dUTP溶液，100mM优惠

特别声明：本产品及我公司所售其他产品均为科研类试剂产品，严禁用于药物、医疗及其他非科研用途。

百奥莱博专业生产销*(代"售")dUTP溶液，100mM优惠，我公司供应的分子生物学试剂品类齐全，且具有优势价格，欢迎新老客户垂询订购。

名称：dUTP溶液，100mM优惠
产地：国产|进口
英文名：dUTP Solution，100mM
编号：BTN131038
品牌：百奥莱博
dUTP(2"-脱氧-5´-三磷酸尿苷)在PCR和RT-PCR反应中替代dTTP，从而可以防止前面扩增的干扰。PCR反应中dUTP替代dTTP，导致产物中含有尿嘧啶，这种掺入适用于很多应用。将尿嘧啶-N-糖基酶 UNG(有时称为UDG)加入到PCR反应中，可切除任何污染PCR产物的尿嘧啶，从而避免假阳性的形成。

储存条件：低温运输和-20℃保存、有效期一年。

关于dUTP溶液，100mM优惠的更详细说明，请致电我公司咨询，我们将以最饱满的热情为您提供解答，此外，我公司专业供应下列产品：

·青霉素G*盐溶液
编号：BTN120698
英文名称：Penicillin G Sodium Solution
规格：10mL
本产品为浓度200mg/mL的青霉素G*盐溶液，参考浓度100mg/mL。青霉素G *盐(苄基青霉素*盐；Benzylpenicillin sodiu*(代"m") salt)，分子式：C16H17N2NaO4S，分子量：356.37，CAS号：69-57-8。溶于水。常用的用途有生化研究、培养基的配制和抗生素等。

储存条件：低温运输、-20 ℃避光保存，有效期为6个月。

·PCR专用LIC克隆套装
编号：BTN120402
英文名称：LIC Cloning Kit for PCR
规格：1μg
本产品就是基于LIC原理开发的即用型载体。LIC就是不依赖于连接的克隆技术(Ligation-Independent Cloning),它是继限制性内切酶切/连接酶克隆方法后出现的第二代DNA克隆技术，它效率高,尤其适用于大规模分子克隆，其原理如下：


产品特点：
1. 操作简单,一管式一步反应,只需加入插入片段即可,客户不需要购买任何额外的酶。
2.时间短,整个过程只要15分钟。
3.高效,比常用的AT克隆效率更高,阳性率接近于100%。
4. 克隆方向和位置精准和可控,适合表达型克隆工作。
5. 便于自动化,适合高通量克隆。
6.适用于长片段克隆。

产品组成：

 

成分	规格
LIC载体(50μg/μL)	1μg
溶液A	10μl
溶液B	150μl
阳性对照插入片段	8μl
说明书	1份

储存条件：-20℃运输及保存，有效期一年。

一. PCR引物设计,合成和PCR反应
1. 按常规方法设计PCR引物,只是必须在一条引物5´端再加上GGCGGCCGCGGTAC序列,在另一条引物5´端加上GGCGCCGGCGGTAC序列。此序列决定克隆的方向,如果不在乎方向,可以随机组合。
2. 所用引物最好为HPLC纯化获得。注意：如果购买本公司产品,免费合成LIC引物一对。
3. 按常规的方法进行PCR,最好使用高保真DNA聚合酶。
4. 按常规的胶回收的方法回收PCR片段。注意：必须去除残余的dNTP和PCR引物,否则会极大降低LIC效率。
5. 对PCR片段电泳定量,即电泳后通过肉眼比较PCR片段和DNA Marker的相对强度,通过DNA Marker条带的浓度(一般商品化的DNA Marker每条带的浓度都是已知的)推测出PCR片段的浓度。
二. PCR片段与载体退火
1.在纯化的2μL PCR产物中加入0.4μL溶液A、2μL载体(100ng)以及5μL溶液B,混合。
 注意：PCR产物跟载体的摩尔数比例最好是1：1。
2.室温放置5分钟。注意：保温时间长短很关键,不要轻易延长或缩短。
3.在PCR仪器上按75℃ 10分钟,然后放冰上或-20℃待用。
三.转化
1. 按常规方法进行转化。
2. 按菌落PCR方法筛选,可选用我公司的菌落PCR试剂盒(BTN50901)。进行快速筛选,需要T7和SP6 RNA聚合酶启动子引物。


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·SP6体外转录试剂盒
编号：BTN91107
英文名称：SP6 in vitro Transcription Kit
规格：50次
本试剂盒是基于SP6 RNA聚合酶的RNA体外转录试剂盒，它利用含有SP6启动子的模版DNA，以NTP为底物，从SP6启动子下游开始合成与模版DNA中一条链互补的RNA，简单快速获得大量的RNA分子。

产品特点：
1. 即开即用，用户只需提供含SP6启动子的DNA模板即可以进行体外转录实验，不需要单独准备每一个成份。
2. 单溶液预配液，减少加样次数，避免了操作误差，增加了可重复性。
3. 模版DNA可以是线性化的质粒DNA，也可以是PCR扩增产物。
4.可以合成的RNA的最佳长度在20nt到2000nt之间。
5.产品配方经过精心优化，每μg DNA模版可以合成2-6μg RNA。
 得到的RNA可以用于RNA 结构研究、核酶生物化学、体外翻译、RNA-蛋白质相互作用、反义技术、SELEX技术和RNA干扰(RNAi)等实验。

试剂盒组成：

成分	规格
转录预配液(2×)	0.5mL
阳性对照DNA(1.3 kb片段)	20μL(10 ng/μL)
SP6 RNA聚合酶混合液	50μl
RNase-free水	1ml
说明书	1份

储存条件：低温运输，-20℃保存，有效期一年。

使用方法：
一、制备DNA模板
PCR片段和质粒DNA都可以用作体外转录的模板，但是必须注意以下几点。一是必须使用线性化的DNA。如果是质粒DNA，则必须先用适当的限制性内切酶切成线状。二是需要转录的DNA序列的上游必须有SP6启动子。如果模板是PCR产物，则可以在设计引物时将SP6启动子序列(5´ATT TAG GTG ACA CTA TAG AGN G 3´)加上，转录其实是从3端G AGN G中的第一个G开始。如果是将DNA片段克隆到载体上，则需要选择有SP6启动子的载体，并且克隆位点必须位于SP6启动子下游。三是需要转录的DNA序列的下游端最好不要是3´突出。如果是3´突出(如选择了Pst I来线性化质粒)，则最好用T4 DNA聚合酶修平。四是必须保证DNA模板中没有RNase。由于提取质粒DNA的过程中一般要使用大量的RNase A，因此质粒DNA一般都有严重的RNase A污染，所以在用作模板前，最好采取胶回收得方法回收质粒DNA。并且加入少量总RNA一起保温，然后电泳检测RNA是否被降解，以此判断纯化的DNA模板是否有残留RNase A。
二、体外转录反应
1.在一个RNase-free的塑料离心管中，在室温下(不是在4℃下)按次序加入下列成分：

成分	加入量	备注
DNA模板	xμL	总量在50 ng-1μg(如果模板是PCR片段，建议用50 ng左右；如果模板是质粒DNA，建议用1μg左右；如果用本产品提供的阳性对照，建议用4μL)
SP6转录预配液(2×)	10μl	本成分还含其他促进剂，所以是混合物
RNase-free水	补水到20μL

注：此为20μL反应体系的用量，对其他反应体系，各成分的用量可以按比例增减。如果需要标记RNA探针，则需要订购NTP分开的试剂盒。如果需要得到加帽RNA，则需要加入自备的加帽修饰核苷酸(本公司有各种加帽修饰核苷酸)。
2. 37℃保温1-2小时。注意：延长保温时间并不能提高产量。
3. 70℃加热10分钟灭活SP6 RNA聚合酶。
4. 取1-3μL电泳检测转录效果。一般1μg DNA可以合成 5-10μg的RNA。
5. 得到的RNA可以放-80℃保存。

若需进一步去除DNA模板，可参考下列操作步骤，但所用试剂需另行购买，本试剂盒不提供。
1.在体外转录体系中加入3-5U自备的RNase-free DNase(BTN90903；3-5U/μL)。
2. 37℃保温15-30分钟。
3. 补水到100μL。
4. 用等体积(100μL)的Tris饱和酚-*仿抽提一次去除残留的DNase和RNA聚合酶。
5.在上清中加200μL自备的微量核酸沉淀剂(BTN50903；用前需要摇晃混匀)，振荡后15000rpm离心3～5分钟，弃上清。
6. 加入1mL 75%乙醇，震荡10秒后15000rpm离心3～5分钟，弃上清。
7. 短暂离心数秒，用枪头吸弃上清。
8. 晾干半分钟，所得沉淀即去除DNA模板后的RNA。可溶于RNase-free水中后立即使用或放-80℃长期保存。

疑难解答：
1. 没有RNA产物。最常见原因是模板有RNase污染，可用纯化的RNA跟模板DNA一起保温，再检测RNA是否降解。还可以增加RNase Inhibitor用量，本试剂盒缓冲液和酶混合液中有RNase inhibitor，如果模板RNase污染严重，可能需要用户补加RNase inhibitor。
2. RNA产量低。最常见的原因是DNA模板。在转录序列的第一个和第二个碱基最好都是G，在前14个碱基内避免有U存在。
3. RNA长度比预期的短。可能是模板序列中有SP6 RNA聚合酶的终止序列。可以改用SP6体外转录试剂盒(启动子也必须改成SP6启动子)。
4. RNA长度比预计的长。SP6 RNA聚合酶跟Taq DNA聚合酶一样，有不依赖于模板的加尾功能，最多有一半的RNA可以带一个或两个碱基的尾巴。如果RNA长度比预计的长很多，使用的模板又是质粒DNA，则可能是质粒DNA线性化不彻底。
5. 5´单磷酸还是三磷酸。如果使用GTP，则得到的RNA是三磷酸，体外转录时如果保温时间太长(如12小时)，则有50%的三磷酸会变成单磷酸。如果在转录体系中加入GMP，则SP6 RNA聚合酶将优先使用GMP，所得RNA产物中5´端是单磷酸的比例将大大增加。
6. 如何得到带帽RNA？需加入带帽NTP类似物即可，本公司提供5种供选择。


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异硫*酸荧光素 DMPPDA?2HC1 3326-32-7
F050303 人IgM抗体 Human IgM
一氧化*(代"氮")合酶染色液   2×10ml|2×20ml
ARB12572 大鼠脑源性神经营养因子(BDNF)elisa测定使用说明书 Rat brain derived neurotrophic facor,bdnf ELISA KIT
9048-71-9 葡聚糖凝胶G-50 Sephadex G-50 medium
脂肪酶(LPS)检测试剂盒(比浊比色法)   50T|100T
头孢*苄 BOC-L-Prolinol 15686-71-2
ARB10900 人抗斑疹伤寒抗体(Anti-typhus-Ab)Elisa方法检测 Human anti-typhus antibody ELISA KIT
PY08-076  磷酸盐缓冲液 9ml  20支/盒  用作稀释液
ARB13520 鱼维生素D3(VD3)ELISA代做ELISA实验 
磷酸丙糖异构酶 Sodium tetraborate decahydrate 9023-78-3
KG203 快速DNA提取检测试剂盒
ARB14073 人腺病毒Ⅲ抗体(AdenovIrus Ⅲ-Ab)ELISA检测服务 
低聚异麦芽糖 Fmoc-D-Val-OH 499-40-1
68990-09-0 BeefExtract 牛肉膏
ARB13357 牛白介素2(IL-2)Elisa定量检测 Bovine interleukin 2,IL-2 ELISA KIT
L0203 IgG(1、2a、2b)类单克隆抗体腹水纯化试剂盒 

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