dTTP溶液，2.5mM特价促销

特别声明：本产品及我公司所售其他产品均为科研类试剂产品，严禁用于药物、医疗及其他非科研用途。

dTTP溶液，2.5mM特价促销的品牌：百奥莱博，是优质的核酸扩增(PCR)产品，用于科研实验，本产品质量好，且极具价格优势，深为用户称道，了解更多dTTP溶液，2.5mM等核酸扩增(PCR)产品请联*(代"系")我司咨询订购。

名称：dTTP溶液，2.5mM特价促销
产地：国产|进口
品牌：百奥莱博
编号：BTN130913
规格：2mL
dTTP分子式为C10H14N2O14P3Na3,分子量是548.1，消光系数为：9.6×103M-1×cm-1(pH7.0)。λmax为267nm。

储存条件：低温运输和-20℃保存、有效期一年。

关于dTTP溶液，2.5mM特价促销的更详细说明，请致电我公司咨询，我们将以最饱满的热情为您提供解答，此外，我公司专业供应下列产品：

·大提柱式质粒DNA提取试剂盒
编号：BTN80912
英文名称：Mass-plasmid DNA column extraction kit
规格：5次
本试剂盒是用于质粒DNA大量制备与纯化的试剂盒。菌体先经碱裂解法处理，再通过离心吸附柱，专一结合DNA，最后洗去杂质，高效快速提取质粒DNA，全*(代"套")操作可以在30分钟之内完成。使用本试剂盒可从50-100mL 过夜培养的菌液纯化得到高达300-500μg的高纯度质粒DNA(OD260/OD280= 1.8-2.0)，可以直接用于酶切、转化、测序及PCR等。

试剂盒特点：
1．快速、步骤少，整个操作在半个小时之内完成。
2．纯度高，采用本试剂盒提取的质粒OD 比值在1.8-2.0 之间。
3．产量高，每毫升过夜培养的细菌可以提取到2-5μg/mL。
4．用途广，适用于低拷贝和高拷贝质粒。
5．价格低，比多数国内同类产品的价格更便宜。

试剂盒组成：

 

成分	规格
溶液A	30ml
溶液B	30ml
RNase A溶液(10mg/mL)	0.15ml
溶液C	40ml
大提离心吸附柱	5套
通用洗柱液	100ml
DNA洗脱液2.0	10ml×2
说明书	1份

储存条件：RNase A溶液需-20℃保存，其余成分可室温或4℃保存，如有沉淀可加热溶解后再使用。

使用方法：
1. 用250mL离心管收集100-300mL菌液，5000rpm离心10分钟，去除上清。
2. 往细菌沉淀中加入6mL溶液A，充分振荡悬浮(第一次使用时需要将RNase A溶液全部加入到溶液A中并混合均匀，未用完的、含RNase A的溶液A需放4℃保存)。注意：充分重悬细胞沉淀使之无细胞结块状物对于获得高的质粒产量十分重要。
3. 加入6mL溶液B，温和翻转10 余次至透明。若混合液不透明，应减少细菌的用量或室温放置5-10分钟直到裂解液变透明。注意: 避免剧烈振荡，否则细菌基因组DNA 将断裂为小片段，与质粒难以分离，污染质粒DNA。
4. 加入冰浴的8mL溶液C，颠倒混匀，冰上放置10分钟。混合物中将有白色絮状物形成。注意不要过分振荡。
5. 6000rpm离心10分钟。如果离心管承受能力强，离心速度还可以适当提高以充分沉淀絮状物。
6. 将上清液(约20mL)转移到离心吸附柱中，放入50mL 套管中。
7. 6000rpm离心5分钟，质粒DNA 将与离心吸附柱中的膜结合。弃穿透液。
8. 将10mL 通用洗柱液加入到离心吸附柱中，室温静置2分钟后6000rpm离心5分钟，弃穿透液。
9. 重复上步一次，即将10mL 通用洗柱液加入到离心吸附柱中，室温静置2分钟后6000rpm离心5分钟，弃穿透液。
10.室温6000rpm 空甩5分钟，弃穿透液。注意：此步对去除残留通用洗柱液很重要，否则通用洗柱液会影响DNA的使用。
11. 将离心吸附柱放入一个自备的、干净的50mL塑料离心管中，加1mL DNA洗脱液2.0(洗脱液如加热到50-65℃效果更佳)，室温静置2分钟后6000rpm离心5分钟，收集液即是质粒DNA溶液。
12. 本试剂盒中的离心吸附柱吸附能力较强，所以再用1mL DNA 洗脱液2.0洗脱3-4次才能把绝大部分质粒DNA 洗脱下来。得到的RNA可以收集在一起立即使用或存放于-80℃待用。注：如果DNA 洗脱液不够，可以用自备的DEPC 水代替。
 注：一般情况下，第一次洗脱可以洗脱约25%的质粒DNA；第二次洗脱可以洗脱约35%的质粒DNA；第三次洗脱可以洗脱约20%的质粒DNA；第四次洗脱可以洗脱约10%的质粒DNA；第五次洗脱可以洗脱约8%的质粒DNA。
13. 合并所得质粒DNA，立即使用或-20℃储存。如果需要使用液相内毒素清除剂清除质粒DNA中的内毒素，可以直接将此步所得的DNA溶液用于去内毒素处理。如果DNA浓度太低，可以另购本公司的核酸浓缩剂进行浓缩。

注意事项：
1．细菌培养时间一般为12-16小时，但接种量大时应减少时间。过度培养会降低质粒的质量甚至导致质粒DNA突变。
2．溶液A：溶液B：溶液C的比例为3：3：4。若细菌量增大，需按此比例放大这些溶液的使用量。
3．随菌体增多应延长溶液B的作用时间，直至溶液成粘稠透明状。但时间过长会导致质粒DNA变性。
4．加溶液C后形成的白色沉淀中有变性的蛋白质、细菌基因组DNA和细胞碎片，离心后应避免带入到后续处理中。
5．通用洗柱液洗涤离心柱后必须甩干一次，否则残留通用洗柱液中的乙醇会干扰后续实验。
6．质粒的具体产量跟细菌量、质粒拷贝数、质粒大小和操作规范程度密切相关。100mL高拷贝的菌液一般能得到700-1500ug质粒DNA，100mL低拷贝的菌液一般能得到150-350ug质粒DNA。
7．纯化的质粒在电泳中表现为2-3 条带有时甚至为4-6 条带均属正常，未分开的环套质粒，易被误判为基因组DNA。


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·软骨RNA提取试剂盒
编号：BTN70401
英文名称：Cartilage RNA Extraction Kit
规格：50次
本试剂盒专门从各种软骨组织样品中快速提取总RNA的试剂盒，它能有效克服传统TRIzol方法提取软骨组织RNA时，十分容易产生糖蛋白和酸性多糖污染这一缺点。

试剂盒特点：
1. 能有效去除糖蛋白、粘蛋白污染，OD260/280一般均在1.9以上。
2. RNA产率一般为5-15μg/100mg。
3. 操作简单，整个提取过程一般只需要10多分钟。
4. 得到的RNA可以直接用于RT-PCR、Northern杂交、mRNA纯化、Primer Extension、RNA Protection、in vitro translation等研究。

试剂盒组成：

成分	规格
溶液A	50ml
溶液B	15ml
溶液C	25ml
溶液D	25ml
说明书	1份

储存条件：常温运输，4℃保存，有效期一年。

使用方法：
1. 先将50-200mg新鲜或冷冻的软骨组织液氮研磨成粉，加入1mL溶液A(使用前必须放在65℃水浴使沉淀彻底溶解)溶解，然后将研磨物转移到新的1.5mL离心管中，振荡混合30秒。也可以将软骨组织剪碎后与溶液A一起匀浆，再转移到离心管中。
2.在装有研磨物/匀浆物的离心管中加入0.3mL的溶液B，振荡器振荡30秒混匀。注意：振荡器振荡时必须使管底溶液震荡起来。
3. 加入0.2mL自备*仿，振荡器振荡30秒混匀。注意：振荡器振荡时必须使管底溶液震荡起来。
4.室温12000～15000g离心2-5分钟。
5. 将上清液(约0.8mL)转移到另一干净的1.5mL塑料离心管中，下层有机相和中间层含有DNA、蛋白质和其他杂质，避免触及或吸取。最好留下100μl上清液不取。
6.在上清液中加入0.5mL的溶液C，振荡器振荡30秒混匀。注意：振荡器振荡时必须使管底溶液震荡起来。
7. 加入0.2mL的自备*仿，振荡器振荡30秒混匀。注意：振荡器振荡时必须使管底溶液震荡起来。
8.室温12000～15000g离心3分钟，两相间将有白色膜状物(蛋白质)形成。
9. 将上清液(约1mL)转移到另一干净的1.5mL塑料离心管中，避免触及或吸取有机相及其上面的白色膜状物。
10.在上清液中加入0.5倍体积的溶液D，振荡器振荡30秒混匀，此时溶液呈白色浑浊状。注意：振荡器振荡时必须使管底溶液震荡起来。
11.室温12000～15000g离心5-10分钟，RNA将在管底形成白色沉淀(约黄豆大小)。如果组织样品量少或需要提高RNA回收率，也可以延长离心时间到20-30分钟。
12.在离心管中加入1mL 75%的乙醇，振荡器上振荡混匀30秒。
13.室温12000～15000g离心5分钟，RNA将在管底形成细小沉淀(约芝麻大小)。
14. 重复上步75%的乙醇洗涤一次，RNA将在管底形成细小沉淀。
15.小心吸弃上清液，注意不要吸弃RNA沉淀。
16. 再短暂快速离心，用移液枪小心吸弃残留液。注意：不要吸弃沉淀。此步将有效去除残留的乙醇，否则后续反应会受到影响。
17. 加入适量(一般为20-50μl)RNase-free水使RNA沉淀溶解，存放于-80℃或立即使用。千万不要用真空离心法使RNA沉淀过于干燥，否则RNA将变得十分难溶。
18. 检测

a)RNA完整性的电泳检测
如果需要做Northern杂交，强烈建议用户使用甲醛变性胶进行RNA电泳，因为非变性胶不能分离所有的RNA分子(BioTechniques，28：414，2000)。如果是简单检测，可以使用TAE或百奥莱博的SuperBuffer-2 DNA/RNA两用快速电泳液，但文献报道必须使用变性上样液(BioTechniques，9：558，1990)。普通DNA上样液不含变性剂，也没经过去RNase处理，所以最好不要使用。
尤其需要注意的是不要使用TBE进行RNA电泳，因为TBE所含硼*(代"酸")是研究多糖的经典方法----硼*(代"酸")络合法中的关键成分，硼*(代"酸")通过与RNA核糖中的羟基发生络合反应，形成RNA分子内或RNA分子间的络合复合物，使同样长度的RNA具有不同的泳动速度，电泳条带弥散，同时有大的RNA络合复合物迟留在加样孔中(一般会误以为是基因组DNA污染)。RNA分子内或RNA分子间的络合物的形成的多少和比例又与硼*(代"酸")与RNA的数量比例有关，而RNA样品中污染的其他多糖也会参与此反应，使硼*(代"酸")对RNA电泳的影响更复杂，所以TBE对RNA电泳的影响没有规律性和重复性。有的样品可以使用有的又不行，最好是避免使用。
由于动物细胞中70-80%的RNA为rRNA，后者又由28S(约4800nt)，18S(约1900nt)和5.8S(约120nt)三种组成，所以变性胶电泳后应该在UV下看见三条清晰的rRNA带。由于核酸长度与结合EB的数量成正比(当然还与RNA的二级结构有关，双链部分结合能力比单链部分强)，所以28S rRNA条带的荧光强度一般比18S rRNA条带的荧光强度强1.5-2.3倍。如果这两条rRNA带不清晰或比例小于此范围则表示RNA有降解(因为大的RNA被酶降解的可能更大)。

b)RNA产量产率测定
将5-10μl RNA溶于TE缓冲液中(pH7.5-8.2之间)检测其在OD260的光吸收。通过光吸收可以得出RNA浓度(1 OD260的RNA=40μg/mL)，进而计算出RNA的产量(浓度X体积)和产率(RNA产量/组织用量)。
注意不要将RNA稀释在DEPC水中检测OD260和OD280，否则光吸收比在TE中测得的低10%-15%。

c)RNA纯度测定
无污染的总RNA的OD260/OD280一般在1.8-2.1之间(具体数值与其碱基组成和溶液成分等多种因素有关)，OD260/OD230一般在2.0-2.3之间，如果低于或高于此范围则分别表示样品可能有蛋白质或多糖的污染，但一般不影响RT-PCR等反应。蛋白质污染可以通过酚/*仿抽提一次然后酒精沉淀去除，DNA和多糖污染可以分别用百奥莱博的DNA Scavenger和PS Scavenger去除。



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