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北京副溶血性弧菌毒素调控基因荧光PCR检测试剂盒(TOXR)

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  • 百奥莱博
  • SYA071-GQJ
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      北京百奥莱博科技有限公司

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    特别声明:本产品及我公司所售其他产品均为科研类试剂产品,严禁用于药物、医疗及其他非科研用途。

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    名称:北京副溶血性弧菌毒素调控基因荧光PCR检测试剂盒(TOXR)大量库存促销
    规格:48次/盒
    产地:国产|进口
    等级:科研试剂
    编号:SYA071

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    ·幽门螺旋杆菌(HP)单重荧光PCR检测试剂盒
    编号:SYA095
    等级:科研实验专用
    规格:48次/盒
    一、简介
    本试剂盒用一对幽门螺旋杆菌特异性引物,结合一条特异性探针,用荧光PCR技术对幽门螺旋杆菌核酸进行体外扩增检测,用于临床上对可疑感染者的病原学诊断。

    二、用途
    该试剂盒适用于检测水样粪便、疑似污染的水、食物等样本中的幽门螺旋杆菌,用于幽门螺旋杆菌(HP)的辅助诊断,其检测结果仅供临床参考。

    三、试剂盒组成(48T)
    组份 数量 规格
    HP反应液(HP-qPCR MIX) 1管 672μL/管
    DNA抽提液(DNA Extraction) 2管 1.5mL/管
    酶混合物(Enzymes MIX) 1管 48μL/管
    阴性对照(NTC) 1管 50μL/管
    HP阳性对照(HP-PTC) 1管 50μL/管

    四、荧光PCR仪器适用范围
    ABI系列、MJ系列、Roche系列,博日系列及其他荧光定量PCR检测仪。

    五、储存条件及有效期:
    本试剂盒于-20℃以下保存,有效期为6个月。

    六、样品采集、前处理与DNA提取
    6.1 样品采集
    水样便取0.5-1mL;疑似污染的食物取1g。
    6.2 样本前处理:
    水样便1300rpm离心2min,去尽上清;疑似污染的食物用手术剪剪碎混匀后取0.05g于研磨器中研磨,加入1.5mL生理盐水后继续研磨,待匀浆后转至1.5mL灭菌离心管中,8000rpm离心2min,取上清液100μL于1.5mL灭菌离心管中;疑似污染的水直接取100μL。
    6.3 DNA提取
    可采用PCR试剂盒配备的DNA抽提液,按以下说明进行DNA核酸的粗提。也可采购北京百奥莱博科技有限公司生产的DNA提取试剂盒(过柱法-荧光配套)或其他合适的商业化产品,并按照相应试剂盒说明进行操作。
    6.3.1液体培养物:取液体培养物100μL加到1.5mL无菌离心管中,8000rpm离心3min,尽量吸弃上清,加入50μL DNA抽提液充分混匀,100℃恒温10min,13000rpm离心3min,取上清5μL进行PCR反应。
    6.3.2固体培养物:挑取单克隆菌落与50μL DNA抽提液充分混匀,100℃恒温10min,13000rpm离心3min,取上清5μL进行PCR反应。
    6.3.3 粪便样品:挑取米粒大小粪便于灭菌离心管中,加入0.5mL生理盐水,振荡混匀,13000rpm离心3分钟,弃上清,沉淀中加入50μL DNA抽提液充分混匀,100℃恒温10min,13000rpm离心3min取上清5μL进行PCR反应。
    6.3.4 其他液体标本:取标本2-3mL,13000rpm离心3min,弃上清,沉淀中加入50μL DNA抽提液充分混匀,100℃恒温10min,13000rpm离心3min取上清5μL进行PCR反应。
     注:建议采用相关标准方法进行前增菌,并按照6.3.1方法进行提取。阳性对照和阴性对照为已经抽提好的核酸(无需提取),直接取5µL加入到反应体系中即可。由于阳性对照浓度较高,建议最后在样品制备区域加入阳性对照。

    七、检测步骤:
    7.1 试剂的准备
    从试剂盒中取出荧光PCR反应液(HP-qPCR MIX)、酶混合液(Enzymes MIX),冰上融化并振荡混匀后,10000rpm离心10s。
    设所需要的PCR反应管管数为N(N=样本数+1管阴性对照+1管阳性对照),每个测试反应体系配制如下表:
    试剂 每个反应加入的量 N个反应加入的量
    荧光PCR反应液 14µL N×14µL
    酶混合液 1µL N×1µL
    总量 15µL N×15µL
    计算好各试剂的使用量,加入一适当体积洁净离心管中,充分混匀,10000rpm离心10s,向设定的N个PCR反应管中分别加入15μL荧光PCR反应液,向每管中加入处理后样品/阴性对照(NTC)/阳性对照(HP-PTC)5μL,10000rpm瞬时离心10秒。
    7.2 qPCR反应条件
    将各反应管放入实时荧光PCR仪器的反应槽内。
    推荐循环条件:
    1循环 50℃ for 2 min
    预变性 1循环 95℃ for 10 min
    PCR扩增 40循环 95℃ for 15 sec
    60℃ for 60 sec
    在60℃延伸时收集荧光信号。报告基团:设置为FAM。淬灭基团:NONE,请勿选择ROX参比荧光。

    八、结果分析
    8.1 结果分析条件设定
    直接读取检测结果。基线和阈值设定原则根据仪器噪声情况进行调整,以阈值线刚好超过正常阴性样品扩增曲线的最高点为准。
    8.2 试验成立判定
    (1) 阴性对照(NTC):不应产生任何的扩增曲线。
    (2) 阳性对照(HP-PTC):均产生扩增曲线。
    (3) 以上条件应同时满足,否则,此次试验视为无效。
    8.3 结果判定
    (1) 在试验成立的条件下,Ct值≤35的样本为阳性,表明幽门螺旋杆菌核酸阳性。
    (2) Ct值显示为无的样本为阴性样本,表明幽门螺旋杆菌核酸阴性。
    (3) 如果35<Ct值≤40,判为可疑样品。对于可疑样品,先看扩增曲线。如果扩增曲线为对数扩增曲线,则为可疑阳性,否则判为阴性。
    (4) 对于可疑阳性样品,重新抽提核酸,再次进行幽门螺旋杆菌qPCR检测。如果重复扩增曲线为对数扩增曲线,判为样本阳性,表明幽门螺旋杆菌核酸阳性;否则判为样本阴性。

    九、注意事项:
    (1) 初次使用前请仔细阅读说明书。并严格按照说明书步骤操作。
    (2) 所有使用的离心管应高压灭菌,而且必须不含DNA酶。
    (3) PCR操作应严格按照要求分区(试剂配制区、标本处理区、PCR扩增区等),防止实验室污染。
    (4) 样本提取、试剂配置、加样需在不同区的超净工作台进行,以免污染。
    (5) 试剂盒里所有物品应视为污染物对待,并按照卫生部《微生物生物医学实验室生物安全通则》进行处理。




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