萤光素酶报告基因检测试剂盒(海肾) 细胞生物学试剂

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名称：萤光素酶报告基因检测试剂盒(海肾) 细胞生物学试剂
品牌：百奥莱博
规格：100次|1000次
编号：YT272
英文名：Renilla Luciferase Reporter Gene Assay Kit
产地：国产|进口
本试剂盒是一种以肠腔素为底物来检测海肾萤光素酶，简称renilla luciferase活性的试剂盒。

海肾萤光素酶是一种分子量约为36kD的蛋白，在氧气存在的条件下，可以催化Coelenterazine氧化成Coelenteramide。在Coelenterazine氧化的过程中，会发出生物萤光。生物萤光可以通过化学发光仪或液闪测定仪进行测定。本试剂盒的检测原理参考下图。


海肾萤光素酶的检测原理图。

通过萤光素和萤光素酶这一生物发光体系，可以非常灵敏、高效地检测基因的表达。通常把感兴趣基因的转录调控元件或5’启动子区克隆在luciferase的上游，或把3’-UTR区克隆在luciferase的下游等，构建成报告基因质粒。然后转染细胞，用适当药物等处理细胞后裂解细胞，测定萤光素酶活性。通过萤光素酶活性的高低来判断药物处理等对目的基因的转录调控作用。海肾萤光素酶一方面常用作萤火虫萤光素酶报告基因检测的内参，以消除由于质粒的转染效率不同而带来的误差；另一方面海肾萤光素酶也可以和萤火虫萤光素酶一样被用于常规的报告基因检测。海肾萤光素酶催化Coelenterazine发光的最强发光波长为465nm。

注意事项：
1. 为取得最佳测定效果，在用单管的化学发光仪测定时，样品和测定试剂混合后到测定前的时间应尽量控制在相同时间内，例如30秒内；使用具有化学发光测定功能的多功能荧光酶标仪时，宜先把样品全部加好，然后统一加入海肾萤光素酶检测工作液。
2. 由于温度对酶反应有影响，所以测定时样品和试剂均需达到室温后再进行测定。
3. 样品和测定试剂混合后，必须等待1-2秒，再进行测定。测定时间通常为10秒，根据情况也可以测定更长或更短时间，但是同一批样品宜使用相同的测定时间。
4. 海肾萤光素酶检测底物(100×)配制在无水乙醇中。由于无水乙醇容易挥发，有时会在初次使用时发现体积明显小于100μl的情况，此时用无水乙醇把体积补足至100μl，并混匀后即可使用。
5. 海肾萤光素酶检测工作液宜配制后立即使用。如不能立即使用，-20℃可以保存一周。随着保存时间的延长检测效果会不断下降，因此不可配制成工作液后长期保存。
6. 为避免由于质粒转染细胞时效率的差异而带来的误差，可以同时转入适当的萤火虫萤光素酶的报告基因质粒作为内参，采用百奥莱博的双萤光素酶报告基因检测试剂盒(YT272)进行检测；也可以同时转入β-半乳糖苷酶报告基因质粒作为内参，然后采用百奥莱博的β-半乳糖苷酶报告基因检测试剂盒(YT274)进行检测。采用本试剂盒中的报告基因细胞裂解液裂解获得的样品可以直接用于β-半乳糖苷酶报告基因检测试剂盒(YT274)的检测。

储存条件：-20℃，有效期一年。

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·JNK抑制剂(SP600125)
编号：YT351
英文名称：c-Jun N-terminal kinase Inhibitor
规格：5mg|25mg|100mg
本品是一种常用的JNK的高选择性抑制剂。对于JNK1和JNK2的IC50为40nM，对于JNK3的IC50为90nM。对于JNK的选择性抑制比对于ERK1和p38-MAPK的抑制高300倍以上。在细胞中，SP600125可以显著抑制JNK介导的c-Jun磷酸化，抑制IL-2、IFN-γ、TNF-α和COX2等基因的表达。SP600125常用于JNK信号途径的研究。本品可以溶解于DMSO(溶解度约为15mg/ml)，不溶于水。溶解于DMSO配制成的储存液可以在-20度稳定保存2个月。

CAS：129-56-6
分子式：C14H8N2O
分子量：220.23
纯度：＞98%

储存条件：-20℃避光，有效期一年。

·染色质免疫沉淀检测试剂盒(ChIP检测试剂盒)
编号：YT884
英文名称：Chromatin Immunoprecipitation(ChIP)Assay Kit
规格：22次
本试剂盒用于通过免疫沉淀来沉淀和目标蛋白结合的染色质片段，最后通过PCR或Southern等方法来检测沉淀的染色质片段的试剂盒。通常用于检测特定的转录因子或组蛋白等基因组DNA结合蛋白是否和预期的特定基因组DNA序列在同一复合物中。

通过ChIP检测可以获得在体的(In Vivo)目标蛋白和预期基因组DNA片段是否在同一复合物中的结论。EMSA，也称gel shift获得的结果是体外的(In Vitro)目标蛋白和预期基因组DNA片段的结合结果，可以推断细胞内也发生类似的结合，但并不代表该情况在细胞内也真实发生。而ChIP的检测结果则可明确说明这种结合在细胞内是真实发生的。

本ChIP Assay Kit采用了Protein A+G Agarose，比Protein A Agarose或Protein G Agarose适合于免疫沉淀更多种类的抗体，包括mouse IgG1，IgG2a, IgG2b, IgG3, IgA, rat IgG1, IgG2a, IgG2b, IgG2c, rabbit IgG, rabbit and goat polyclonal Abs，以及human IgG1, IgG2, IgG3和IgG4。

本试剂盒中经过Salmon Sperm DNA预饱和的Protein A+G Agarose和目的基因组DNA的非特异性结合大大下降。

提供了预混合的对照引物(Control Primers)。可用于扩增human GAPDH的部分相应序列，引物序列为：
5"-TACTAGCGGTTTTACGGGCG-3"；
5"-TCGAACAGGAGGAGCAGAGAGCGA-3"

本ChIP Assay Kit如果用于常规的染色质免疫沉淀，共可以免疫沉淀22个样品。

产品组份：
Protein A+G Agarose/Salmon Sperm DNA————3ml
Glycine Solution(10X)————————————30ml
ChIP Dilution Buffer————————————48ml
Low Salt Immune Complex Wash Buffer————24ml
High Salt Immune Complex Wash Buffer————24ml
LiCl Immune Complex Wash Buffer——————24ml
TE Buffer—————————————————48ml
0.5M EDTA—————————————————250μl
5M NaCl——————————————————500μl
1M Tris, pH 6.5——————————————500μl
SDS Lysis Buffer—————————————10ml
Control Primers(5μM each)————————0.1ml

储存条件：4℃避光，有效期一年。

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