T4 多聚核苷酸激酶(3´磷酸酶活性缺失) 分子生物学试剂

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名称：T4 多聚核苷酸激酶(3´磷酸酶活性缺失) 分子生物学试剂
英文名：T4 polynucleotide kinase (3 phosphatase deficiency)
规格：1KU|200U
产地：国产|进口
特性:
DNA 或 RNA 5´ 末端的磷酸化，以便进行连接反应。
DNA 或 RNA 的末端标记，用作探针和进行 DNA 测序
用 T4 多聚核苷酸激酶（M0201）除去 3´ 磷酸基团
T4 多聚核苷酸激酶（缺失 3´ 磷酸酶活性）（M0236）将 3´ 端已经磷酸化的单核苷酸 5´ 磷酸化，制备pNp 底物，用于添加到 DNA 或 RNA的 3´ 端
用 T4 多聚核苷酸激酶（缺失 3´ 磷酸酶活性）（M0236）对 3´ 端有磷酸基团的寡核苷酸的 5´ 端进行标记
概述:
T4 多聚核苷酸激酶能够催化 ATP 的 γ-位磷酸基团转移到寡核苷酸链（双链或单链 DNA 或 RNA）的 5´ -羟基末端以及 3´ -单磷酸核苷上。T4 多聚核苷酸激酶（M0201）还具有 3´ 磷酸酶活性，将 3´ -磷酸基团从寡核苷酸的 3´ 磷酸末端、脱氧 3´ -单磷酸核苷和脱氧 3´ -二磷酸核苷上水解掉。经修饰后的酶（M0236）具有所有激酶的活性，但是缺失了 3´ 磷酸酶活性。
来源:
重组 E. coli 菌株，克隆有 T4 多聚核苷酸激酶或修饰的 T4 多聚核苷酸激酶基因。
反应条件:
1X T4 多聚核苷酸激酶反应缓冲液
[70 mM Tris-HCl（pH 7.6 @ 25℃），10 mM MgCl2，5 mM DTT]，37℃ 温育。
热失活:65℃ 加热 20 分钟。
注意事项:
达到最佳酶活力，需要新鲜缓冲液（在旧缓冲液中，由于氧化造成的 DTT 含量减少会降低酶活力）。
放射性标记反应:
50 μl 反应体系中，用 1X T4 多聚核苷酸激酶反应缓冲液、50 pmol 的 γ-[32P] ATP 和 20 单位的酶 37℃ 温育 30 分钟可催化 1-50 pmol 的 5´ 末端磷酸化。[33P] ATP 可代替 [32P] ATP 作标记反应。
CTP、GTP、TTP、UTP、dATP 及 dTTP 均可替代 ATP 作为磷酸供体。
DNA 或 RNA 磷酸化反应（放射性和非放射性）操作流程请联*(代"系")我们咨询。
要提高平齐末端或 5´ 凹陷末端的磷酸化效率，可在加入 T4 多聚核苷酸激酶前，先将 DNA 溶液于 70℃ 加热 5 分钟，然后冰上冷却，并加入 5%（W/V）的 PEG-8,000。
T4 多聚核苷酸激酶需要 ATP 才能发挥活性，但是为了适用于高活力的放射性标记反应:，在随酶提供的反应缓冲液中不含 ATP。
一般来说，进行激酶反应之后是连接反应。在这种情况下，T4 多聚核苷酸激酶反应在连接酶反应缓冲液中 37℃ 温育 30 分钟即可。反应后的产物可直接进行连接，无需改变缓冲液和进行热失活。如果连接时需要保持其它 DNA 片段的去磷酸化状态，则需要在连接反应前热失活 T4 多聚核苷酸激酶。
质保声明:
T4 多聚核苷酸激酶和 T4 多聚核苷酸激酶（3´ 磷酸酶活性缺失）经过严格的质控检测，确保该产品具有最高的活性和纯度。
单位定义:
1 单位即 1 个 Richardson 单位，指 37℃条件下，30 分钟内催化 1 nmol 酸不溶性 [32P] 掺入所需要的酶量（1）。
浓度:
10,000 units/ml。

更多有关T4 多聚核苷酸激酶(3´磷酸酶活性缺失) 分子生物学试剂的价格及使用说明等，请联*(代"系")我们的业务经理王欣女士咨询，我公司还销*(代"售")以下产品：
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·FseI限制性内切酶
编号：SV0376
英文名称：FseI Restriction Endonuclease
规格：500U|100U|50U
在不同反应缓冲液的活性:
BalbBuffer 1.1: 100%
BalbBuffer 2.1: 75%
BalbBuffer 3.1: <10%
CutSmart Buffer: 100%
特性:
CutSmart、重组酶、省时酶。
反应条件:
CutSmart 缓冲液，37℃。
热失活:65℃ 20 分钟。
浓度:
2,000units/ml。
甲基化敏感性:
对 dcm 和哺乳动物 CpG甲基化敏感。
注意事项:
–70℃ 贮存。

·HEN1 miRNA 甲基转移酶
编号：SV1374
英文名称：FseI Restriction Endonuclease
规格：5KU|1KU
特性:
siRNA 和 miRNA/miRNA 的 3´ 末端标记
概述:
HEN1 是植物 miRNA 甲基转移酶，可甲基化双链短 RNA 核糖末端。拟南芥中，miRNA 和 siRNA 的 3´ 核糖 2´ -0-甲基化就是由 HEN1 介导的。在 HEN1 突变体中，没有甲基化的 3´ 末端有 poly ( U )尾，预示 3´ 末端的甲基化可以保护小 RNA 免于尿苷化。纯化的 HEN1 既可甲基化 miRNA/miRNA 又可甲基化 siRNA 双链，特别是含有两个碱基突出的 21-24 个核苷酸的双链 RNA。HEN1 不能甲基化单链 RNA 或 DNA。
来源:
携带克隆有拟南芥 HEN1 基因的 E. coli 菌株。
反应条件:
25 μl 反应体系中加入:1X BalbBuffer 2
[10 mM Tris-HCl，50 mM NaCl，1mM DTT，10 mM MgCl2，( pH 7.9 @ 25℃ ) ]，128 μM S-腺苷甲硫*酸和 500 ng miRNA 复合体，37℃ 温育。
热失活:70℃ 10 分钟。
使用注意事项:
在 25 μl 反应体系中可完全甲基化高达 500 ng miRNA 复合体或 75 pmol 3´ 末端。
SAM 使用前应用 H2O 以 1:10 的比例稀释。标记 miRNA 时，可用 2 μl [14C] SAM 代替非同位素标记的 SAM，欲提高标记比活性，可降低 miRNA 的量。
单位定义:
1 单位指 37℃ 条件下，10 分钟将 1 pmol 甲基基团转移到双链 miRNA 上所需的酶量。
浓度:
50,000 units/ml。


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2,2,6,6-四甲基-1-哌*(代"啶")酮 D-Alanine 2564-83-2
米氏酮 TCEP 90-94-8
DNA Marker III(200～4500bp) 
酵母核蛋白提取试剂盒   50T|100T
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BTN130618 T7 DNA聚合酶(未修饰) T7 DNA Polymerase(unmodified)
酚酞-尼罗蓝指示剂   100ml
EP101 PfuDNA Polymerase
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吖啶酮 IUPAC 578-95-0
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DL-正缬*酸 Phenylpyruvic acid 760-78-1
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尿血红蛋白定性检测试剂盒(化学法)   60T
7791-18-6 Magnesium chloride hexahydrate *化*六水
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Caspase 3 活性检测试剂盒(比色法)   50T|100T
HC0321 Genex8道可调移液器
69-52-3 *苄青霉素 Ampicillin
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硫代乙醇酸* D-Tryptophanol 367-51-1

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