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- 技术资料
- 库存:
717
- 英文名:
Fluorescein-12-dUTP Solution
- 保质期:
一年
- 供应商:
北京百奥莱博科技有限公司
- 保存条件:
低温运输和-20℃
特别声明:本产品及我公司所售其他产品均为科研类试剂产品,严禁用于药物、医疗及其他非科研用途。
荧光素-12-dUTP溶液价格厂家是高品质的探针标记及检测产品,由北京百奥莱博供应,用于科研实验,本产品质量好,且极具价格优势,深为用户称道,了解更多荧光素-12-dUTP溶液等探针标记及检测产品请联*(代"系")我司咨询订购。
名称:荧光素-12-dUTP溶液价格厂家
编号:BTN120630
规格:25μL
品牌:百奥莱博
产地:国产|进口
英文名:Fluorescein-12-dUTP Solution
本产品是浓度为1mM的荧光素-12-2-脱氧鸟苷-5´-三磷酸的溶液。可在各种DNA聚合酶作用下掺入到新合成的DNA产物中。
储存条件:低温运输和-20℃避光保存、有效期一年。
想要了解更多关于荧光素-12-dUTP溶液价格厂家的价格、品牌、厂家、说明书、促销信息,请和我们联*(代"系")。此外我公司还销*(代"售")下面的产品:
·鲱鱼精DNA溶液
编号:BTN130908
英文名称:Herring Sperm DNA Solution
规格:1mL
本产品是浓度为10mg/mL的、经过热变性处理的单链鲱鱼精DNA溶液可以用于Southern、Northern预杂交,还可以用于酵母化学转化和电转化。本产品即开即用,非常方便。
储存条件:低温运输和-20℃保存、有效期一年。
·SB培养基
编号:BTN100822
英文名称:Super Broth Medium,Powder
规格:250g
SB培养基所含的Peptone和Yeast Extract分别比LB高220%和300%。同样培养条件下能得到更多菌体,常用于质粒制备和蛋白质表达。配制一升液体培养基需要25g本产品。
储存条件:常温运输及保存,有效期两年。
·即用型PCR试剂盒(含染料)
编号:BTN90805
英文名称:Instant PCR MasterMix
规格:1ml×10|5mL×20
本产品内含Taq DNA聚合酶、dNTPs、MgCl2、反应缓冲液、PCR增强剂、上样染料等所有PCR所需要的成分,用户只需加入模板和引物即可进行PCR反应,具有广泛的用途。
产品特点:
1.扩增效率和灵敏度更高。
2. 方便,用户只需准备模板和引物既可以进行PCR实验。
3.快捷,操作步骤已经最大限度地简化,能减少污染,降低实验误差。
4.产物可直接用于T载体克隆,不需要额外的加A反应。
5.染料单独提供,方便客户组合。
储存条件:低温运输,-20℃保存,有效期一年。
使用方法:(以30μL的标准PCR反应体系为例)
在一干净的PCR管中,加入下列成分:
| 试剂 | 加入量 | |
| PCR MagicMix | 15μl | |
| DNA模板(自备) | 哺乳动物基因组DNA | 0.5-1μg |
| 酵母基因组DNA | 5-500ng | |
| 细菌基因组DNA | 0.5-50ng | |
| 质粒DNA | 5-500pg | |
| PCR回收片段 | 1-100pg | |
| PCR引物(自备) | 10pmol each | |
| 补水到 | 30μL | |
放入PCR仪中进行PCR,结束后取5-10μL直接上样电泳,按照1.0mL PCR MagicMix加入40μL专用染料的比例将40μL专用染料加入到1mL PCR MagicMix中
注意:
1.如果反应体系不是30μL,各成分需要等按比例增加或减少。
2.如果DNA模板中有PCR不明抑制物(植物、土壤和血液等DNA样品常含此类抑制物),可以在PCR体系中加入1/10的PCR抑制物清除剂(BTN60804,30μL体系中加3uL),可能会对PCR有帮助。
PCR反应的影响因素
变性温度与时间:模板变性温度是决定PCR反应中双链DNA解链的温度,达不到变性温度就不会产生单链DNA模板,PCR也就不会启动。变性温度低则变性不完全,DNA双链会很快复性,因而减少产量。变性温度太高,又会影响酶的活性。一般情况下可设为94℃ 20~30秒,高温时间应尽量缩短,以保持耐热DNA聚合酶的活力,最高变性温度不宜超过95℃。
退火温度与时间:退火温度决定PCR特异性与产量。温度高特异性强,但过高则引物不能与模板牢固结合,DNA扩增效率下降;温度低产量高,但过低可造成引物与模板错配,非特异性产物增加。合适的退火温度一般在45~68℃之间。设置特定反应的最适退火温度,可根据引物的(G+C)%含量进行推测,一般实验中退火温度比扩增引物的熔解温度Tm低5℃,退火时间一般为30~60秒,足以使引物与模板之间完全结合,长时间退火没有必要。
延伸温度与时间:PCR反应的延伸温度一般选择在70~75℃之间,延伸时间根据所用聚合酶扩增速度和扩增片段大小设定,如同样扩增2 Kb片段,若使用Taq酶只需1分钟,使用Pfu酶则应设定2分钟以上。延伸时间过长会导致非特异性扩增带的出现,时间太短则可能得不到扩增产物或得到一些短的非特异性片段。
循环次数:可根据模板DNA的量、扩增片段的大小和扩增产物的下步应用等因素,设定20-40个循环。循环次数太少,扩增量不足,如果循环次数太多,错配几率会增加,非特异性背景严重。所以,在保证产物得率的前提下,应尽量减少循环次数。
酶量:50μl反应体系可用0.5-5 U酶,酶量的选择与模板DNA的量,扩增片段大小等有关,酶量过多易发生非特异性反应,而且可能增加突变的机率,尤其在进行高保真扩增时,应尽量减少酶量,但酶量过少时反应性能下降。
模板:模板可以是单链DNA,也可以是双链DNA,质粒DNA的扩增效率略低于线状DNA。模板加量一般不需太多,不超过1μg为宜,因为加量过多可能导致非特异性扩增增加,但是要考虑模板中靶序列的含量。例如,使用基因组为模板扩增单拷贝或低拷贝靶序列,就需要适当加大模板用量。
引物:引物与模板配对的长度应至少为17个核苷酸,最高不宜超过30个核苷酸,最佳长度为20~24个核苷酸,如需插入酶切位点,应在酶切位点5´端多加几个碱基,有利于酶切。引物的(G+C)%含量组成应均匀,尽量避免含有相同的碱基多聚体。两个引物中(G+C)%含量应尽量相似。引物内部应避免形成明显的次级结构,如发夹结构。两个引物之间不应发生互补,特别是在引物3´端。如果可能,引物3´端最好富有GC,这样退火后有利于引物3´端的延伸。人工合成的引物最好经过色谱层析纯化或PAGE纯化,以除去未能合成至全长的短链等杂质。引物的终浓度一般为0.1-2μm左右,浓度太高会导致非特异性扩增,太低则扩增产物太少。
荧光素-12-dUTP溶液价格厂家关键词:BTN120630,Fluorescein-12-dUTP Solution,荧光素-12-dUTP溶液
ARB13564 兔子可溶性血管细胞粘附分子1(sVCAM-1)Elisa定量检测 Rabbit soluble vascuolar cell adhesion molecule 1,svcam-1 ELISA KIT
BTN120700 利福平溶液 Rifampicin Solution
120-72-9 吲哚 Indole
B0401 标准新生牛血清(辐照灭菌)
柠檬酸—柠檬酸*缓冲液(0.1mol/L,pH3.0-6.6) 500ml
25389-94-0 Kanamycin 硫*(代"酸")卡那霉素
ARB14053 猴肿瘤坏死因子α(TNF-α)含量测试
丙*(代"酮")酸*溶液(0.1mol/L,无菌) 100ml
ARB10840 人抗肾小球基底膜抗体(GBM)含量检测 Human glomerular basement membrane antibogy,gbm ELISA KIT
50-70-4 D-山梨醇 D-Sorbitol
ARB14248 人前列腺素(PG)定量分析
PY02-006 双料乳糖胆盐胨水 250克
ARB13056 小鼠转铁蛋白受体(TFR/CD71)elisa测定使用说明书 Mouse transferrin receptor,tfr ELISA KIT
ARB11064 人转甲状腺素蛋白(TTR)ELISA检测服务 Human transthyretin,ttr ELISA KIT
ARB11545 人凋亡抑制蛋白elisa检测说明书 Human apoptosis inhibitory protein ELISA KIT
ARB11164 人庚型肝炎病毒IgM(HGV-IgM)代做ELISA实验 Human hepatitis g virus igg,hgv-igG ELISA KIT
BL0839 羊抗人IgM纯化抗体
ARB10910 人抗凝血素抗体(APT1/APT2)Elisa方法检测 Human anti-prothrombins antibodies,apt1/apt2 ELISA KIT
D-异亮*酸 DL-Leucine 319-78-8
ARB14005 鹿血清淀粉样蛋白A(SAA)ELISA代测服务 Deer serum amyloid a,saa ELISA KIT
ARB10563 人丝裂原激活的蛋白激酶/MAP激酶(MAPK)elisa测定使用说明书 Human mitogen activited protein kinase,mapk ELISA KIT
荧光素-12-dUTP溶液价格厂家关键词:BTN120630,Fluorescein-12-dUTP Solution,荧光素-12-dUTP溶液
·痰液采集器
编号:BTN130938
英文名称:Sputum collector
规格:1个
·噻孢霉素溶液
编号:BTN120684
英文名称:Cefotaxime Solution
规格:1mL
本产品为浓度100mg/mL的噻孢霉素水溶液。参考浓度50mg/mL。噻孢霉素(头孢噻肟*)分子式为:C16H16N5NaO7S2,分子量:477.45,CAS号:64485-93-4。效价:916-964μg/mg,溶于水。噻孢霉素为β-半乳糖苷酶抑制型抗菌素,能抑制肽聚糖的交联,从而抑制细菌细胞壁合成,常用于植物组织培养中抑制农杆菌。
储存条件:低温运输,-20℃避光保存,有效期6个月。
·细胞计数液(Vi-CELL)
编号:BTN131200
英文名称:Cell Counting Reagent(Vi-CELL)
规格:100次
本产品为浓度100mg/mL的噻孢霉素水溶液。参考浓度50mg/mL。噻孢霉素(头孢噻肟*)分子式为:C16H16N5NaO7S2,分子量:477.45,CAS号:64485-93-4。效价:916-964μg/mg,溶于水。噻孢霉素为β-半乳糖苷酶抑制型抗菌素,能抑制肽聚糖的交联,从而抑制细菌细胞壁合成,常用于植物组织培养中抑制农杆菌。
储存条件:低温运输,-20℃避光保存,有效期6个月。
·一站式蛋白质非变性PAGE电泳套装(低pH)
编号:BTN81212C
英文名称:One-Stop Protein Native PAGE Pack(C)
规格:30次
非变性聚丙*(代"烯")酰胺凝胶电泳(Native PAGE)是目前电泳法分离活性蛋白的主要方法之一,跟SDS-PAGE根据分子量大小分离蛋白质不同,它是根据蛋白质分子大小、形状、电荷密度三个主要参数分离蛋白质。由于蛋白质的pI各不相同,所以对不同蛋白质需要选用具有不同pH的电泳体系。单独配制不同pH的Native PAGE电泳胶十分繁琐,为此本公司开发了本产品。
产品特点:
1.即开即用,不需单独准备各种成分,十分方便。还免去了实验人员接触粉末状的剧毒物品丙*(代"烯")酰胺
2.非变性,电泳过程中蛋白质保持天然的构象和亚基之间的相互作用,得到的蛋白质一般都具有生物活性(而SDS-PAGE得到的蛋白没有活性)。
3.可用于分析蛋白质和DNA或RNA的相互作用、蛋白修饰、蛋白构型改变、回收有活性蛋白质等试验。
4.电泳后可直接用于考染、银染、Western杂交等实验。
5.提供具有3种不同pH的缓冲液套装,便于客户选择最适合的缓冲液体系。
产品组成:
| 成分 | 规格 |
| 丙*(代"烯")酰胺干粉 | 60g |
| 甲叉双丙*(代"烯")酰胺干粉 | 3g |
| TEMED | 1.5ml |
| 过硫*(代"酸")铵干粉 | 1g |
| 高中低缓冲液套装选一 | ABC之一(见下) |
| 说明书 | 1份 |
| 高pH缓冲液套装(只有BTN81212A有此成分) | |
| 高pH浓缩胶配胶液(pH6.7),4× | 100ml |
| 高pH分离胶配胶液(pH8.9),4× | 200ml |
| 高pH电泳液(pH8.3) | 10L(干粉) |
| 高pH上样液,5× | 1ml |
| 中pH缓冲液套装(只有BTN81212B有此成分) | |
| 中pH浓缩胶配胶液(pH5.5),4× | 100ml |
| 中pH分离胶配胶液(pH7.5),4× | 200ml |
| 中pH电泳液(pH7.0)干粉A | 55.2g |
| 中pH电泳液(pH7.0)干粉B | 10g |
| 中pH上样液,5× | 1ml |
| 低pH缓冲液套装(只有BTN81212C有此成分) | |
| 低pH浓缩胶配胶液(pH6.7),4× | 100ml |
| 低pH分离胶配胶液(pH4.3),4× | 200ml |
| 低pH电泳液(pH4.5) | 10L(干粉) |
| 低pH上样液,5× | 1ml |
注:高、中和低pH缓冲液套装里面均含100mL浓缩胶配胶液、200mL分离胶配胶液、10 L电泳液(干粉)和1mL上样液,只是pH不同。
储存条件:常温运输和保存(上样液需-20℃保存),保存期为一年。
使用方法:
如何选择缓冲液?
高pH浓缩胶,高pH分离胶,高pH电泳液和高pH上样液一定要配套使用。中pH和低pH系列也是如此,绝不能高pH的成分跟其他pH的交叉使用。选择适当pH的缓冲液(包括上样液,电泳液,配胶液等)对蛋白质非变性PAGE非常重要,缓冲液的最佳pH又跟目的蛋白质的pI值密切相关。如果pH远离pI,则蛋白质分子带电多(电荷密度大),电泳速度快,分辨率高。但过酸过碱又容易使蛋白质结构变性,失去活性,所以最佳pH条件就是在电泳分辨率和维持活性之间寻找平衡,需要针对每种蛋白质进行摸索或通过滴定曲线来确定,没有通用的电泳缓冲体系。由于有近半数的蛋白质pI在4-6.5,所以在不知道目标蛋白的pI时,可以先选用高pH缓冲系统。
一、配制分离胶
1.确定浓度。对分子量在100Kd以上的蛋白质,可选用3-5%的胶;对分子量在20-150KD之间的蛋白质,可选用5-10%的胶;对分子量在10-80KD之间的蛋白质,可选用10-15%的胶。对未知样品,建议使用7.5%的胶。
2.配制10%的APS(过硫*(代"酸")铵):按每0.1克过硫*(代"酸")铵干粉加1mL去离子水的比例配制10%的APS溶液,该溶液可以在4℃存放一周。
3.配制30%丙*(代"烯")酰胺-甲叉双丙*(代"烯")酰胺(19:1)溶液:在本产品提供的装有60克丙*(代"烯")酰胺干粉的塑料瓶中加入146mL自备的去离子水和3g甲叉双丙*(代"烯")酰胺,充分摇晃直到溶解(约需10-20分钟)即得200mL 30%丙*(代"烯")酰胺(19:1)溶液。此溶液最好在一个月内用完,必须4℃避光保存。
4.配10mL分离胶(如果配制其他体积,请按比例调节各成分用量):在一个25mL的三角瓶中,先加入4.2mL去离子水、3.3mL 30%丙*(代"烯")酰胺-甲叉双丙*(代"烯")酰胺(19:1)溶液和2.5mL 4×分离胶配胶液。
5.摇晃混匀后抽真空10-15分钟以去除溶液中的氧气(氧气能抑制丙*(代"烯")酰胺聚合反应,不去除的话将影响丙*(代"烯")酰胺聚合反应)。
6.加入50μL新配制的10%APS和10μL TEMED(这是配制10mL胶的用量,配制更大体积的胶则按比例增加),迅速摇匀后倒胶。注意:如果购买的是低pH缓冲系统,由于在低pH缓冲液中PAGE聚合速度降低,所以需要增加上述两成分的用量。
7.在胶面距离顶部1-1.5 cm的时候停止灌胶。然后覆盖一层1-5 mm厚的水,使胶顶部液面平整。由于比重不同,水和丙*(代"烯")酰胺溶液不会混合。
8.室温聚合30-60分钟后,用1×分离胶配胶液洗涤凝固的胶的顶部,待用。
二、配制浓缩胶(浓缩胶可以提高分辨率,适合于成分复杂的样品,一般使用浓度为4%。使用浓缩胶时蛋白质泳动速度主要跟其尺寸和形状相关。因浓缩胶pH跟分离胶pH不同,蛋白质可能会发生聚合和沉淀。对成分单一的样品,可以不用浓缩胶,此时蛋白的泳动速度主要跟其电荷密度,尺寸和形状相关。)
1.配10mL浓缩胶(如果配制其他体积,请按比例调节各成分用量):在一个25mL的三角瓶中,先加入6.2mL去离子水、1.3mL 30%丙*(代"烯")酰胺-甲叉双丙*(代"烯")酰胺(19:1)溶液和2.5mL 4×浓缩配胶液。
2.摇晃混匀后抽真空10-15分钟以去除溶液中的氧气(氧气能抑制丙*(代"烯")酰胺聚合反应,不去除将影响丙*(代"烯")酰胺聚合反应)。
3.按上表用量加入50μL 10%APS和15μL TEMED(这是配制10mL胶的用量,配制更大体积的胶则用量需按比例增加),迅速摇匀后在已经凝固的分离胶上倒胶。
4.在液面达到顶部时停止灌胶,插入梳子。
5.室温聚合30-60分钟,拔出梳子,用1×电泳液冲洗加样孔。
三、电泳
1.将凝胶板固定在电泳装置上,往上槽和下槽加入足够1×电泳液。注:本产品提供10升的三种不同pH的电泳液干粉中的一种,低PH和高PH值电泳液用前需将所有干粉溶解在1 L水中得10×电泳液,可以室温放置,用时再稀释成1×电泳液。一般不需要再调节pH,但保险起见,可以用pH试纸测试一下1×电泳液。高中低pH电泳缓冲液的pH分别是8.3,7.0和4.5。
注意:中pH值的电泳液干粉只能配1x电泳液,否则不溶解。称取中pH电泳液(pH7.0)干粉A,5.52g,中pH电泳液(pH7.0)干粉B 1g混匀,加去离子水至彻底溶解,调PH7.0,定容至1L。客户根据可实际需要量按比例增减。
2.连接电极。如果浓缩胶和分离胶的pH高于目标蛋白pI,目标蛋白将带负电荷并向阳极移动,可以按标准的SDS-PAGE方法接通电极(上阴极下阳极);如果浓缩胶和分离胶pH低于目标蛋白pI,目标蛋白将带正电荷并向阴级移动,此时应该下阴极上阳极。
3.300V预电泳直到电流不再降低(约需要30分钟)以去除残留过硫*(代"酸")铵。
4.换电泳液。
5.在液体蛋白质样品中加入5×上样液(16μl液体样品加4μL上样液)后上样。0.75 mm厚的胶可以上10μl,1.5 mm厚的胶可以上20μl。在未用加样孔中也要加1×上样液以防有样品的空道的样品扩散。注意:如果用考染检测,每个孔的蛋白最好在50-100μg总蛋白,如果银染则只需要1ug即可。样品如果是蛋白质沉淀,可用1×上样液直接溶解蛋白质沉淀后再上样。蛋白质溶液或沉淀中不能含有能够改变上样液pH的残留成分(如蛋白质沉淀剂TCA),用前最好用pH试纸测试一下,不在上样液的pH范围时就用酸或碱调到正常范围。大量样品可用透析法调pH。
6.上样自备的天然PAGE蛋白质标准或等电电泳的标准品(如果有的话)。
7.用15 mA(对0.75 mm厚的胶)或30mM(对1.5mm厚的胶)的电流电泳直到染料移动到分离胶底部。微型胶一般需要1-2小时。注意:电泳过程最好在冷室或有冷却系统,以免电泳产热使蛋白质变性。
8.终止电泳,取出凝胶进行后续的实验处理(如染色或酶活性检测)。
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