北京一站式GST标记蛋白质微量纯化套装价格厂家

特别声明：本产品及我公司所售其他产品均为科研类试剂产品，严禁用于药物、医疗及其他非科研用途。

百奥莱博专业生产供应北京一站式GST标记蛋白质微量纯化套装价格厂家，我公司销*(代"售")全品类的分子生物学试剂，价格优惠，欢迎广大科研工作者垂询订购。

名称：北京一站式GST标记蛋白质微量纯化套装价格厂家
规格：20次
产地：国产|进口
英文名：One-Stop GST-Tagged Protein Miniprep Pack(A)
品牌：百奥莱博
重组蛋白N端的GST谷胱甘肽S转移酶能提高重组蛋白的水溶性，所以常用于蛋白质重组表达。GST-谷胱甘肽亲和层析是利用GST 标记的蛋白能与谷胱甘肽层析介质结合，并能被还原型谷胱甘肽洗脱的特点而建立，是目前分离纯化GST 标记蛋白质的重要方法。本产品就是专门用于上述目的，其原理如下：


产品特点：
1．一站式套装，含所需的谷胱甘肽介质、溶液和层析柱，用户只需要提供表达GST 标记蛋白的细菌(酵母、杆状病毒、培养细胞)即可，非常方便。
2．专一性强，一次过柱即可获得纯度高达95%的GST-标记蛋白。
3．只能在非变性条件下使用，只可用于纯化没形成包涵体的GST 标记蛋白。
4．每次可以处理20mL的表达菌液，适合初步筛选和鉴定。
5．提供4mL浓度为50%的谷胱甘肽-Agarose 介质，可吸附5-10mg GST 标记蛋白质。
6．本介质可以反复使用多次。

试剂盒组成：

 

成分	20次(A)	20次(B)
谷胱甘肽-Agarose介质,50%	4ml	4ml
10×PBS缓冲液	100ml	100ml
溶液A	1ml	无
GST洗脱缓冲液成分一	25ml	25ml
GST洗脱缓冲液成分二	约80mg	约80mg
溶菌酶(20KU/mg)	无	30mg
Benzonase(2U/μL)	无	20μl
PMSF(10mg/mL)	0.5ml	0.5ml
6mL层析柱(带筛板)	1套	1套
说明书	1份	1份

储存条件：常温运输和保存，溶菌酶、Benzonase和PMSF 需低温运输。收到货后，介质需4℃保存，溶菌酶、Benzonase和PMSF 需-20℃保存，有效期一年。

使用方法：
注意：
1．每步得到的样品最好都留存少量作为SDS-PAGE分析的对照，在下面描述中就不再提醒。
2．本实验需要用到的1×PBS缓冲液可用自备的超纯水稀释本试剂盒提供的10×PBS缓冲液而得。PBS缓冲液用超纯水稀释后极其容易长细菌，注意防止污染。
3．GST 洗脱液的配制方法是将约80mg GST 洗脱液成分二干粉全部加入到GST 洗脱液成分一溶液中，摇晃直到干粉全部溶解即得GST 洗脱液，分装成小份放-20℃保存，每次用一管。

一、重组蛋白的表达和细菌收集
1．37℃振荡培养20mL含表达质粒的细菌到OD600=0.6-0.8。
2．加IPTG 到终浓度为0.1mM，30℃振荡培养3小时或22℃振荡培养8小时(或过夜)。
3．4℃ 5000g离心10分钟收集20mL表达菌液，弃上清。
4．用1×PBS缓冲液重悬细菌沉淀，4℃ 5000g离心10分钟，弃上清。沉淀可直接用于裂解或放-80℃保存。

二、细胞裂解
5．如果用本产品A型，用1mL冰浴的新鲜配制的细胞裂解液(1mL 1×PBS缓冲液+50μl溶液A+ 25μl 10mg/mL的PMSF溶液)重悬细菌沉淀，冰上超声裂解菌体直到在显微镜下看见绝大多数细胞破裂。超声参数需根据仪器型号自行摸索，一般选1K-10K 频率处理15次，每次20秒，间隔1分钟(必需放置在冰上)。裂解物不能粘稠，否则会堵塞层析柱。
6．如果用本产品B型，在1mL冰浴的新鲜配制的细胞裂解液(在20mL 1×PBS缓冲液中加入所有30mg 溶菌酶干粉，溶解后分装成1mL/管，取一管使用，剩余的-20℃放置)中加入25μl 10mg/mL的PMSF溶液和1μl Benzonase，用此混合液重悬细菌沉淀后冰上放置30分钟，得到细菌裂解物。
7．将超声或酶法细胞裂解物在13000 g 4℃离心10分钟去除未裂解细胞和裂解细胞碎片以防堵柱，所得上清即含可溶性GST 标记蛋白。

三、层析柱的制备和GST蛋白纯化
8．摇晃将谷胱甘肽-Agarose 介质充分混匀后，取适量加入到预放了一片筛板的层析柱中(介质用量需要根据GST蛋白产量决定，100mL菌液一般使用200μL介质即可)。下列步骤各溶液的用量均针对200μL介质而定，如果介质用量不同，各溶液用量需相应调整。
9．用5mL预冷的1×PBS缓冲液洗柱。
10．将第7 步得到的上清液(含可溶性GST标记蛋白)上柱，让重力使上柱液自然流出，收集并保存穿透液用于SDS-PAGE电泳。GST和谷胱甘肽之间的结合很缓慢，所以流速一定不能快，否则结合不充分。流速一般在0.2-1mL/分钟即可。如要提高GST 标记蛋白与介质的结合效率，可用本试剂盒提供的红盖将层析柱下的漏液口堵上，让细菌裂解液和介质在4℃结合30分钟或过夜。也可以将穿透液反复上柱。
11．用0.5-2mL 1×PBS缓冲液洗柱，收集并保存穿透液(含杂蛋白)。
12．用0.2-1mL GST洗脱液洗柱，收集并保存穿透液(含GST 标记蛋白)。由于可能含蛋白酶污染，所以穿透液不能在4℃放置，需立即用于后续处理(如浓度测定或SDS-PAGE电泳)或-80℃长期放置。
13．对收集的2种穿透液和洗脱液进行蛋白定量或SDS-PAGE分析。注意：如果不预先脱盐，则只能用Bradford法或OD 检测法(1 OD280 约等于0.5mg/mL蛋白)测定穿透液和洗脱液的蛋白浓度。由于GST的分子量为26 KD，所以在SDS-PAGE胶上，GST 标记蛋白将比天然蛋白大26 KD。

附：GST柱的恢复(本试剂盒不含所需试剂)
1．用3倍体积的6M盐*(代"酸")胍处理柱子10分钟。
2．用3倍体积的超纯水处理柱子10分钟。
3．用3倍体积的缓冲液一(0.5M NaCl，0.1M Tris·HCl，pH8.5)处理柱子10分钟。
4．用3倍体积的缓冲液二(0.5M NaCl，0.1M Tris·HCl，pH4.5)处理柱子10分钟。
5．再重复3-4 步两次。
6．用3倍体积的超纯水处理柱子3次。
7．用3倍体积的1×PBS缓冲液处理柱子2次。
8．堵上漏口，加3倍体积的1×PBS缓冲液待用。若长时间不用，则第7步和第8步的1×PBS改成20%的乙醇。

北京一站式GST标记蛋白质微量纯化套装价格厂家极具性价比，此外，我公司正火爆促销以下产品：

·超快非醇核酸沉淀剂
编号：BTN60402
英文名称：Magic Solution DNArc
规格：30次
本产品是我司独创的一管式非醇DNA/RNA沉淀剂，其主要特点超快速度,是只需要离心2分钟即可快速沉淀回收溶液中的单双链DNA或RNA(包括探针)，可广泛用于DNA/RNA的去盐，去蛋白,反应纯化，浓缩等。

产品特点：
1. 明显提高DNA或RNA沉淀的得率和DNA或RNA提取的产率。
2. 本产品无核酸污染也无DNA酶和RNA酶活性。
3. 痕量DNA和RNA(20pg)回收率达95～98%。
4. 不影响酶切、连接、转录、PCR、转化、转染等实验。
5. 不影响电泳和DNA-蛋白相互作用。

储存条件：常温运输，4℃保存，有效期一年。溶液A呈红色，如果颜色发生变化，则表示pH已经改变，请弃之不用。溶液B为无色液体，会在瓶底产生少量晶体状产生沉淀，用前无需溶化，直接取上清液使用)。

使用方法：
1.将1/10体积的溶液A加入到DNA溶液中(包括PCR，酶切反应液等)，振荡混匀。如果回收20 Kb以上的DNA片段，混匀时需要温和；对20Kb以下的DNA片段，可以剧烈震荡。
2.室温静置至少2分钟。此步十分关键，不能省略而直接离心。
3.13000 g室温离心5分钟后，小心吸弃上清。
4.加入0.8mL溶液B，充分震荡混匀。
5.13000 g室温离心2分钟，小心吸弃上清。
6.再用0.2mL溶液Ｂ重复第4-5步一次。
7.小心吸弃上清后即得纯化的DNA沉淀，加入少量TE或水，充分吹打溶解。如果最后还会有少量白色不溶沉淀，属于正常现象。

疑难解答：
Q：电泳为何不能检测到回收的DNA？
A：最可能原因是各步加入溶液后没有充分震荡混匀，其次是沉淀在各步吸弃上清时候不小心吸走而丢失，三是溶液A的pH发生改变,四是DNA溶液的盐离子浓度或pH值太高。
Q：电泳时为何有残留荧光物在加样孔中？
A：可能是琼脂糖凝胶中的杂质吸附的DNA，吸取 DNA样品时最好先短暂离心，只取上清液。这些不溶杂质一般不影响后续反应。使用高纯度的琼脂糖可以减少杂杂质的污染。百奥莱博一般使用 OXOID的琼脂糖，得到的DNA可以用于常见的分子生物学后续反应。
Q：本产品与贵公司的Magic Gel DNArc是否相同。
A： Magic Gel DNArc 有离心管和特殊的融胶液，专门用于从胶中回收DNA；本产品用于从反应液中纯化回收DNA，不需要另外提供离心管和融胶液。Magic Gel DNArc的溶液B和溶液C 分别与本产品的溶液A和溶液B类似但浓度不完全相同，建议不要互用。


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·His标签蛋白专用蛋白酶抑制剂
编号：BTN130530
英文名称：Protease Inhibitor for His-tagged Protein
规格：10mL
His-Ni亲和层析是目前分离纯化重组表达蛋白质的重要方法，纯化过程中，为防止各种蛋白酶降解重组蛋白，需要加入足够、特异的蛋白酶抑制剂。本产品即为优化的His标签蛋白蛋白酶抑制剂混合液。专门用于纯化His标签蛋白时，抑制各种内源和外源蛋白酶活性，防止重组表达蛋白质降解。本品抑制谱广，能特异性抑制丝*酸蛋白酶、半胱*酸蛋白酶、天门冬*酸蛋白酶、嗜热菌蛋白酶样蛋白酶和*基肽酶等各种蛋白酶活性。本产品为DMSO溶液。与各种细菌细胞裂解液兼容，在裂解液中加入1/100体积即可。

储存条件：低温运输，-20℃保存，有效期两年。

·PCR污染清除剂
编号：BTN140648
英文名称：DNA Contamination Scavenger
规格：250mL
微量核酸污染导致的PCR假阳性是广大实验者最头痛的问题之一。为解决此难题，本公司开发了本款PCR污染清除剂，本产品无毒、无腐蚀性，可将裸露的核酸完全降解至无法作为扩增模板的小片段，且无法恢复，从而彻底消除PCR 过程中由于各种环境污染而导致的假阳性扩增。

产品特点：
1．本产品为非酶类试剂，所有组分可生物降解、无毒无害。不含有机溶剂或者挥发性物质，不含无机酸或者碱性物质，不会对金属形成腐蚀。
2．产品中各组分协同作用，快速、非序列特异性的降解核酸污染。
3．使用简单，操作方便。喷洒或浸泡处理15分钟即可完成清除作用。
4．可广泛用于清除实验操作台、仪器、塑料和玻璃器皿、移液器、解剖刀、镊子、手套等各种实验器材表面的DNA污染。
5．与传统的PCR污染清除方法，如：稀酸处理法、紫外照射法、尿嘧啶糖苷酶(UNG)法和酶解变性等相比，本产品具有能彻底破坏DNA分子、有效清除小片段核酸等优点。

储存条件：常温运输和保存，有效期两年。

使用方法：
注意：以下操作均需要戴手套进行。本产品可重复使用5-10次，使用后建议密封保存。

工作平台的清洁：
直接将本产品喷于台面，最少15分钟后用普通吸水纸擦净，最后用吸水纸擦净，晾干。
实验仪器的清洁：
用浸有本品的纸擦拭仪器表面，再用吸水纸擦净，晾干。用本品处理金属器械的时间不能超过15分钟。
玻璃和塑料器皿的清洁：
将器皿浸泡在本产品中，静置处理最少15分钟后取出，再用蒸馏水浸泡二次以上，倒立晾干后备用。
移液枪的清洁：
根据生产厂家的使用手卸下移液枪的前端，留下接口塞和圈套后将其浸放在本产品中最少15分钟，再用蒸馏水彻底冲洗后，晾干，装回移液枪。
塑料离心管和滴头的清洁：
将反应塑料离心管和滴头充分浸泡在本产品中最少15分钟以上(最好不要有气泡)，然后蒸馏水充分浸泡两次，试管或离心管可立即使用或干燥后备用。


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