对虾白斑病毒荧光PCR检测试剂盒(WSSV)供应

特别声明：本产品及我公司所售其他产品均为科研类试剂产品，严禁用于药物、医疗及其他非科研用途。

北京百奥莱博生产销*(代"售")的对虾白斑病毒荧光PCR检测试剂盒(WSSV)供应，是高品质的动物疫病PCR检测试剂盒产品，欢迎的您垂询订购。

名称：对虾白斑病毒荧光PCR检测试剂盒(WSSV)供应
规格：48次/盒
产地：国产|进口
品牌：百奥莱博
编号：SYA513
等级：科研试剂
本试剂盒适合于检测对虾样品按不同的大小或感染期取不同组织样品等样本中的对虾白斑病毒(WSSV)，用于对虾白斑病毒(WSSV)感染的辅助诊断，其检测结果仅供参考。

本试剂盒用一对对虾白斑病毒特异性引物，结合一条特异性探针，用荧光PCR技术对对虾白斑病毒DNA进行体外扩增检测，用于临床上对可疑感染动物的病原学诊断。

试剂盒组成：

 

组份	数量	规格
WSSV反应液(WSSV-qPCR MIX)	1管	672μL/管
DNA抽提液(DNA Extraction)	2管	1.5mL/管
酶混合物(Enzymes MIX)	1管	48μL/管
阴性对照(NTC)	1管	50μL/管
WSSV阳性对照(WSSV-PTC)	1管	50μL/管

储存条件：-20℃，有效期6个月。

使用方法：

一、样品采集及前处理：
对虾样品按不同的大小或感染期取不同组织样品0.1g左右，其中，对虾幼体、仔虾取完整个体，3cm以下的幼虾取摘除虾眼的头胸部，较大的幼虾可取腮区或数根腮丝，成虾取1-2根腮丝或自心脏或腹部血窦抽取血淋巴，怀疑为慢性感染的较大幼虾或成虾取淋巴器官。如果2h以后才能处理，宜将样本保存于无水乙醇中。非对虾的甲壳类动物参照对虾的方法取样。非生物样品，取0.1-0.5g。

手术剪剪碎混匀后取0.05g于研磨器中研磨，加入1.5mL生理盐水后继续研磨，待匀浆后转至1.5mL灭菌离心管中，8000rpm离心2min，取上清液100μL于1.5mL灭菌离心管中。

二、DNA提取：
可采用PCR试剂盒配备的DNA抽提液，按以下说明进行DNA核酸的粗提。也可采购北京百奥莱博科技有限公司生产的DNA提取试剂盒(过柱法-荧光配套)，并按照相应试剂盒说明进行操作。
对上述处理好的样本加入等体积核酸提取液(固体标本加入50μL核酸提取液)，100℃恒温处理10min，13000rpm离心5min，取上清液转移至新的1.5mL EP管，-20℃保存；
 注：阳性对照和阴性对照为已经抽提好的核酸(无需提取)，直接取5µL加入到反应体系中即可。由于阳性对照浓度较高，建议最后在样品制备区域加入阳性对照。

三、检测步骤：
1．试剂的准备
从试剂盒中取出荧光PCR反应液(WSSV-qPCR MIX)、酶混合物(Enzymes MIX)，冰上融化并振荡混匀后，10000rpm离心10s。
设所需要的PCR反应管管数为N(N=样本数+1管阴性对照+1管阳性对照)，每个测试反应体系配制如下表：

试剂	每个反应加入的量	N个反应加入的量
荧光PCR反应液	14µL	N×14µL
酶混合液	1µL	N×1µL
总量	15µL	N×15µL

计算好各试剂的使用量，加入一适当体积洁净离心管中，充分混匀，10000rpm离心10s，向设定的N个PCR反应管中分别加入15μL荧光PCR反应液，向每管中加入处理后样品或阴性对照(NTC)和阳性对照(WSSV-PTC)5μL，10000rpm瞬时离心10秒。
2．qPCR反应条件
将各反应管放入实时荧光PCR仪器的反应槽内。推荐循环条件：

	1循环	50℃ for 2 min
预变性	1循环	95℃ for 10 min
PCR扩增	40循环	95℃ for 15 sec 60℃ for 60 sec

在60℃延伸时收集荧光信号。报告基团：设置为FAM。淬灭基团：NONE，请勿选择ROX参比荧光。

四、结果分析：
1．结果分析条件设定
直接读取检测结果。基线和阈值设定原则根据仪器噪声情况进行调整，以阈值线刚好超过正常阴性样品扩增曲线的最高点为准。
2．试验成立判定
➤阴性对照(NTC)：不应产生任何的扩增曲线。
➤阳性对照(WSSV-PTC)：均产生扩增曲线。
➤以上条件应同时满足，否则，此次试验视为无效。
3．结果判定
➤在试验成立的条件下，Ct值≤35，且曲线有明显的指数增长曲线，表明WSSV核酸阳性。
➤Ct值显示为无的样本为阴性样本，表明WSSV核酸阴性。
➤如果Ct值＞35，判为可疑样品。对于可疑样品，先看扩增曲线。如果扩增曲线为对数扩增曲线，则为可疑阳性，否则判为阴性。
➤对于可疑阳性样品，重新抽提核酸，再次进行WSSV 检测。如果重复扩增曲线为对数扩增曲线，判为样本阳性，表明WSSV核酸阳性；否则判为样本阴性。

五、注意事项：
➤初次使用前请仔细阅读说明书。并严格按照说明书步骤操作。
➤所有使用的离心管最好高压灭菌，而且必须不含DNA酶。
➤PCR操作应严格按照要求分区(试剂配制区、标本处理区、PCR扩增区等)，防止实验室污染。
➤样本提取、试剂配置、加样需在不同区的超净工作台进行，以免污染。
➤试剂盒里所有物品应视为污染物对待，并按照卫生部《微生物生物医学实验室生物安全通则》进行处理。

我公司的对虾白斑病毒荧光PCR检测试剂盒(WSSV)供应，性价比高，货期短，送货上门，欢迎您来电咨询购买，另外，我公司还生产供应销*(代"售")下列产品：
BTN130976 Oligo(dT)再生溶液 Oligo(dT)Recharger
DP501 miRcute miRNA 提取分离试剂盒
N,N-二乙基羟胺 D-Valine 3710-84-7
5-尿苷三磷酸二*盐 D-Glucose monohydrate 285978-18-9
ARB13717 兔前列腺素E2(PGE2)血清中含量检测 Rabbit prostaglandin e2,pge2 ELISA KIT
ARB11999 大鼠P选择素(Ps)ELISA代测服务 Rat P-Selectin,ps ELISA KIT
ARB10490 人白介素3(IL-3)含量分析 Human interleukin 3,IL-3 ELISA KIT
新霉素硫*(代"酸")盐 Azoviolet 1405-10-3
脂肪组织固定液   500ml
SJ0540 葡聚糖凝胶C-25
全反式维A酸 Diphenylcartazide 302-79-4
3-(环己*基)2-羟基-1-丙磺酸 p-Benzoquinone 73463-39-5
ARB13313 山羊丙*(代"酮")(Acetone)elisa测定使用说明书 Goat acetone ELISA KIT
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SJ0675 Marker Ⅰ
ARB13627 兔子神经胶质纤维酸性蛋白(GFAP)ELISA代测服务 Rabbit glial fibrillary acidic protein,gfap ELISA KIT
ARB10309 人巨噬细胞移动抑制因子(MIF)定量分析 Human macrophage migRation inhibitory factor,mif ELISA KIT
核固红 Molecular sieves type 4A 6409-77-4
HEPES-BSA溶液(HA溶液)   100ml
F030306 胶体金标记兔抗牛酪蛋白抗体 Rabbit Anti-casein*GOLD
BTN130506 海藻糖溶液,1.5M,PCR级 Trehalose Solution,PCR Grade
葡聚糖凝胶G-25 Sulfamerazine 9041-35-4
ARB13124 小鼠促卵泡素(FSH)含量检测 Mouse follicle-stimulating hormone,fsh ELISA KIT
PY01-014-2  酵母膏(酵母浸膏)  发酵级  1公斤  
脱氧核糖核酸酶Ⅱ(猪脾) Span 20 9025-64-3
碱式碳酸* Hydroxybenzotriazole monohydrate 56378-72-4或39409-82-0
F020233 山羊抗人IgG Fab抗体 Goat Anti-Human IgG Fab
原生质体缓冲液   100ml
BL0010 水解乳蛋白 BactoTM TC Lactalbumin Hydrolysate
ZCXQ02 兔血清 500ml
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·牛支原体抗体ELISA检测试剂盒
编号：SYA665
等级：科研实验专用
规格：96次/盒

·牛口蹄疫A型抗体ELISA检测试剂盒
编号：SYA658
等级：科研实验专用
规格：192次/盒|480次/盒

·肠集聚性大肠杆菌(EAEC)单重荧光PCR检测试剂盒
编号：SYA094
等级：科研实验专用
规格：48次/盒

·人类小DNA病毒(B19)单重荧光PCR检测试剂盒
编号：SYA246
等级：科研实验专用
规格：48次/盒

·脊髓灰质炎病毒1型单重荧光PCR检测试剂盒
编号：SYA205
等级：科研实验专用
规格：48次/盒

·鸡肠炎沙门氏菌(SPP.E)单重荧光PCR检测试剂盒
编号：SYA388
等级：科研实验专用
规格：48次/盒

·金黄色葡萄球菌单重凝胶PCR检测试剂盒
编号：SYA258
等级：科研实验专用
规格：48次/盒

·副溶血性弧菌不耐热溶血毒素(TLH)单重荧光PCR检测试剂盒
编号：SYA070
等级：科研实验专用
规格：48次/盒
一、简介：
本试剂盒用一对副溶血性弧菌不耐热溶血毒素特异性引物，结合一条特异性探针，用荧光PCR技术对副溶血性弧菌不耐热溶血毒素的核酸进行体外扩增检测，用于临床上对可疑感染者的病原学诊断。

二、用途：
该试剂盒适用于检测水样粪便、疑似污染的水、食物等样本中的副溶血性弧菌不耐热溶血毒素(TLH)，用于副溶血性弧菌不耐热溶血毒素(TLH)感染的辅助诊断，其检测结果仅供临床参考。

三、试剂盒组成：(48T)

组份	数量	规格
TLH反应液(TLH-qPCR MIX)	1管	672μL/管
DNA抽提液(DNA Extraction)	2管	1.5mL/管
酶混合物(Enzymes MIX)	1管	48μL/管
阴性对照(NTC)	1管	50μL/管
TLH阳性对照(TLH -PTC)	1管	50μL/管

四、荧光PCR 仪器适用范围
ABI系列、MJ系列、Roche系列，博日系列及其他荧光定量PCR 检测仪。

五、储存条件及有效期：
本试剂盒于-20℃以下保存，有效期为6个月。

六、样品采集、前处理与DNA 提取
6.1 样品采集
水样便取0.5-1 mL；疑似污染的食物取1g。
6.2 样本前处理：
水样便13000rpm离心2min，去尽上清；疑似污染的食物用手术剪剪碎混匀后取0.05g于研磨器中研磨，加入1.5mL生理盐水后继续研磨，待匀浆后转至1.5mL灭菌离心管中，8000rpm离心2min，取上清液100μL于1.5mL灭菌离心管中；疑似污染的水直接取100μL。
6.3 DNA提取
可采用PCR试剂盒配备的DNA抽提液，按以下说明进行DNA核酸的粗提。也可采购北京百奥莱博科技有限公司生产的(DNA提取试剂盒(过柱法-荧光配套)，并按照相应试剂盒说明进行操作。
对上述处理好的样本加入50uL核酸提取液，100℃恒温处理10min，13000rpm离心5min，取上清液转移至新的1.5mL EP管，-20℃保存；
 注：阳性对照和阴性对照为已经抽提好的核酸(无需提取)，直接取5μL加入到反应体系中即可。
由于阳性对照浓度较高，建议最后在样品制备区域加入阳性对照。

七、检测步骤：
7.1 试剂的准备
从试剂盒中取出荧光PCR 反应液(TLH-qPCR MIX)、酶混合液(Enzymes MIX)，冰上融化并振荡混匀后，10000rpm 离心10s。
设所需要的PCR 反应管管数为N(N=样本数+1 管阴性对照+1 管阳性对照)，每个测试反应体系配制如下表：

试剂	每个反应加入的量	N个反应加入的量
荧光PCR反应液	14µL	N×14µL
酶混合液	1µL	N×1µL
总量	15µL	N×15µL

计算好各试剂的使用量，加入一适当体积洁净离心管中，充分混匀，10000rpm 离心10s，向设定的N 个PCR 反应管中分别加入15μL 荧光PCR 反应液，向每管中加入处理后样品/阴性对照(NTC)/阳性对照(TLH-PTC)5μL，10000rpm 瞬时离心10 秒。
7.2 qPCR反应条件
将各反应管放入实时荧光PCR仪器的反应槽内。推荐循环条件：

	1循环	50℃ for 2 min
预变性	1循环	95℃ for 10 min
PCR扩增	40循环	95℃ for 15 sec 60℃ for 60 sec

在60℃延伸时收集荧光信号。报告基团：设置为FAM。淬灭基团：NONE，请勿选择ROX参比荧光。

八、结果分析：
8.1 结果分析条件设定
直接读取检测结果。基线和阈值设定原则根据仪器噪声情况进行调整，以阈值线刚好超过正常阴性样品扩增曲线的最高点为准。
8.2 试验成立判定
(1)阴性对照(NTC)：不应产生任何的扩增曲线。
(2)阳性对照(TLH-PTC)：均产生扩增曲线。
(3)以上条件应同时满足，否则，此次试验视为无效。
8.3 结果判定
(1)在试验成立的条件下，Ct值≤35的样本为阳性，表明副溶血性弧菌不耐热溶血毒素核酸阳性。
(2)Ct值显示为无的样本为阴性样本，表明副溶血性弧菌不耐热溶血毒素核酸阴性。
(3)如果Ct值>35，判为可疑样品。对于可疑样品，先看扩增曲线。如果扩增曲线为对数扩增曲线，则为可疑阳性，否则判为阴性。
(4)对于可疑阳性样品，重新抽提核酸，再次进行副溶血性弧菌不耐热溶血毒素qPCR检测。如果重复扩增曲线为对数扩增曲线，判为样本阳性，表明副溶血性弧菌不耐热溶血毒素核酸阳性；否则判为样本阴性。

九、注意事项：
(1)初次使用前请仔细阅读说明书。并严格按照说明书步骤操作。
(2)所有使用的离心管应高压灭菌，而且必须不含DNA 酶。
(3)PCR 操作应严格按照要求分区(试剂配制区、标本处理区、PCR 扩增区等)，防止实验室污染。
(4)样本提取、试剂配置、加样需在不同区的超净工作台进行，以免污染。
(5)试剂盒里所有物品应视为污染物对待，并按照卫生部《微生物生物医学实验室生物安全通则》进行处理。

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