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- 技术资料
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974
- 保质期:
长期
- 供应商:
北京百奥莱博科技有限公司
- 保存条件:
冷藏
特别声明:本产品及我公司所售其他产品均为科研类试剂产品,严禁用于药物、医疗及其他非科研用途。
诺如病毒G2型荧光PCR检测试剂盒供应是高品质的病毒PCR检测试剂盒产品,由北京百奥莱博供应,用于科研实验,本产品质量好,且极具价格优势,深为用户称道,了解更多诺如病毒G2型荧光PCR检测试剂盒等病毒PCR检测试剂盒产品请联*(代"系")我司咨询订购。
名称:诺如病毒G2型荧光PCR检测试剂盒供应
规格:48次/盒
编号:SYA202
等级:科研试剂
品牌:百奥莱博
我公司的诺如病毒G2型荧光PCR检测试剂盒供应,性价比高,货期短,送货上门,欢迎您来电咨询购买,另外,我公司还生产供应销*(代"售")下列产品:
·立克次体通用单重荧光PCR检测试剂盒
编号:SYA127
等级:科研实验专用
规格:48次/盒
一、简介:
本试剂盒用一对立克次体通用特异性引物,结合一条特异性探针,用荧光PCR技术对立克次体通用的核酸进行体外扩增检测,用于临床上对可疑感染者的病原学诊断。
二、用途:
该试剂盒适合于检测全血等样本中的立克次体通用,用于立克次体通用感染的辅助诊断,其检测结果仅供参考。
三、试剂盒组成:(48T)
组份 数量 规格
立克次体反应液(qPCR MIX) 1管 720μL/管
DNA抽提液(DNA Extraction) 2管 1.5mL/管
阴性对照(NTC) 1管 50μL/管
立克次体阳性对照(PTC) 1管 50μL/管
四、储存条件及有效期:
本试剂盒于-20℃以下保存,有效期为6个月。
五、荧光PCR仪器适用范围:
ABI系列、MJ系列、Roche系列,博日系列及其他荧光定量PCR检测仪。
六、样品采集、前处理与DNA提取
6.1 样品的采集
用注射器取血5mL至EDTA-2Na抗凝管。
6.2 样本前处理
取抗凝血下层血细胞50μL,加入100μL双蒸水吹匀。
6.3 DNA提取
可采用PCR试剂盒配备的DNA抽提液,按以下说明进行DNA核酸的粗提。也可采购北京百奥莱博科技有限公司生产的DNA提取试剂盒(过柱法-荧光配套)或其他合适的商业化产品,并按照相应试剂盒说明进行操作。
对上述处理好的样本加入等体积核酸提取液(固体标本加入50μL核酸提取液),100℃恒温处理10min,13000rpm离心5min,取上清液转移至新的1.5mL EP管,-20℃保存;
注:阳性对照和阴性对照为已经抽提好的核酸(无需提取),直接取5µL加入到反应体系中即可。由于阳性对照浓度较高,建议最后在样品制备区域加入阳性对照。
七、检测步骤
7.1 试剂的准备
从试剂盒中取出荧光PCR反应液(qPCR MIX),冰上融化并振荡混匀后,10000rpm离心10s。
设所需要的PCR反应管管数为N(N=样本数+1管阴性对照+1管阳性对照),每个测试反应体系配制如下表:
试剂 每个反应加入的量 N个反应加入的量
荧光PCR反应液 15µL N×15µL
计算好各试剂的使用量,加入一适当体积洁净离心管中,充分混匀,10000rpm离心10s,向设定的N个PCR反应管中分别加入15μL荧光PCR反应液,向每管中加入处理后样品/阴性对照(NTC)/阳性对照(PTC)5μL,10000rpm瞬时离心10秒。
7.2 qPCR反应条件
将各反应管放入实时荧光PCR仪器的反应槽内。
推荐循环条件:
1循环 50℃ for 2 min
预变性 1循环 95℃ for 10 min
PCR扩增 40循环 95℃ for 15 sec
60℃ for 60 sec
在60℃延伸时收集荧光信号。报告基团:设置为FAM。淬灭基团:NONE,请勿选择ROX 参比荧光。
八、结果分析
8.1 结果分析条件设定
直接读取检测结果。基线和阈值设定原则根据仪器噪声情况进行调整,以阈值线刚好超过正常阴性样品扩增曲线的最高点为准。
8.2 试验成立判定
(1) 阴性对照:不应产生任何的扩增曲线。
(2) 阳性对照:均产生扩增曲线。
(3) 以上条件应同时满足 ,否则,此次试验视为无效。
8.3 结果判定
(1) 在试验成立的条件下,Ct值≤35的样本为阳性,表明立克次体核酸阳性。
(2) Ct值显示为无的样本为阴性样本,表明立克次体核酸阴性。
(3) 如果Ct值>35,判为可疑样品。对于可疑样品,先看扩增曲线。如果扩增曲线为对数扩增曲线,则为可疑阳性,否则判为阴性。
(4) 对于可疑阳性样品,重新抽提核酸,再次进行立克次体 qPCR检测。如果重复扩增曲线为对数扩增曲线,判为样本阳性,表明立克次体核酸阳性;否则判为样本阴性。
九、注意事项:
(1) 初次使用前请仔细阅读说明书。并严格按照说明书步骤操作。
(2) 所有使用的离心管最好高压灭菌,而且必须不含DNA酶。
(3) PCR操作应严格按照要求分区(试剂配制区、标本处理区、PCR扩增区等),防止实验室污染。
(4) 样本提取、试剂配置、加样需在不同区的超净工作台进行,以免污染。
(5) 试剂盒里所有物品应视为污染物对待,并按照卫生部《微生物生物医学实验室生物安全通则》进行处理。
诺如病毒G2型荧光PCR检测试剂盒供应关键词:诺如病毒G2型荧光PCR检测试剂盒,百奥莱博,SYA202
·冠状病毒(SARS)单重荧光PCR检测试剂盒
编号:SYA179
等级:科研实验专用
规格:48次/盒
·弯曲菌单重荧光PCR检测试剂盒
编号:SYA066
等级:科研实验专用
规格:48次/盒
·犬种布鲁氏菌单重荧光PCR检测试剂盒
编号:SYA119
等级:科研实验专用
规格:48次/盒
·季节性H1流感病毒单重荧光PCR检测试剂盒
编号:SYA148
等级:科研实验专用
规格:48次/盒
·肠道病毒通用(EV-U)单重荧光PCR检测试剂盒
编号:SYA210
等级:科研实验专用
规格:48次/盒
·肠出血性大肠杆菌(O157:H7)单重荧光PCR检测试剂盒
编号:SYA081
等级:科研实验专用
规格:48次/盒
本试剂盒适用于增菌培养物、疑似病料及食品中大肠杆菌O157(H7)的检测,其检测结果仅供参考。
出血性大肠杆菌EHEC O157(H7)可引起人的出血性腹泻和肠炎的大肠埃希氏菌,引发人类、家畜以及野生禽兽不同形式的疾病。本方法为荧光PCR检测方法,反应在同一管内连续进行,操作简单,并有效防止了污染,能对样品中或预培养液中的大肠杆菌 O157(H7)进行快速检测,具有特异性高、敏感性强和操作简便的特点。O157(H7)的探针报告基团为FAM,淬灭基团为None。
试剂盒组成:
| 组份 | 数量 | 规格 |
| 大肠杆菌 O157(H7)荧光qPCR反应液( O157(H7)-qPCR MIX) | 1管 | 720μL/管 |
| DNA抽提液(DNA Extraction) | 2管 | 1.5mL/管 |
| 阴性对照(NTC) | 1管 | 50μL/管 |
| 阳性对照(O157(H7-PTC) | 1管 | 50μL/管 |
储存条件:-20℃以下,有效期6个月。
使用方法:
一、样品采集:
➤食品样品:样品的采集与预培养按照《食品卫生微生物学检验大肠埃希氏菌 O157:H7/NM检验 (GB/T 4789.36-2008) 要求进行。
➤粪便样品:取粪便置于灭菌的收集管中送检。
➤病灶部位样品:取发病部位新鲜渗出物、粘液脓血送检。
注:上述样品建议经过增菌后,收集培养物用于检测。
二、DNA提取:
可采用PCR试剂盒配备的DNA抽提液,按以下说明进行DNA核酸的粗提。也可采购北京百奥莱博科技有限公司生产的DNA提取试剂盒(过柱法-荧光配套)或其他合适的商业化产品,并按照相应试剂盒说明进行操作。
➤液体培养物:取液体培养物100μL加到1.5mL无菌离心管中,8000rpm离心3min,尽量吸弃上清,加入50μL DNA抽提液充分混匀,100℃恒温10min,13000rpm离心3min,取上清5μL进行PCR反应。
➤固体培养物:挑取单克隆菌落与50μL DNA抽提液充分混匀,100℃恒温10min,13000rpm离心3min,取上清5μL进行PCR反应。
➤粪便样品:挑取米粒大小粪便于灭菌离心管中,加入0.5mL生理盐水,振荡混匀,13000rpm离心3分钟,弃上清,沉淀中加入50μL DNA抽提液充分混匀,100℃恒温10min,13000rpm离心3min取上清5μL进行PCR反应。
➤其他液体标本:取标本2-3mL,13000rpm离心3min,弃上清,沉淀中加入50μL DNA抽提液充分混匀,100℃恒温10min,13000rpm离心3min取上清5μL进行PCR反应。
注:建议采用相关标准方法进行前增菌,并按照液体培养物方法进行提取。阳性对照和阴性对照为已经抽提好的核酸(无需提取),直接取5µL加入到反应体系中即可。由于阳性对照浓度较高,建议最后在样品制备区域加入阳性对照。
三、检测步骤:
1.试剂的准备
从试剂盒中取出荧光qPCR反应液( O157(H7)-qPCR MIX),冰上融化并振荡混匀后,10000rpm离心10s。
设所需要的PCR反应管管数为N(N=样本数+1管阴性对照+1管阳性对照),每个测试反应体系配制如下表:
| 试剂 | 每个反应加入的量 | N个反应加入的量 |
| 荧光PCR反应液 | 15µL | N×15µL |
向设定的N个PCR反应管中分别加入15μL荧光PCR反应液,向每管中加入处理后样品/阴性对照(NTC)/阳性对照( O157(H7)-PTC)5μL,10000rpm瞬时离心10秒。
2.qPCR反应条件
将各反应管放入实时荧光PCR仪器的反应槽内。推荐循环条件:
| 1循环 | 50℃ for 2 min | |
| 预变性 | 1循环 | 95℃ for 10 min |
| PCR扩增 | 40循环 | 95℃ for 15 sec 60℃ for 60 sec |
在60℃ 延伸时收集荧光信号。报告基团:设置为FAM,淬灭基团:NONE,请勿选择ROX 参比荧光。
四、结果分析:
1.结果分析条件设定
直接读取检测结果。基线和阈值设定原则根据仪器噪声情况进行调整,以阈值线刚好超过正常阴性样品扩增曲线的最高点为准。
2.试验成立判定
➤阴性对照(NTC):不应产生任何的扩增曲线。
➤阳性对照(O157(H7)-PTC):均产生扩增曲线。
➤以上条件应同时满足,否则,此次试验视为无效。
3.结果判定
➤在试验成立的条件下,Ct值≤35的样本为阳性,表明 O157(H7)核酸阳性。
➤Ct值显示为无的样本为阴性样本,表明 O157(H7)核酸阴性。
➤如果35<Ct值≤40,判为可疑样品。对于可疑样品,先看扩增曲线。如果扩增曲线为对数扩增曲线,则为可疑阳性,否则判为阴性。
➤对于可疑阳性样品,重新抽提核酸,再次进行 O157(H7) qPCR检测。如果重复扩增曲线为对数扩增曲线,判为样本阳性,表明 O157(H7)核酸阳性;否则判为样本阴性。
五、注意事项:
➤初次使用前请仔细阅读说明书。并严格按照说明书步骤操作。
➤所有使用的离心管最好高压灭菌,而且必须不含DNA酶。
➤PCR操作应严格按照要求分区(试剂配制区、标本处理区、PCR扩增区等),防止实验室污染。
➤样本提取、试剂配置、加样需在不同区的超净工作台进行,以免污染。
➤试剂盒里所有物品应视为污染物对待,并按照卫生部《微生物生物医学实验室生物安全通则》进行处理。
诺如病毒G2型荧光PCR检测试剂盒供应关键词:诺如病毒G2型荧光PCR检测试剂盒,百奥莱博,SYA202
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