动物线粒体纯化试剂盒A(粗提)现货

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动物线粒体纯化试剂盒A(粗提)现货由专业试剂供应商北京百奥莱博提供，用于科研目的生化试验项目，本产品质量好，且极具价格优势，深为用户称道，了解更多动物线粒体纯化试剂盒A(粗提)等细胞及免疫学产品请联*(代"系")我司咨询订购。

名称：动物线粒体纯化试剂盒A(粗提)现货
英文名：Animal Mitochondria Purification Kit(A)
编号：BTN111207A
品牌：百奥莱博
规格：5次
产地：国产|进口
线粒体是非常重要的细胞器，它不但跟很多人类疾病相关，而且还是母系遗传研究的重要材料。对线粒体进行遗传研究和生化研究都需要纯化线粒体。本产品可用于纯化动物细胞线粒体的试剂盒。

产品特点：
1．即开即用，用户不需要自己配制各种溶液，优化各种条件。
2．有粗提和精提两个选择，但是精提需要超速离心机。粗提所得线粒体可以直接用于蛋白分析(SDS-PAGE、Western Blot、ELISA等)、蛋白组分析和线粒体DNA纯化。精提线粒体可以用于偶联分析和体外线粒体蛋白合成等实验。
3．本产品一次可以处理约2×108个培养细胞，30mg培养细胞(相当于15瓶150mm培养细胞)可以纯化到到0.5-1.5mg线粒体。
4．本产品适用于各种动物悬浮培养细胞和贴壁培养细胞，不能用于动物实体组织。
5．提供线粒体染液，可以在操作中随时监测纯化过程中线粒体的完整性。

试剂盒组成：

粗提型(BTN111207A)

 

成分	规格
溶液A	50ml
溶液B	250ml
蔗糖	80g
詹纳斯绿B染色液(0.2%)	1ml

精提型(BTN111207B)

成分	规格
溶液A	50ml
溶液B	250ml×2
蔗糖	100g
詹纳斯绿B染色液(0.2%)	1ml
说明书	1份

储存条件：常温运输和保存，保存期限一年。

使用方法：
注意：线粒体膜对温度高度敏感，所以整个操作必须在冰上或冷室进行，所要用到的溶液和离心管都必须预先冷却，否则线粒体容易破裂。

一、准备工作(此步骤同柱式动物线粒体DNA提取试剂盒中线粒体提取步骤)。未用完的下列溶液需要-20℃保存，否则容易长菌。下次使用前务必让沉淀溶解并摇晃均匀。
1．将溶液A和溶液B放冰上预冷待用。
2．配制1.7M高比重溶液(仅限BTN111207B精提型试剂盒，BTN111207A粗提型试剂盒不需要配制此溶液)：36克蔗糖用溶液B溶解并定溶到60mL，冰上预冷待用。
3．配制1.0M低比重溶液，BTN111207A粗提型试剂盒需要100mL，配制方法是将34克蔗糖用溶液B溶解并定溶到100mL，冰上预冷待用。111207B粗提型试剂盒需要150mL，配制方法是将51克蔗糖用溶液B溶解并定溶到150mL，冰上预冷待用。
4．配制线粒体重悬液，BTN111207A粗提型试剂盒需要200mL，配制方法是将150mL溶液B和50mL 1.0M低比重溶液混合；BTN111207B精提型试剂盒需要300mL，配制方法是将225mL溶液B和75mL 1.0M低比重溶液混合，即得300mL 线粒体重悬液，冰上预冷待用。

二、线粒体粗提(此步骤同柱式动物线粒体DNA提取试剂盒中线粒体提取步骤)
5．如果提取材料是单层细胞，先用60mL自备的PBS缓冲液洗涤2×108个培养的单层细胞，共洗涤2次。然后用塑料刮匙刮下细胞，重悬在60mL PBS缓冲液中。如果是悬浮细胞，则1000g 4℃离心10分钟收集2×108个细胞，再用60mL PBS缓冲液洗涤2次，最后将细胞重悬在60mL PBS缓冲液中。
6．用平甩转子(swinging-bucket rotor)离心机1000 g 4℃离心10分钟，吸弃上清，保留细胞沉淀。
7．加入5倍体积(以细胞沉淀的体积为基数)的预冷的溶液A，轻柔重悬细胞。
8．冰上放置4-5分钟。注意：冰浴时间不要超过5分钟。
9．如果是成纤维细胞，由于其难以裂解，可将细胞重悬液在-80℃放置20-30分钟后再化冻，然后进入下步操作。如果不是成纤维细胞，则直接进入下步操作。
10．将细胞重悬液体转移到预冷的Dounce玻璃匀浆器中(工作体积为10-15mL，间隙为0.12 mm，最好是玻璃材质，否则线粒体产率会降低)匀浆适当次数。细胞株不同，其最适匀浆次数不同，一般需要40次-60次左右。匀浆是线粒体纯化最关键的步骤，故匀浆前最好先通过预实验确定最适匀浆次数，方法是每匀浆5-10次后，取2-3μl匀浆液到载玻片上，然后在相差显微镜下观察，完整细胞数量降低到20%以下为佳。
11．加入1/3体积的、预冷的1.0 M低比重溶液，轻柔混匀。
12．用平甩转子离心机4℃ 1000 g离心10分钟。沉淀含残留完整细胞、细胞碎片和细胞核，上清液含线粒体。
13．转移上清液到离心管中，冰上放置。在显微镜下检测上清液中线粒体的完整性。具体做法是先滴50μL左右上清液到载玻片上，再滴入50μl詹纳斯染液绿B染色液20分钟，油镜下观察，蓝绿色颗粒状物即为线粒体。
14．用固定角度转子(fixed-angle rotor)离心机4℃ 15000g离心15分钟，弃上清，所得棕黑色沉淀即为粗提线粒体沉淀。
15．用10mL线粒体重悬液重悬线粒体，4℃ 15000g离心15分钟，弃上清。
16．重复上步一次。
17．最后用适量的线粒体重悬液重悬线粒体，可用于各种后续实验(本试剂盒不提供相关试剂)，如果用于下面的精提操作，则用10mL线粒体重悬液重悬。

三、线粒体精提(需要超速离心机)
18．在跟超速离心机匹配的50mL的离心管中，加入10mL预冷的高比重溶液，再在上面加上10mL预冷的低比重溶液，最后再加上10mL线粒体粗提液。
19．70000g 4℃离心40分钟，线粒体将位于高比重溶液和低比重溶液之间区域。
20．小心用广口吸管吸出线粒体到新的离心管中，加入等体积的线粒体重悬液。
21．用平甩转子离心机1000 g 4℃离心10分钟，吸弃上清，保留线粒体沉淀。
22．用10mL线粒体重悬液重悬线粒体，在平甩转子离心机上4℃ 1000g离心10分钟，吸弃上清，保留线粒体沉淀。
23．再重复上步一次。
24．最后用适量线粒体重悬液重悬线粒体，得到线粒体精提液。可以直接用于Lowry法蛋白浓度测定，也可以用于其他后续实验。

我公司的动物线粒体纯化试剂盒A(粗提)现货，性价比高，货期短，送货上门，欢迎您来电咨询购买，另外，我公司还生产供应销*(代"售")下列产品：

·制霉菌素溶液
编号：BTN120694
英文名称：Nystatin Solution
规格：10mL
本产品是浓度为10mg/mL的制霉菌素甲醇溶液。参考浓度为2mg/mL。制霉菌素(制霉素;米可定；Nystatin；Fungicidin ；Mycostatin)，分子式：C18H28O2，分子量：276.41，CAS：1400-61-9。微溶于水、甲醇、乙醇。

抗性机制：制霉菌素具有共轭多烯大环内酯结构，能抑制真菌和皮藓菌的活性，对细菌无抑制作用。通过与细胞膜上的固醇类物质结合增加细胞膜对渗透的敏感性，抗霉菌及酵母，可用于高纯细胞培养，防腐。

储存条件：低温运输，-20℃避光保存，有效期6个月。

·NP-40裂解液
编号：BTN131009
英文名称：NP-40 Lysis Buffer
规格：100mL
NP-40裂解液是一种比较温和的细胞组织裂解液。NP-40裂解液裂解得到的蛋白样品可以用于常规的Western、IP和co-IP等。

产品特点：
1. 本产品裂解能力强度温和，对膜蛋白的处理能力一般；对核蛋白的提取能力较好；对胞浆蛋白、胞浆磷酸化蛋白和各种转录因子处理效果很好。
2. 本产品含有各种蛋白酶和磷酸蛋白酶抑制剂，能有效防止各种蛋白酶对目的蛋白的降解。
3. 本产品的主要成分为50mM Tris(pH7.4)，150mM NaCl，1% NP-40以及sodiu*(代"m") pyrophosphate，β-glycerophosphate，sodiu*(代"m") orthovanadate，sodiu*(代"m") fluoride，EDTA，leupeptin等多种抑制剂，可以有效抑制蛋白降解。
4. 用NP-40裂解液裂解得到的蛋白样品，可以用BCA法蛋白浓度测定试剂盒测定蛋白浓度。由于含有较高浓度的去垢剂，不能用Bradford法测定由本裂解液裂解得到样品的蛋白浓度。

储存条件：低温运输，-20℃保存，有效期一年。

使用方法：

对于培养细胞样品：
1. 融解NP-40 裂解液，混匀。取适当量的裂解液，在使用前数分钟内加入PMSF，使PMSF的最终浓度为1mM。
2. 对于贴壁细胞：去除培养液，用PBS、生理盐水或无血清培养液洗一遍(如果血清中的蛋白没有干扰，可以不洗)。按照6孔板每孔加入150-250微升裂解液的比例加入裂解液。用枪吹打数下，使裂解液和细胞充分接触。通常裂解液接触细胞1-2秒后，细胞就会被裂解。对于悬浮细胞：离心收集细胞，用手指把细胞用力弹散。按照6孔板每孔细胞加入150-250微升裂解液的比例加入裂解液。再用手指轻弹以充分裂解细胞。充分裂解后应没有明显的细胞沉淀。如果细胞量较多，必需分装成50-100万细胞/管，然后再裂解。
3. 充分裂解后，10000-14000g离心3～5分钟，取上清，即可进行后续的PAGE、Western和免疫沉淀等操作。
 裂解液用量说明 ：通常6孔板每孔细胞加入150 微升裂解液已经足够，但如果细胞密度非常高可以适当加大裂解液的用量到200 微升或250 微升。

对于组织样品：
1. 把组织剪切成细小的碎片。
2. 融解NP-40 裂解液，混匀。取适当量的裂解液，在使用前数分钟内加入PMSF，使PMSF的最终浓度为1mM。
3. 按照每20 毫克组织加入150-250微升裂解液的比例加入裂解液。(如果裂解不充分可以适当添加更多的裂解液，如果需要高浓度的蛋白样品，可以适当减少裂解液的用量。)
4. 用玻璃匀浆器匀浆，直至充分裂解。
5. 充分裂解后，10000-14000g离心3～5分钟，取上清，即可进行后续的PAGE、Western和免疫沉淀等操作。
6. 如果组织样品本身非常细小，可以适当剪切后直接加入裂解液裂解，通过强烈vortex使样品裂解充分。然后同样离心取上清，用于后续实验。直接裂解的优点是比较方便，不必使用匀浆器，缺点是不如使用匀浆器那样裂解得比较充分。
备注：
1. 为取得最佳的使用效果，尽量避免过多的反复冻融。可以适当分装后使用。
2. 裂解样品的所有步骤都需在冰上或4℃进行。


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·电泳级丙*(代"烯")酰胺干粉型
编号：BTN100864
英文名称：acrylamide，electrophoresis grade，powder
规格：200mL
本产品是电泳级丙*(代"烯")酰胺溶液(BTN80931)的升级产品。

产品特点：
1.以干粉形式提供分装好的丙*(代"烯")酰胺和甲叉双丙*(代"烯")酰胺，避免了丙*(代"烯")酰胺溶液不能长期存放的问题。
2. 粉末已经提前分装到瓶中，用户只需加入去离子水溶解即得30%的丙*(代"烯")酰胺溶液，用户不需要称量有毒的成分。
3. 丙*(代"烯")酰胺和甲叉双丙*(代"烯")酰胺分开提供，用户可以根据不同实验使用不同的比例。

产品组成：

成分	规格
丙*(代"烯")酰胺干粉	60g
甲叉双丙*(代"烯")酰胺干粉	3g
去离子水	250ml
说明书	1份

储存条件：常温运输，避光保存，有效期一年(配成溶液后只能4℃存放2个月)。

使用方法：
1. 配制 30%丙*(代"烯")酰胺溶液:在本产品提供的装有60 g 丙*(代"烯")酰胺干粉的塑料瓶中加入146mL 去离子水，充分摇晃直到溶解即得200mL 30%丙*(代"烯")酰胺溶液(用手大约摇10-20分钟)。
2. 配制 30%丙*(代"烯")酰胺-甲叉双丙*(代"烯")酰胺(19:1)溶液(30% AB溶液，下同)：
 不同实验需要加入不同比例的甲叉双丙*(代"烯")酰胺。对SDS-PAGE电泳，丙*(代"烯")酰胺与甲叉双丙*(代"烯")酰胺比例一般在19:1左右，因为此时PAGE胶的孔径最小，分辨率最高。制备方法是将3 g甲叉双丙*(代"烯")酰胺干粉加入到200mL上步配好的30%丙*(代"烯")酰胺溶液中(注意：甲叉双丙*(代"烯")酰胺干粉有神经毒性，避免吸入粉末)。配好的30%ＡＢ溶液最好4℃避光保存并在1月内用完。


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·二*异香豆素溶液(10mg/mL)
编号：BTN130540
英文名称：Dichloroisocoumarin Solution
规格：5mL
本产品为10mg/mL的DMF溶液，工作浓度为1-43μg/mL。二*异香豆素(3,4-Dichloro-2-benzopyran-1-one；3,4-DCI)，分子量是215.0，溶于DMF。它可以抑制大部分丝*酸蛋白，如，弹性蛋白酶，组织蛋白酶G,胞内蛋白酶Glu-C等，不能抑制木瓜蛋白酶、β-内酰胺酶和白*酸*基肽酶。



储存条件：低温运输，-20℃保存，有效期三个月。

·RecA蛋白
编号：BTN130661
英文名称：RecA Protein
规格：200μg
RecA在基因重组中是不可缺少的，它参与DNA 修复和紫外线诱导的突变。RecA促进lexA抑制子、umuD蛋白和lambda抑制子的自裂解。切割LexA能使20多种基因不再受到抑制。体外研究证明，在ATP参与下，RecA促进单链DNA片断与同源双链DNA片断发生链置换。

产品特点：
1．电镜分析DNA结构；
2．D环突变；
3．用RecA蛋白包被的探针来进行文库筛选；
4．切割任意一个预先设计的位点；
5．RecA导全长cDNA克隆的亲合捕获。

储存条件：低温运输、-20℃保存、有效期一年。

北京百莱博科技有限公司专业生产细胞及免疫学产品，欢迎来电咨询选购动物线粒体纯化试剂盒A(粗提)现货。