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- 文献和实验
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267
- 英文名:
10×RIPA Lysis Buffer (Medium),without enzyme inhibitors
- 保质期:
12个月
- 供应商:
北京百奥莱博科技有限公司
- 保存条件:
-20℃
特别声明:本产品及我公司所售其他产品均为科研类试剂产品,严禁用于药物、医疗及其他非科研用途。
北京百奥莱博专注于生命科学和生物技术领域,致力于为客户提供包括10×RIPA裂解液(中)(不含蛋白酶磷酸酶抑制剂)哪里买在内的一系列分子生物学试剂产品,并提供一系列相关的技术服务。
名称:10×RIPA裂解液(中)(不含蛋白酶磷酸酶抑制剂)哪里买
品牌:百奥莱博
编号:SY0320
英文名:10×RIPA Lysis Buffer (Medium),without enzyme inhibitors
本品属于裂解强度居中的RIPA裂解液,裂解得到的蛋白样品可用于常规的Western、IP等实验。本品为10倍浓缩液,使用时需稀释成1×工作液。
RIPA裂解液(RIPA Lysis Buffer),其本意是Radio Immunoprecipitation Assay,是一种传统的细胞组织快速裂解液,对动物细胞胞膜、胞浆、胞核成分均有裂解作用。根据其裂解液的强度不同,大致可以分为强、中、弱三类。
注意事项
1)本品不含蛋白酶/磷酸酶抑制剂,使用前请根据实验情况添加合适酶抑制剂。
2)裂解样品的所有步骤都需在冰上或4℃进行。
3) 用RIPA裂解液裂解得到的蛋白样品,可以用BCA蛋白浓度测定试剂盒测定其蛋白浓度(SY0298)。由于含有较高浓度的去垢剂,不能用Bradford法测定由本裂解液裂解得到样品的蛋白浓度。
4)为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。
使用说明:
(一) 细胞样品
1)融解RIPA裂解液,混匀。取适当量的裂解液,在使用前请根据实验情况添加合适酶抑制剂。
【注】:如需加入PMSF,请在使用前数分钟内加入,使其最终浓度为1mM。
2)贴壁细胞:去除培养液,用PBS、生理盐水或无血清培养液清洗细胞一遍(如果血清中的蛋白没有干扰,可以不洗)。按照6孔板每孔加入150-250μl 裂解液的比例加入裂解液。用枪吹打数下,使裂解液和细胞充分接触。通常裂解液接触细胞1-2秒后,细胞就会被裂解。
悬浮细胞:离心收集细胞,用手指把细胞用力弹散。按照6孔板每孔细胞加入150-250μl 裂解液的比例加入裂解液。再用手指轻弹以充分裂解细胞。充分裂解后应没有明显的细胞沉淀。如果细胞量较多,必需分装成5×105~1×106个细胞/管,然后再裂解。
3)充分裂解后,10000-14000g离心3-5分钟,取上清,即可进行后续的PAGE、Western和免疫沉淀等操作。
裂解液用量说明:通常6孔板每孔细胞加入150μl裂解液已经足够,但如果细胞密度非常高可以适当加大裂解液的用量到200μl或250μl。
(二)组织样品:
1)把组织剪切成细小的碎片。
2)融解RIPA裂解液,混匀。取适当量的裂解液,在使用前请根据实验情况添加合适酶抑制剂。
【注】:如需加入PMSF,请在使用前数分钟内加入,使其最终浓度为1mM。
3)按照每20mg组织加入150-250μl裂解液的比例加入裂解液。(如果裂解不充分可以适当添加更多的裂解液,如果需要高浓度的蛋白样品,可以适当减少裂解液的用量。)
4)用玻璃匀浆器匀浆,直至充分裂解。
5)充分裂解后,10000-14000g离心3-5分钟,取上清,即可进行后续的PAGE、Western和免疫沉淀等操作。
6)如果组织样品本身非常细小,可以适当剪切后直接加入裂解液裂解,通过强烈vortex使样品裂解充分。然后同样离心取上清,用于后续实验。直接裂解的优点是比较方便,不必使用匀浆器,缺点是不如使用匀浆器那样裂解得充分。
【注】:RIPA裂解液的裂解产物中经常会出现一小团透明胶状物,属正常现象。该透明胶状物为含有基因组DNA等的复合物。在不检测和基因组DNA结合特别紧密的蛋白的情况下,可以直接离心取上清用于后续实验;如果需要检测和基因组结合特别紧密的蛋白,则可以通过超声处理打碎打散该透明胶状物,随后离心取上清用于后续实验。如果检测一些常见的转录因子,例如NF-kappaB、p53等时,通常不必进行超声处理,就可以检测到这些转录因子。
储存条件:-20℃,避免反复冻融,有效期12个月。
更多有关10×RIPA裂解液(中)(不含蛋白酶磷酸酶抑制剂)哪里买的价格及使用说明等,请联*(代"系")我们的业务经理王欣女士咨询,我公司还销*(代"售")以下产品:
·Cy3标记兔抗山羊IgG(H+L)
编号:SY0711
英文名称:Cy3-AffiniPure Rabbit Anti-Goat IgG (H+L)
规格:100μl
本品是由Cy3标记的兔抗山羊IgG(H+L),使用抗原偶联的琼脂糖微珠从兔抗血清内亲和色谱纯化所得。免疫电泳和/或ELISA法检测显示本品特异性结合完整的山羊IgG分子,也会与其他山羊免疫球蛋白的轻链结合。可能会与其他物种免疫球蛋白发生交叉反应,但不会识别非免疫球蛋白类的血清蛋白。
Cy3最大激发波长(Amax)为550nm,最大发射波长(Emax)为570nm。本品适合做单标实验,广泛应用于多种免疫学实验如免疫细胞化学(ICC),流式细胞术(FC)以及免疫组化(IHC)等。要做多标(multiple-labeling)实验,建议使用与相近物种血清蛋白或者免疫球蛋白预先经过亲和吸附处理的二抗。
浓度:0.75mg/ml
缓冲液:0.005M 磷酸*,0.125M *化*, pH 7.6
稳定剂:7.5mg/ml BSA(无IgG,蛋白酶),50% 甘油
防腐剂:0.025% 叠氮化*
推荐稀释比例:1:50~400(适合多数实验)
储存条件:-20℃,避免反复冻融,有效期一年。
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·兔免疫组化(IHC)检测试剂盒
编号:SY0770
英文名称:Immunohischemistry Kit for Rabbit Primary Antibody
规格:150T
本试剂盒可用于检测以兔单克隆或多克隆抗体为一抗的免疫组化实验,检测原理基于高特异性高亲和力的链霉亲和素-生物素结合:已固定或培养细胞的抗原与一抗形成抗原抗体复合物,生物素化二抗特异性结合上述复合物,经辣根过氧化物酶标记的链霉亲和素特异性识别生物素(即抗原所在位置),最后经辣根过氧化物酶底物显色即可检测相应抗原。
本品可适用于多种类型样本,如石蜡包埋切片、冰冻切片、培养细胞涂片及血液标本等。
产品组份:
封闭液————7.5ml
生物素标记抗兔二抗————7.5ml
HRP标记链霉亲和素————7.5ml
20×DAB底物缓冲液————400µl
20×H2O2浓缩液————400µl
20×DAB浓缩液————400µl
储存条件:4℃,勿冷冻,有效期一年。
·5×非变性非还原蛋白上样缓冲液
编号:SY0351
英文名称:Immunohischemistry Kit for Rabbit Primary Antibody
规格:2ml
本品用于常规的非变性非还原性聚丙*(代"烯")酰胺(PAGE)蛋白样品的上样。5×非变性非还原蛋白上样缓冲液(Native Gel Sample Loading Buffer)是一种经过改良的以*酚蓝为染料,5倍浓缩的蛋白上样缓冲液。产品中不含SDS等变性试剂,也不含DTT、β-巯基乙醇等还原性试剂。
操作方法
1.在室温或不超过37℃的水浴中溶解5×非变性非还原蛋白上样缓冲液。水浴溶解后立即室温存放,尽量避免长时间置于水浴中。
2.按照每4 μl蛋白样品加入1 μl 5×非变性非还原蛋白上样缓冲液的比例,混合蛋白样品和5×非变性非还原蛋白上样缓冲液。
3.直接上样到PAGE胶加样孔内即可。
4.通常电泳至蓝色染料到达胶的底端处附近即可停止电泳。
储存条件:-20℃,有效期一年。
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ARB13449 鸡白介素6(IL-6)酶免分析 Chicken interleukin 6,IL-6 ELISA KIT
57-13-6 Urea 尿素
PY02-448 UBA培养基(通用啤酒琼脂) 250克
多巴胺盐*(代"酸")盐 Lysozyme(Chinken egg) 62-31-7
9014-01-1 碱性蛋白酶(1:200000)
BTN90602 DNA电泳分子量标准(3) DNAMETER(3)
高铁血红蛋白还原检测试剂盒(微板法) 100T
ARB10353 人心肌肌*蛋白I(cTn-Ⅰ)定量分析 Human cardiac troponin i,ctn-iELISA KIT
ARB12749 小鼠CD30分子(CD30)检测服务 Mouse cluster of differentiation 30,cd30 ELISA KIT
ARB10245 人乙型肝炎病毒前S2抗体(HBV preS2Ab)含量检测 Human hepatitis b virus,hbv pres2ab ELISA KIT
BTN130697 G(5′)ppp(5′)G帽结构类似物 RNA Cap Structure Analogs
薄荷脑 CM Sepharose CL-6B 2216-51-5
1-*基-3-甲基-4-*甲酰基吡唑啉酮 Ferrous ammonium sulfate hexahydrate 4551-69-3
北京百莱博科技有限公司专业生产供应销*(代"售")生物试剂、化学试剂、抗原抗体、血清血浆、Elisa试剂盒,更多试剂产品需求,欢迎来电咨询选购10×RIPA裂解液(中)(不含蛋白酶磷酸酶抑制剂)哪里买。
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文献和实验相关专题 蛋白酶抑制剂 破碎细胞提取蛋白质的同时可释放出蛋白酶,这些蛋白酶需要迅速的被抑制以保持蛋白质不被降解。在蛋白质提取过程中,需要加入蛋白酶抑制剂以防止蛋白水解。以下列举了5种常用的蛋白酶抑制剂和他们各自的作用特点,因为各种蛋白酶对不同蛋白质的敏感性各不相同,因此需要调整各种蛋白酶的浓度。由于蛋白酶抑制剂在液体中的溶解度极低,尤其应注意在缓冲液中加人蛋白酶抑制剂时应充分混匀以减少蛋白酶抑制剂的沉淀。在宝灵曼公司
大鼠 基质金属蛋白酶抑制剂( TIMP ) 酶联免疫分析 试剂盒使用说明书 本试剂仅供研究使用 目的:本试剂盒用于测定大鼠血清,细胞上清及相关液体样本中基质金属蛋白酶抑制剂(TIMP )的含量。 实验原理: 本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中大鼠基质金属蛋白酶抑制剂( TIMP )水平。用纯化的大鼠基质金属蛋白酶抑制剂( TIMP )抗体包被微孔板,制成固相抗体,往包被单抗的微孔中依次加入基质金属蛋白酶抑制剂
-PAGE 电泳分析检测结果。这种方法得到的目的蛋白 N是在细胞内与蛋白 M 天然结合的,符合体内实际情况,得到的结果可信度高。这种方法常用于测定两种目标蛋白是否在体内结合;也可用于确定一种特定蛋白质的新的作用搭档。 步骤 用预冷的 PBS 溶液洗涤贴壁细胞两次(对于悬浮细胞则用台式离心机以 800-1000 rpm 转速通过离心洗涤)。 加入预冷的 RIPA 液(含蛋白酶抑制剂和磷酸酶抑制剂),RIPA 液的用量:按照 0.5 mL 每 5×106 细胞计算。 注:悬浮细胞,收集
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