BTN130958A型红色DNA上样液(6×,非甘油)北京厂

特别声明：本产品及我公司所售其他产品均为科研类试剂产品，严禁用于药物、医疗及其他非科研用途。

北京百奥莱博供应的BTN130958A型红色DNA上样液(6×,非甘油)北京厂家现货用于生化科学研究，本产品质量好，且极具价格优势，深为用户称道，了解更多红色DNA上样液(6×,非甘油)等核酸电泳和回收产品请联*(代"系")我司咨询订购。

名称：BTN130958A型红色DNA上样液(6×,非甘油)北京厂家现货
英文名：DNA Loading Buffer(Red)
品牌：百奥莱博
产地：国产|进口

BTN130958A型红色DNA上样液(6×,非甘油)北京厂家现货极具性价比，此外，我公司正火爆促销以下产品：

·即用型蓝白T载体A型(T7-SP6，有MCS)
编号：BTN60603
英文名称：Instant Blue-White Vector T，Type A
规格：20次
本产品是用Xcm I酶切环状的可保种型蓝白T载体(BTN60803)去掉一段1.3Kb的插入片段后得到的线性DNA片段(载体部分)，其两个末端的5´都有一个突出的T，可以用于快速克隆具有加尾活性的耐热酶(如Taq DNA聚合酶)扩增得到的PCR片段。

产品特点：
1. 由于是通过Xcm I酶切制备，所以载体两端的带T率为100%，远高于用Taq DNA聚合酶和TdT末端转移酶在平末端载体加尾得到的T载体。
2. 克隆的阳性率一般在90%以上，缩短了筛选过程。
3. 插入位点两侧有对称的常见酶切位点(如EcoR I)，便于对克隆的PCR片段进行近一步的分析。
4. 克隆位点两侧分别有T7和T3 RNA聚合酶启动子，便于用克隆的PCR片段制备RNA探针。
5.可以使用pUC/M13 Forward和Reverse测序引物测定插入片段的序列。
6. T克隆位点位于β-半乳糖苷酶的α-肽编码区内，可以进行蓝白斑筛选。
7.含有丝状噬菌体f1 复制起始子，可以制备单链DNA。

产品组成：

 

成分	规格
即用型蓝白T载体(40ng/uL)	20μl
阳性对照(40ng/uL)	5μl
说明书	1份

储存条件：低温运输，-20℃保存，有效期两年。

使用方法：

一. PCR产物的纯化和定量
1. 将PCR产物进行琼脂糖凝胶电泳分离。最好不要使用TBE缓冲液，因为它会影响DNA的胶回收效率。
2.在长波(360nm)紫外灯下快速切胶，尽可能切掉多余的凝胶。为避免嘧啶二聚体的形成，可以使用百奥莱博的DNA防护剂UV Scavenger(BTN60601)。
3. 用百奥莱博的柱式DNArc(BTN60202)纯化回收PCR片段。溶解PCR片段的超纯水体积越小越便于后续操作。
4. 将回收的片段与浓度已知的DNA Marker在含EB(BTN3180)或绿如蓝染料(BTN70303)的琼脂糖凝胶中电泳，通过比较DNA条带的荧光强度而估测PCR纯化产物的浓度。注意：一般不推荐使用测OD260的方法，因为回收的DNA很珍贵，该方法需要比较多的DNA。
5. 如果所得的DNA片段浓度较低，可以使用本公司核酸浓缩剂(BTN110801)将其浓缩到需要的浓度。
6. 如果PCR片段为平末端，则需要用加A试剂盒处理，否则不能用于与T载体的连接反应。

二. 连接反应
1. 短暂离心装有T载体的离心管。
2.在两个离心管中加入下列成分：

成分	样品管	负对照	正对照
自备T4 Ligase Buffer，10×	1μl	1μl	1μl
蓝白T载体(40 ng/uL)	1μl	1μl	1μl
自备PCR纯化产物	见下注	不加	不加
阳性对照(40ng/uL)	不加	不加	1μl
自备T4 Ligase(5-10U/μL)	1μl	1μl	1μl
补超纯水到	10μl	10μl	10μl

注：PCR纯化产物与蓝白T载体的摩尔比最好为3-10，可以按下面的公式计算出连接反应中需要的PCR纯化产物的ng数:

假如插入片段和载体的连接比例设定为3，连接反应中加入蓝白T载体(长度为3Kb)的量为40ng，则需要长度为0.5Kb的PCR纯化产物的量是:

3. 用移液器吹打连接反应使之混匀后，16℃孵育12小时(或按T4 Ligase供货商提供的说明书进行连接)。

三. 细菌转化
1. 将100μL感受态细胞于冰上解冻。注意：最好使用转化效率在1×108cfu/μg DNA以上的感受态细胞进行转化，因为采用单碱基突出端进行连接不是很有效。
2. 取5μL连接产物加入到感受态细胞中，轻轻旋转几次以混匀内容物。在冰上放置30分钟。
3. 将管放入预加温到42℃的水浴中，热休克90秒。快速将管转移到冰浴中。


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·植物线粒体总蛋白提取试剂盒
编号：BTN130886
英文名称：Plants mitochondrial total protein extraction kit
规格：50次

·酵母化学感受态细胞制备试剂盒(A型)
编号：BTN81109A
英文名称：Yeast Chemical Competent Cell Preparation Kit
规格：20次
本酵母化学感受态细胞制备试剂是一种通过化学处理，高效快速制备酿酒酵母化学感受态细胞，用于长期冻存以备后续转化的产品。

产品特点：
1.一次制备，-80℃保存，多次使用，免去每次转化都要制备酿酒酵母感受态细胞。
2. 操作简单，单溶液制备，除酵母培养的时间外，整个操作只需要30分钟
3. 主要用于酿酒酵母S. cerevisiae，也适用于其他多种实验用酵母菌株，包括S. pombe、C. albicans、Pichia pastoris等。
4. 受体酵母可以不含质粒，也可用于携带有选择性质粒的酵母。
5. 对酿酒酵母，最高转化效率可达到0.2-1×105个转化子/μg质粒DNA。对其他酵母，效率稍低，范围在100-2000个转化子/μg质粒DNA。
6. 得到的感受态细胞可以用各种线性或环状酵母穿梭质粒DNA进行转化，例如YIp，YRp，YCp，YEp和YAC等。
7.可以用于酵母双杂交、定点突变(Site－Directed Mutagenesis)、基因破坏(Gene Disruption)、等位突变基因修复(Mutant Allele Recovery)等实验。
8. 本产品可以制备20 只酵母感受态细胞(需要200mL 酵母培养液)，其中A型只用于制备感受态细胞，B型还带高效转化液。

储存条件：常温运输和保存，有效期一年。

产品组成：

成分	20T(A)	20T(B)
制备液A	120ml	120ml
制备液B	6ml	6ml
制备液C	10ml	10ml
转化液A	无	30ml
转化液B	无	30ml
说明书	1份	1份

自备试剂：YPD培养基

使用方法：

一：酵母化学感受态细胞的制备
说明：按本方法制备1 管酵母化学感受态细胞就需要OD600达到0.6-1.0的新鲜酵母培养液10mL，用户需根据所需酵母感受态细胞的数量决定培养细胞的体积。如果超过10mL，则制备液的使用量需要按比例增加。
1. 挑取酵母受体菌的新鲜的单菌落(4℃放置不超过3周的也可以)，接种到装在50mL离心管中的10mL的自备的YPD培养基中。
2. 30℃摇晃培养，摇床速度250rpm/分钟，直到OD600达到0.6-1.0(相当于0.6-1×10⁷细胞/mL)。
3.室温3000rpm离心5 min，弃上清得酵母细胞沉淀。
4. 新鲜制备适量的酵母感受态制备工作液。对10mL 酵母需要5.25mL的工作液，其配制方法是：将4.75mL 制备液A、0.25mL 制备液B和0.25mL 制备液C 加入到一个无菌的离心管中后充分震荡混匀即可。酵母感受态制备工作液可放室温待用。
5. 用0.5倍体积的新鲜配制的酵母感受态制备工作液洗涤酵母细胞沉淀一次(对10mL 酵母则需要5mL 酵母感受态制备工作液)。即混合后振荡1分钟，室温3000rpm离心3分钟，去上清得洗涤后的酵母细胞沉淀。
6. 再用0.02倍体积的酵母感受态制备工作液充分重悬菌体(对10mL酵母，则需要0.2mL 酵母感受态制备工作液)。
7. 按每管0.2mL 分装到冷冻管中，放入保温冰盒中冷却半小时后再放入-80℃冰箱待用。0.2mL的感受态细胞足够1次转化使用。注意：放入保温冰盒的目的是使温度缓慢下降，急冻将使转化效率降低，这点跟大肠杆菌感受态制备过程不同。

二：化学转化酵母感受态细胞(只有B型提供相关试剂)
1. 将总体积不超过20μl的0.1-5μg质粒DNA 加到刚从-80℃冰箱取出的、还处于凝固状态的0.2mL 酵母感受态细胞上。注意：最好同时做一个不加质粒DNA的阴性对照组。
2.室温充分振荡直到凝固的感受态细胞完全融化。注意：此步非常关键，如果能在恒温振荡器上37℃振荡5分钟，则效果更好。
3. 加入1.4mL转化液A，轻柔颠倒混匀一分钟。
4. 30℃培养1小时。
5.室温3000g离心5秒，弃上清。
6.在酵母细胞沉淀中加1.0mL转化液B，振荡一分钟。
7.室温3000g离心5秒，弃上清。
8.在酵母沉淀细胞中加入适量(如100μl)的转化液B，混匀后在在选择培养基上全部涂盘。
9. 30℃培养3-5 天后即得酵母转化菌落。


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