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463
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长期
- 供应商:
北京百奥莱博科技有限公司
- 保存条件:
阴凉干燥
特别声明:本产品及我公司所售其他产品均为科研类试剂产品,严禁用于药物、医疗及其他非科研用途。
北京百奥莱博致力于最快速、最有效的检测产品,包括北京肺炎支原体荧光PCR检测试剂盒优惠促销在内的细菌PCR检测试剂盒产品是我公司倾力打造的优势产品,欢迎选购。
名称:北京肺炎支原体荧光PCR检测试剂盒优惠促销
等级:科研试剂
编号:SYA035
品牌:百奥莱博
规格:48次/盒
产地:国产|进口
北京肺炎支原体荧光PCR检测试剂盒优惠促销正在火爆热销,除此之外,为您推荐下别热销产品:
·转基因植物35S启动子单重凝胶PCR检测试剂盒
编号:SYA276
等级:科研实验专用
规格:48次/盒
·汉坦病毒单重荧光PCR检测试剂盒
编号:SYA244
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规格:48次/盒
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规格:48次/盒
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编号:SYA083
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规格:48次/盒
·流感H7亚型病毒(AIV-H7)单重凝胶PCR检测试剂盒
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规格:48次/盒
·猪瘟兔化弱毒疫苗(HCLV)单重荧光PCR检测试剂盒
编号:SYA471
等级:科研实验专用
规格:48次/盒
·人副流感病毒1型/3型双重荧光PCR检测试剂盒
编号:SYA187
等级:科研实验专用
规格:48次/盒
一、简介:
本试剂盒用一对人副流感病毒1 型特异性引物,一对人副流感病毒3 型特异性引物,分别结合一条特异性荧光探针,用一步法双重荧光RT-PCR 技术对人副流感病毒1 型/3 型RNA 进行体外扩增检测,用于临床上对可疑感染者的病原学诊断。本试剂盒中人副流感病毒1 型的探针报告基团为FAM,人副流感病毒3 型的探针报告基团为VIC/HEX/JOE。
二、用途:
本试剂盒适用于各种咽拭子、鼻拭子样品等临床样品中人副流感病毒1型/3型的特异性检测。适用于人副流感病毒1型/3型感染的辅助诊断、监测及流行病学调查,其检测结果仅供临床参考。
三、试剂盒组成:(48T)
组份 数量 规格
人副流感1型/3型反应液(PIV1/PIV3-qRT-PCR MIX) 1管 576μL/管
qRT 酶混合物(qRT Enzymes MIX) 1管 192μL/管
无核酸酶水(Nuclease-Free Water) 1管 500μL/管
阴性对照(NTC) 1管 50μL/管
人副流感1型/3型阳性对照(PIV1/PIV3-PTC) 1管 50μL/管
四、储存条件及有效期:
本试剂盒于-20℃以下保存,有效期为6个月。
五、荧光PCR仪器适用范围:
ABI系列,Roche系列等荧光定量PCR检测仪等。
六、样品的采集与RNA提取
6.1 样品的采集
按照相关标准采集。标本短期内可保存于-20℃,长期保存可置-80℃,但不能超过6个月,标本运送应采用0℃冰壶。
6.1.1 血清:用一次性无菌注射器抽取静脉血2mL,注入无菌的干燥玻璃管,室温(22-25℃)放置30-60min,血标本可自发完成凝集析出血清,或直接使用水平离心机,3000rpm离心5min,吸取上层血清,转移至1.5mL灭菌离心管。
6.1.2 血浆:用一次性无菌注射器抽取静脉血2mL,注入含EDTA2Na(乙二*(代"胺")四乙酸二*)或柠檬酸*抗凝剂的玻璃管,立即轻轻颠倒玻璃管混合5-10次,使抗凝剂与静脉血充分混匀,5-10min后即可分离出血浆,转移至1.5mL灭菌离心管。
6.1.3 拭子、分泌物等样品:在装有拭子或分泌物的离心管中加入500μL PBS或生理盐水,剧烈振荡30s。棉拭子尽量挤出液体转移到无RNA酶污染的离心管中,6000rpm离心20s,取上清备用。
6.1.4 病灶组织样品:称取组织约0.1g于研磨器或组织匀浆器中研磨(最好置于冰上或加入液氮),再加1mL生理盐水研磨至无块状物,然后将样品转至1.5mL灭菌离心管中,8000rpm离心2min,取上清液于1.5mL灭菌离心管中。
6.2 RNA提取
可采购北京百奥莱博科技有限公司生产的RNA提取试剂盒(过柱法-荧光配套)或其他合适的商业化产品,并按照相应试剂盒说明进行操作。
注:阳性对照和阴性对照为已经抽提好的核酸(无需提取),直接取4μL 加入到反应体系中即可。由于阳性对照浓度较高,建议最后在样品制备区域加入阳性对照。
七、检测步骤:
7.1 试剂的准备
从试剂盒中取出荧光qRT-PCR 反应液(PIV1/PIV3-qRT-PCR MIX)、酶混合物(Enzymes MIX),冰上融化并振荡混匀后,10000rpm 离心10s。
设所需要的PCR 反应管管数为N(N=样本数+1 管阴性对照+1 管阳性对照),每个测试反应体系配制如下表:
试剂 每个反应加入的量 N个反应加入的量
荧光PCR反应液 12µL N×12µL
酶混合物 4µL N×4µL
总量 16µL N×16µL
计算好各试剂的使用量,加入一适当体积洁净离心管中,充分混匀,10000rpm 离心10s,向设定的N 个PCR 反应管中分别加入16μL,向每管中加入处理后样品/阴性对照(NTC)/阳性对照(PIV1/PIV3-PTC)4μL,10000rpm 瞬时离心10秒。
7.2 qRT-PCR反应条件
将各反应管放入实时荧光PCR仪器的反应槽内。
推荐循环条件:
反转录(Reverse Transcription) 1循环 50℃ for 30 min
预变性 1循环 95℃ for 5 min
PCR扩增 40循环 95℃ for 10 sec
55℃ for 45 sec
在60℃延伸时收集荧光信号。报告基团:设置为FAM和VIC(若仪器无VIC通道,可选择HEX或JOE通道)。其中FAM基团检测PIV1,VIC/HEX/JOE基团检测PIV3。淬灭基团:NONE,请勿选择ROX 参比荧光。
八、结果分析:
8.1 结果分析条件设定
直接读取检测结果。基线和阈值设定原则根据仪器噪声情况进行调整,以阈值线刚好超过正常阴性样品扩增曲线的最高点为准。
8.2 试验成立判定
(1) 阴性对照(NTC):FAM和VIC/HEX/JOE通道均无扩增。
(2) 阳性对照(PIV1/PIV3-PTC):FAM和VIC/HEX/JOE通道均有扩增。
以上条件应同时满足,否则,此次试验视为无效
8.3 结果判定
(1) FAM通道:Ct值≤35 PIV1核酸为阳性;Ct值显示为无的样本为阴性样本,表明PIV1核酸阴性。Ct值在35-40个循环之间,为灰区,需要进行重复试验。如果重复扩增曲线为对数扩增曲线,判为样本阳性,表明PIV1核酸阳性;否则判为样本阴性。
(2) VIC/HEX/JOE通道:Ct值≤35 PIV3核酸为阳性;Ct值显示为无的样本为阴性样本,表明PIV3核酸阴性。Ct值在35-40个循环之间,为灰区,需要进行重复试验。如果重复扩增曲线为对数扩增曲线,判为样本阳性,表明PIV3核酸阳性;否则判为样本阴性。
九、注意事项:
(1) 初次使用前请仔细阅读说明书。并严格按照说明书步骤操作。
(2) 所有使用的离心管最好高压灭菌,而且必须不含RNA 酶。
(3) PCR 操作应严格按照要求分区(试剂配制区、标本处理区、PCR 扩增区等),防止实验室污染。
(4) 样本提取、试剂配置、加样需在不同区的超净工作台进行,以免污染。
(5) 试剂盒里所有物品应视为污染物对待,并按照卫生部《微生物生物医学实验室生物安全通则》进行处理。
北京肺炎支原体荧光PCR检测试剂盒优惠促销关键词:百奥莱博,肺炎支原体荧光PCR检测试剂盒,SYA035
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北京肺炎支原体荧光PCR检测试剂盒优惠促销关键词:百奥莱博,肺炎支原体荧光PCR检测试剂盒,SYA035
·猪蓝耳病病毒(PRRSV)单重荧光PCR检测试剂盒
编号:SYA405
等级:科研实验专用
规格:48次/盒|96次/盒
一、简介:
本试剂盒用一对猪蓝耳病病毒通用特异性引物,结合一条特异性荧光探针,用一步法荧光RT-PCR技术对猪蓝耳病病毒RNA进行体外扩增检测,用于临床上对可疑感染者的病原学诊断。本试剂盒中猪蓝耳病病毒通用的探针报告基团为FAM。
二、用途:
本试剂盒适用于猪病料、鼻咽拭子、血液等样本中的猪蓝耳病病毒(PRRSV)特异性检测,适用于猪蓝耳病病毒(PRRSV)感染的辅助诊断、监测及流行病学调查,其检测结果仅供临床参考。
三、试剂盒组成:(48T)
组份 数量 规格
猪蓝耳病病毒通用荧光qRT-PCR反应液(PRRSV-qRT-PCR MIX) 1管 672μL/管
酶混合物(Enzymes MIX) 1管 48μL/管
无核酸酶水(Nuclease-Free Water) 1管 500μL/管
阴性对照(NTC) 1管 50μL/管
阳性对照(PRRSV-PTC) 1管 50μL/管
四、储存条件及有效期:
本试剂盒于-20℃以下保存,有效期为6个月。
五、荧光PCR仪器适用范围:
ABI系列,Roche系列等荧光定量PCR检测仪等。
六、样品的采集与RNA提取
6.1 样品的采集
按照相关标准采集。标本短期内可保存于-20℃,长期保存可置-80℃,但不能超过6个月,标本运送应采用0℃冰壶。
6.1.1 血清:用一次性无菌注射器抽取静脉血2mL,注入无菌的干燥玻璃管,室温(22-25℃)放置30-60min,血标本可自发完成凝集析出血清,或直接使用水平离心机,3000rpm离心5min,吸取上层血清,转移至1.5mL灭菌离心管。
6.1.2 血浆:用一次性无菌注射器抽取静脉血2mL,注入含EDTA2Na(乙二*(代"胺")四乙酸二*)或柠檬酸*抗凝剂的玻璃管,立即轻轻颠倒玻璃管混合5-10次,使抗凝剂与静脉血充分混匀,5-10min后即可分离出血浆,转移至1.5mL灭菌离心管。
6.1.3 拭子、分泌物等样品:在装有拭子或分泌物的离心管中加入500µL PBS或生理盐水,剧烈振荡30s。棉拭子尽量挤出液体转移到无RNA酶污染的离心管中,6000rpm离心20s,取上清备用。
6.1.4 病灶组织样品:称取组织约0.1g于研磨器或组织匀浆器中研磨(最好置于冰上或加入液氮),再加1mL生理盐水研磨至无块状物,然后将样品转至1.5mL灭菌离心管中,8000rpm离心2min,取上清液于1.5mL灭菌离心管中。
6.2 RNA提取
可采购北京百奥莱博科技有限公司生产的RNA提取试剂盒(过柱法-荧光配套)或其他合适的商业化产品,并按照相应试剂盒说明进行操作。
注:阳性对照和阴性对照为已经抽提好的核酸(无需提取),直接取5µL加入到反应体系中即可。由于阳性对照浓度较高,建议最后在样品制备区域加入阳性对照。
七、检测步骤:
7.1 试剂的准备
从试剂盒中取出荧光qRT-PCR反应液(PRRSV-qRT-PCR MIX)、酶混合物(Enzymes MIX),冰上融化并振荡混匀后,10000rpm离心10s。
设所需要的PCR反应管管数为N(N=样本数+1管阴性对照+1管阳性对照),每个测试反应体系配制如下表:
试剂 每个反应加入的量 N个反应加入的量
荧光PCR反应液 14µL N×14µL
酶混合物 1 µL N×1µL
总量 15µL N×15µL
计算好各试剂的使用量,加入一适当体积洁净离心管中,充分混匀,10000rpm离心10s,向设定的N个PCR反应管中分别加入15μL,向每管中加入处理后样品/阴性对照(NTC)/阳性对照(PRRSV-PTC)5μL,10000rpm瞬时离心10秒。
7.2 qRT-PCR反应条件
将各反应管放入实时荧光PCR仪器的反应槽内。
推荐循环条件:
反转录(Reverse Transcription) 1循环 45℃ for 10 min
预变性 1循环 95℃ for 10 min
PCR扩增 40循环 95℃ for 15 sec
60℃ for 45 sec
在60℃ 延伸时收集荧光信号。报告基团:设置为FAM,淬灭基团:NONE,请勿选择ROX 参比荧光。
八、结果分析:
8.1 结果分析条件设定
直接读取检测结果。基线和阈值设定原则根据仪器噪声情况进行调整,以阈值线刚好超过正常阴性样品扩增曲线的最高点为准。
8.2 试验成立判定
(1) 阴性对照(NTC):不应产生任何的扩增曲线。
(2) 阳性对照(PRRSV-PTC):均产生扩增曲线。
(3) 以上条件应同时满足,否则,此次试验视为无效。
8.3 结果判定
(1) 在试验成立的条件下,Ct值≤35的样本为阳性,表明PRRSV核酸阳性。
(2) Ct值显示为无的样本为阴性样本,表明PRRSV核酸阴性。
(3) 如果35<Ct值≤40,判为可疑样品。对于可疑样品,先看扩增曲线。如果扩增曲线为对数扩增曲线,则为可疑阳性,否则判为阴性。
(4) 对于可疑阳性样品,重新抽提核酸,再次进行PRRSV qRT-PCR检测。如果重复扩增曲线为对数扩增曲线,判为样本阳性,表明PRRSV核酸阳性;否则判为样本阴性。
九、注意事项:
(1) 初次使用前请仔细阅读说明书。并严格按照说明书步骤操作。
(2) 所有使用的离心管最好高压灭菌,而且必须不含RNA酶。
(3) PCR操作应严格按照要求分区(试剂配制区、标本处理区、PCR扩增区等),防止实验室污染。
(4) 样本提取、试剂配置、加样需在不同区的超净工作台进行,以免污染。
(5) 试剂盒里所有物品应视为污染物对待,并按照卫生部《微生物生物医学实验室生物安全通则》进行处理。
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