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- 详细信息
- 技术资料
- 库存:
447
- 英文名:
One-Stop Protein Native PAGE Pack(C)
- 保质期:
一年
- 供应商:
北京百奥莱博科技有限公司
- 保存条件:
常温运输和保存(上样液需-20℃
特别声明:本产品及我公司所售其他产品均为科研类试剂产品,严禁用于药物、医疗及其他非科研用途。
北京BTN81212C型一站式蛋白质非变性PAGE电泳套装(低pH)厂家由专业试剂供应商北京百奥莱博提供,用于科研目的生化试验项目,本产品质量好,且极具价格优势,深为用户称道,了解更多一站式蛋白质非变性PAGE电泳套装(低pH)等蛋白质研究产品请联*(代"系")我司咨询订购。
名称:北京BTN81212C型一站式蛋白质非变性PAGE电泳套装(低pH)厂家
品牌:百奥莱博
英文名:One-Stop Protein Native PAGE Pack(C)
规格:30次
产地:国产|进口
非变性聚丙*(代"烯")酰胺凝胶电泳(Native PAGE)是目前电泳法分离活性蛋白的主要方法之一,跟SDS-PAGE根据分子量大小分离蛋白质不同,它是根据蛋白质分子大小、形状、电荷密度三个主要参数分离蛋白质。由于蛋白质的pI各不相同,所以对不同蛋白质需要选用具有不同pH的电泳体系。单独配制不同pH的Native PAGE电泳胶十分繁琐,为此本公司开发了本产品。
产品特点:
1.即开即用,不需单独准备各种成分,十分方便。还免去了实验人员接触粉末状的剧毒物品丙*(代"烯")酰胺
2.非变性,电泳过程中蛋白质保持天然的构象和亚基之间的相互作用,得到的蛋白质一般都具有生物活性(而SDS-PAGE得到的蛋白没有活性)。
3.可用于分析蛋白质和DNA或RNA的相互作用、蛋白修饰、蛋白构型改变、回收有活性蛋白质等试验。
4.电泳后可直接用于考染、银染、Western杂交等实验。
5.提供具有3种不同pH的缓冲液套装,便于客户选择最适合的缓冲液体系。
产品组成:
| 成分 | 规格 |
| 丙*(代"烯")酰胺干粉 | 60g |
| 甲叉双丙*(代"烯")酰胺干粉 | 3g |
| TEMED | 1.5ml |
| 过硫*(代"酸")铵干粉 | 1g |
| 高中低缓冲液套装选一 | ABC之一(见下) |
| 说明书 | 1份 |
| 高pH缓冲液套装(只有BTN81212A有此成分) | |
| 高pH浓缩胶配胶液(pH6.7),4× | 100ml |
| 高pH分离胶配胶液(pH8.9),4× | 200ml |
| 高pH电泳液(pH8.3) | 10L(干粉) |
| 高pH上样液,5× | 1ml |
| 中pH缓冲液套装(只有BTN81212B有此成分) | |
| 中pH浓缩胶配胶液(pH5.5),4× | 100ml |
| 中pH分离胶配胶液(pH7.5),4× | 200ml |
| 中pH电泳液(pH7.0)干粉A | 55.2g |
| 中pH电泳液(pH7.0)干粉B | 10g |
| 中pH上样液,5× | 1ml |
| 低pH缓冲液套装(只有BTN81212C有此成分) | |
| 低pH浓缩胶配胶液(pH6.7),4× | 100ml |
| 低pH分离胶配胶液(pH4.3),4× | 200ml |
| 低pH电泳液(pH4.5) | 10L(干粉) |
| 低pH上样液,5× | 1ml |
注:高、中和低pH缓冲液套装里面均含100mL浓缩胶配胶液、200mL分离胶配胶液、10 L电泳液(干粉)和1mL上样液,只是pH不同。
储存条件:常温运输和保存(上样液需-20℃保存),保存期为一年。
使用方法:
如何选择缓冲液?
高pH浓缩胶,高pH分离胶,高pH电泳液和高pH上样液一定要配套使用。中pH和低pH系列也是如此,绝不能高pH的成分跟其他pH的交叉使用。选择适当pH的缓冲液(包括上样液,电泳液,配胶液等)对蛋白质非变性PAGE非常重要,缓冲液的最佳pH又跟目的蛋白质的pI值密切相关。如果pH远离pI,则蛋白质分子带电多(电荷密度大),电泳速度快,分辨率高。但过酸过碱又容易使蛋白质结构变性,失去活性,所以最佳pH条件就是在电泳分辨率和维持活性之间寻找平衡,需要针对每种蛋白质进行摸索或通过滴定曲线来确定,没有通用的电泳缓冲体系。由于有近半数的蛋白质pI在4-6.5,所以在不知道目标蛋白的pI时,可以先选用高pH缓冲系统。
一、配制分离胶
1.确定浓度。对分子量在100Kd以上的蛋白质,可选用3-5%的胶;对分子量在20-150KD之间的蛋白质,可选用5-10%的胶;对分子量在10-80KD之间的蛋白质,可选用10-15%的胶。对未知样品,建议使用7.5%的胶。
2.配制10%的APS(过硫*(代"酸")铵):按每0.1克过硫*(代"酸")铵干粉加1mL去离子水的比例配制10%的APS溶液,该溶液可以在4℃存放一周。
3.配制30%丙*(代"烯")酰胺-甲叉双丙*(代"烯")酰胺(19:1)溶液:在本产品提供的装有60克丙*(代"烯")酰胺干粉的塑料瓶中加入146mL自备的去离子水和3g甲叉双丙*(代"烯")酰胺,充分摇晃直到溶解(约需10-20分钟)即得200mL 30%丙*(代"烯")酰胺(19:1)溶液。此溶液最好在一个月内用完,必须4℃避光保存。
4.配10mL分离胶(如果配制其他体积,请按比例调节各成分用量):在一个25mL的三角瓶中,先加入4.2mL去离子水、3.3mL 30%丙*(代"烯")酰胺-甲叉双丙*(代"烯")酰胺(19:1)溶液和2.5mL 4×分离胶配胶液。
5.摇晃混匀后抽真空10-15分钟以去除溶液中的氧气(氧气能抑制丙*(代"烯")酰胺聚合反应,不去除的话将影响丙*(代"烯")酰胺聚合反应)。
6.加入50μL新配制的10%APS和10μL TEMED(这是配制10mL胶的用量,配制更大体积的胶则按比例增加),迅速摇匀后倒胶。注意:如果购买的是低pH缓冲系统,由于在低pH缓冲液中PAGE聚合速度降低,所以需要增加上述两成分的用量。
7.在胶面距离顶部1-1.5 cm的时候停止灌胶。然后覆盖一层1-5 mm厚的水,使胶顶部液面平整。由于比重不同,水和丙*(代"烯")酰胺溶液不会混合。
8.室温聚合30-60分钟后,用1×分离胶配胶液洗涤凝固的胶的顶部,待用。
二、配制浓缩胶(浓缩胶可以提高分辨率,适合于成分复杂的样品,一般使用浓度为4%。使用浓缩胶时蛋白质泳动速度主要跟其尺寸和形状相关。因浓缩胶pH跟分离胶pH不同,蛋白质可能会发生聚合和沉淀。对成分单一的样品,可以不用浓缩胶,此时蛋白的泳动速度主要跟其电荷密度,尺寸和形状相关。)
1.配10mL浓缩胶(如果配制其他体积,请按比例调节各成分用量):在一个25mL的三角瓶中,先加入6.2mL去离子水、1.3mL 30%丙*(代"烯")酰胺-甲叉双丙*(代"烯")酰胺(19:1)溶液和2.5mL 4×浓缩配胶液。
2.摇晃混匀后抽真空10-15分钟以去除溶液中的氧气(氧气能抑制丙*(代"烯")酰胺聚合反应,不去除将影响丙*(代"烯")酰胺聚合反应)。
3.按上表用量加入50μL 10%APS和15μL TEMED(这是配制10mL胶的用量,配制更大体积的胶则用量需按比例增加),迅速摇匀后在已经凝固的分离胶上倒胶。
4.在液面达到顶部时停止灌胶,插入梳子。
5.室温聚合30-60分钟,拔出梳子,用1×电泳液冲洗加样孔。
三、电泳
1.将凝胶板固定在电泳装置上,往上槽和下槽加入足够1×电泳液。注:本产品提供10升的三种不同pH的电泳液干粉中的一种,低PH和高PH值电泳液用前需将所有干粉溶解在1 L水中得10×电泳液,可以室温放置,用时再稀释成1×电泳液。一般不需要再调节pH,但保险起见,可以用pH试纸测试一下1×电泳液。高中低pH电泳缓冲液的pH分别是8.3,7.0和4.5。
注意:中pH值的电泳液干粉只能配1x电泳液,否则不溶解。称取中pH电泳液(pH7.0)干粉A,5.52g,中pH电泳液(pH7.0)干粉B 1g混匀,加去离子水至彻底溶解,调PH7.0,定容至1L。客户根据可实际需要量按比例增减。
2.连接电极。如果浓缩胶和分离胶的pH高于目标蛋白pI,目标蛋白将带负电荷并向阳极移动,可以按标准的SDS-PAGE方法接通电极(上阴极下阳极);如果浓缩胶和分离胶pH低于目标蛋白pI,目标蛋白将带正电荷并向阴级移动,此时应该下阴极上阳极。
3.300V预电泳直到电流不再降低(约需要30分钟)以去除残留过硫*(代"酸")铵。
4.换电泳液。
5.在液体蛋白质样品中加入5×上样液(16μl液体样品加4μL上样液)后上样。0.75 mm厚的胶可以上10μl,1.5 mm厚的胶可以上20μl。在未用加样孔中也要加1×上样液以防有样品的空道的样品扩散。注意:如果用考染检测,每个孔的蛋白最好在50-100μg总蛋白,如果银染则只需要1ug即可。样品如果是蛋白质沉淀,可用1×上样液直接溶解蛋白质沉淀后再上样。蛋白质溶液或沉淀中不能含有能够改变上样液pH的残留成分(如蛋白质沉淀剂TCA),用前最好用pH试纸测试一下,不在上样液的pH范围时就用酸或碱调到正常范围。大量样品可用透析法调pH。
6.上样自备的天然PAGE蛋白质标准或等电电泳的标准品(如果有的话)。
7.用15 mA(对0.75 mm厚的胶)或30mM(对1.5mm厚的胶)的电流电泳直到染料移动到分离胶底部。微型胶一般需要1-2小时。注意:电泳过程最好在冷室或有冷却系统,以免电泳产热使蛋白质变性。
8.终止电泳,取出凝胶进行后续的实验处理(如染色或酶活性检测)。
欲了解更多北京BTN81212C型一站式蛋白质非变性PAGE电泳套装(低pH)厂家的品牌、产地、价格及说明书等产品信息,请致电北京百奥莱博科技有限公司,我们将竭诚为您服务,另外,以下产品正在火爆促销:
·Karnovsky固定液
编号:BTN131226
英文名称:Karvovsky Fixative Solution
规格:250mL
Karnovsky固定液是组织化学中最常用的混合型固定液之一,主要成分含能快速渗透的多聚甲醛和缓慢渗透的戊二醛。它能很好保存组织的抗原性和精细结构,故尤其适用于电镜免疫化学样品的固定。本产品是在Karnovsky原始配方的基础上修改而得。
产品特点:
1.既可用于灌注法固定,也可用于浸泡法固定。
2.渗透能力强,固定均匀,组织收缩小,染色效果好。
3.适用范围广,可以用于固定从细菌、真菌,植物到动物的各种生物材料。
4.对原始配方进行了改良,不使用有毒的含砷化合物,减少了对操作者的毒害。
5.固定的组织经过包埋切片等处理用既可用于光学显微镜检测,也可用于电子显微镜检测。
储存条件:低温运输、4℃保存,保存期为1年。
使用方法:
1.对动物,最好先灌注固定,然后再浸泡固定10-30分钟。对植物、真菌、细菌、病毒、原虫等材料,直接采用浸泡法固定。浸泡在Karnovsky 固定液中的材料可以在4℃放置5年。
2.固定后的组织洗涤后即可用于包埋、切片、染色、检测等后续操作。
北京BTN81212C型一站式蛋白质非变性PAGE电泳套装(低pH)厂家关键词:低pH,One-Stop Protein Native PAGE Pack(C),一站式蛋白质非变性PAGE电泳套装,一站式蛋白质非变性PAGE电泳套装(低pH),BTN81212C
·先锋霉素溶液
编号:BTN120685
英文名称:Cephalotin Solution
规格:1mL
本产品为浓度100mg/mL的先锋霉素水溶液。参考浓度50mg/mL。先锋霉素(7-(2-Thienylacetamido)cephalosporanic acid sodiu*(代"m") salt;Cephalotin sodiu*(代"m") salt),分子式:C16H15N2NaO6S2,分子量为:418.42,CAS号:58-71-9,溶于水。头孢菌素类抗生素因有共同的母核——7-*基头孢烷酸而得名,不同种类的头孢菌素所带侧链不同,而侧链是人工接上的,所以头孢菌素是一种半合成抗生素。之所以又叫“先锋”,那是从“头孢”的原文Ceph=.cefo译音而来。
储存条件:常温运输、4℃避光保存、有效期一年。
·血清白蛋白清除剂
编号:BTN61205
英文名称:Serum Albumin Scavenger
规格:15次
血清是研究人和动物蛋白质组的重要样本,但由于白蛋白占血清总蛋白质的60%左右,会对其它低丰度蛋白的检测造成了极大的干扰,因此,有效去除血清白蛋白是更好地鉴定其他的蛋白的先决条件之一。本产品就是专门用于有效去除血清白蛋白的产品。
产品特点:
1.简单,不需要除离心机以外的特殊仪器设备,可平行处理多个样品。
2.可以放量操作。
3.高效,一次能有效去除60%左右的白蛋白,有利于检测低丰度蛋白。
4.得到的样品与后面的研究方法(如2D电泳、mass spectrometry等)兼容。
5.经济实惠,价格比国外同类产品便宜一半以上。
产品组成:
| 成分 | 规格 |
| 溶液A | 1.5mL |
| 溶液B | 15mL |
| 说明书 | 1份 |
储存条件:常温运输及保存,有效期一年。
使用方法:
1.将100μL冰浴的溶液A加入到20μL血清样品中,轻柔振荡混匀。
2.-20℃放置90分钟。
3.15000g 4℃离心20分钟。
4.小心将上清(含白蛋白部分)吸出。
5.将1mL 冰浴的溶液B加入到沉淀中,振荡混匀。
6.冰上放置15分钟。
7.15000g 4℃离心20分钟。
8.小心弃上清,沉淀即去除了大部分白蛋白的血清蛋白质。
9.冷冻干燥沉淀后待用。得到的蛋白质可以直接用于PAGE电泳和MS等分析。
北京BTN81212C型一站式蛋白质非变性PAGE电泳套装(低pH)厂家关键词:低pH,One-Stop Protein Native PAGE Pack(C),一站式蛋白质非变性PAGE电泳套装,一站式蛋白质非变性PAGE电泳套装(低pH),BTN81212C
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