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- 详细信息
- 询价记录
- 文献和实验
- 技术资料
- 细胞类型:
原代细胞
- 品系:
原代细胞
- 组织来源:
人,鸡,大小鼠
- 物种来源:
人,鸡,大小鼠
- 免疫类型:
见说明书
- 细胞形态:
见说明书
- 运输方式:
低温运输
- 年限:
5-10年
- 生长状态:
贴壁/悬浮
- 规格:
5×105cells/T25培养瓶
小鼠脾淋巴细胞培养基信息:
Neurobasal-A、B-27 Supplement、Penicillin、Streptomycin等
我们推荐使用
二、细胞培养状态
发货时发送细胞电子版照片
三、使用方法
客户收到小鼠脾淋巴细胞后,请按照以下方法进行操作。
1. 取出T25细胞培养瓶,用75%酒精消毒瓶身,拆下封口膜,放入37℃、5%CO2、饱和湿度的细胞培养箱中静置3-4h,以稳定细胞状态。
2. 细胞消化
1) 吸出T25细胞培养瓶中的培养基,用PBS清洗细胞一次;
2) 添加0.25%胰蛋白酶消化液1mL至培养瓶中,轻微转动培养瓶至消化液覆盖整个培养瓶底后,吸出多余胰蛋白酶消化液,37℃温浴1-3min;倒置显微镜下观察,待细胞回缩变圆后,再加入5ml完全培养基终止消化;
3) 用吸管轻轻吹打混匀、分散细胞,置于37℃、5%CO2、饱和湿度的细胞培养箱中静置培养;
4) 待细胞完全贴壁后,培养观察;之后每隔2-3天更换新鲜的完全培养基。
四、注意事项
1. 培养基于4℃条件下可保存3-6个月。
2. 在细胞培养过程中,请注意保持无菌操作。
3. 传代培养过程中,胰酶消化时间不宜过长,否则会影响细胞贴壁及其生长状态。
4. 建议客户收到细胞后前3天每个倍数各拍几张细胞照片,记录细胞状态,便于和技术部沟通;由于运输的原因,个别敏感细胞会出现不稳定的情况,请及时和我们联系,详尽告知细胞的具体情况,以便我们的技术人员跟踪、回访直至问题得到解决。
5. 该细胞只可用于科研。
备注:由于实验所用试剂、操作环境及操作手法的不同,以上方法仅供各实验室参考小鼠脾淋巴细胞
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文献和实验细胞,计数,并调整细胞浓度至1×107/mL。 注意事项: 一个正常大小的脾脏,根据经验大约可以得到4×107个细胞,实际细胞数以计数结果为准。 淋巴细胞约占小鼠脾脏裂解红细胞后总细胞量的60%~70%。 未染色的脾脏细胞样本,可以在荧光通道中看到少量(大约百分之零点几)非特异性信号。 若没有组织研磨棒,也可以用注射器里面的推杆替代。用推杆前端的橡皮垫研磨脾脏。 收集的脾脏细胞如需进一步培养,取小鼠脾脏时需置于无菌操作台上。如果只是做普通的流式实验,则可以不考虑无菌环境。 PBS可以用细胞染色染冲液
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Protocal: 1.小鼠颈椎脱臼处死,75%乙醇浸泡3分钟,取出小鼠置于无菌纸上,左腹侧朝上; 2.在小鼠左腹侧中部剪开小口,撕开皮肤,暴露腹壁,可见红色长条状脾脏; 3.在脾脏下侧提起腹膜,剪开后上翻,暴露脾脏,用镊子提起脾脏,眼科剪分离脾脏下面的结缔组织,取出脾脏。放入盛有5ml Hanks 液的培养皿中; 4.A:梳刮法:脾脏可用镊子轻轻梳刮,避免将脾脏弄成碎片,将细胞悬液吸入 离心管 中,自然沉降5分钟,将悬液移至另一 离心
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