶易于自我水解，产生假胰蛋白酶，后者特异性较广，含有胰凝乳蛋白酶样活性。存在于胰蛋白酶制剂中的这些自我水解产物能产生多余的肽片段，从而干扰质谱检测到的片段的数据分析。

本产品是质谱分析级胰蛋白酶，其能提供最大限度的灵敏度。胰蛋白酶中的赖*酸残基已经过还原甲基化修饰，成为活性高且稳定的分子，抗拒自我水解的性能特别强。纯化的胰蛋白酶的特异性又由于TPCK处理使胰凝乳蛋白酶失活而进一步提高。处理过的胰蛋白酶经过亲和层析纯化，制成冻干粉。本产品能够用于胶内消化、溶液中酶解和质谱分析等实验。

产品特点：
➤ 纯度高，使用TPCK处理过，并经亲和纯化得到。
➤产品质量稳定，每批都经过质谱检测。
➤ 方便使用，以小瓶提供。
➤ 价值高，保证5次冻融循环后，性能稳定，这样使残余试剂量最小。

储存条件：低温运输，-20℃保存，有效期一年。干粉溶解在50mM醋酸中后，-20℃保存。若要长期储存，将溶解的胰蛋白酶存于-70℃。将冻融循环限制在5次以内。

使用方法：(溶液中酶解实验举例)
1．将目的蛋白溶解在6M guanidine HCl(or 6～8M urea or 0.1% SDS)，50mM Tris-HCl(pH8)，2–5mM DTT(or β-mercaptoethanol)的溶液中。
2．95℃加热15–20分钟或者60℃加热45–60分钟，自然冷却。
3．分析变性蛋白质时，加入50mM NH₄HCO₃(pH7.8)or 50mM Tris-HCl，1mM CaCl₂(pH7.6)，使guanidine HCl or urea终浓度至少为1M。如果上步已经加入SDS，可以不加入NH4HCO3。分析非变性蛋白质时，将蛋白样品溶解在pH为7-9的缓冲液内即可。
4．加入胰蛋白酶，使胰蛋白酶：蛋白质=1:100～1:20(w/w)。37℃孵育至少1小时。将反应体系移至-20℃或者加入胰蛋白酶抑制剂TCA(终浓度10%)终止酶反应。也可以将反应溶液的pH降到4.0以下，终止酶反应。
5．反相HPLC或者SDS-PAGE分析酶解反应结果。


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·96孔板质粒DNA提取试剂盒(真空法)
编号：BTN130994
英文名称：Plasmid DNA extraction kit(96-well plates)(Vacuum method)
规格：1次

·柱式分枝杆菌RNA提取试剂盒
编号：BTN130845
英文名称：Mycobacteria RNA Column extraction kit
规格：50次

·棉蓝乳酚油染色液
编号：BTN150802
英文名称：Lactic Acid Phenol Cotton Blue Staining Solution
规格：250mL
霉菌是形成分枝菌丝的真菌的统称，意即“发霉的真菌”，它们往往能形成分枝繁茂的菌丝体，但又不象蘑菇那样产生大型的子实体。霉菌菌丝较粗大、孢子容易在空气中飘散，所以制标本时常用棉蓝乳酚油染色液。

棉蓝乳酚油染色液特点：细胞不变形，具有杀菌，且不易干燥，能保持较长时间，是霉菌菌丝、孢子的形态常分类的重要依据。

储存条件：常温运输，避光保存，有效期一年。

使用方法：
1．涂片：载玻片编号，于载玻片中央滴加2~3滴棉蓝乳酚油染色液。
2．用灭菌接种环或牙签等器具取一小块有颗粒或颜色部分真菌菌落。
3．放入载玻片上的棉蓝乳酚油染色液中，混匀。
4．加盖洁净的盖玻片，轻轻按压制成压片。
5．光学显微镜在低倍、高倍或油镜下观察真菌形态。
6．染色结果：真菌(尤其是烟曲霉菌)中孢子与菌丝是呈蓝色的，背景为淡蓝色。待检细菌培养时间会影响染色，菌落培养时间过长或已死亡或细菌溶解，染色结果都常呈阴性反应。


柱式植物叶绿体DNA提取试剂盒说明书关键词：柱式植物叶绿体DNA提取试剂盒,Plant Chloroplast DNA column extraction kit,BTN120406

BOC-L-脯*醇 Nitrofurantoin 69610-40-8
ARB12581 大鼠凋亡诱导因子(AIF)elisa检测说明书 Rat apoptosis inducing factor,aif ELISA KIT
ARB11470 人胰岛素样生长因子2(IGF-2)ELISA检测服务 Human insulin-like growth factors 2,igf-2 ELISA KIT
乙酸龙脑酯 IAA 5655-61-8
87915-38-6 Dextran Blue 2000  蓝色葡聚糖 2000
ARB13183 小鼠胰岛素自身抗体(IAA)Elisa定量检测 Mouse insulin autoantibodies,iaa ELISA KIT
ARB11171 人单核细胞趋化蛋白2(MCP-2/CCL8)免费代测 Human monocyte chemotactic protein 2,mcp-2 ELISA KIT
ARB13475 鸡表皮生长因子(EGF)酶联免疫定量检测 Chicken epidermal growth factor,egf ELISA KIT
ARB10781 人抗弓形体IgM抗体(Anti-tox IgM)检测服务 Human anti-toxoplasma igG antibody,anti-tox igG ELISA KIT
四丁基硫*(代"酸")*铵 DL-Serine methyl ester hydrochloride 32503-27-8
ARB12257 大鼠血管舒缓激肽(BK)elisa检测 Rat bradykinin,bk ELISA KIT
停影液   500ml
ARB13162 小鼠载脂蛋白E(Apo-E)elisa检测操作说明书 Mouse apolipoprotein e,apo-e ELISA KIT
ARB13549 兔子α2抗纤溶酶(α2-AP)Elisa定量检测 Rabbit α2-antiplasmin,α2-ap ELISA KIT

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