KFS335型PCNA细胞增殖检测试剂盒(ICF/FACS法

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名称：KFS335型PCNA细胞增殖检测试剂盒(ICF/FACS法)厂家价格
产地：国产|进口
品牌：百奥莱博
英文名：PCNA cell proliferation Detection Kit
PCNA 细胞增殖检测试剂盒（细胞免疫荧光法/流式细胞仪检测），PCNA是细胞DNA 多聚酶的“δ”辅助蛋白，是真核细胞DNA 合成时所必需的一种酸性核蛋白。PCNA 在细胞核内合成，并储存在核内，细胞处于静止状态时，其含量很低，当细胞进入增殖周期中，其表达明显增加，故PCNA 的表达高低可反映细胞增殖的活跃程度。

操作方法
1. 在最适的环境下培养细胞。
2. 除去培养液，用PBS 洗一次。
3. 胰蛋白酶处理和收集细胞，离心，（注意1）保证每管细胞数在106 个。
4. 用0.3 ml PBS 轻轻的重悬细胞, 然后慢慢加入0.7 ml 预冷的100%乙醇。用1 ml 玻璃移液管小心的混匀。在4°C 至少1h。（注意2）
5. 沉淀细胞，完全吸去上清。
6. 用150 μl PBS/1 % BSA 洗细胞2 次。
7. 用100μl 抗体孵育液（0.5% Tween-20/1%BSA/PBS）重悬细胞，加入1ul PCNA 抗体(1μg/106 cells)，室温孵育1 小时。
8. 离心收集细胞，用150μl1% BSA-PBS 洗2 次。
9. 离心收集细胞，用50μl 抗体孵育液重悬，加1μl (1.5μg/106 cells) 羊抗鼠IgG-FITC，室温孵育30 分钟。离心收集细胞，150μl PBS/ 1 % BSA 洗2 次。
10. 用含有终浓度为10 μg/ml RNase A 和20μg/ml PI 的0.5 ml PBS（pH7.4）重悬细胞。
11. 避光使细胞在室温下孵育20min 后，离心收集细胞，150μl PBS/ 1 % BSA 洗2 次后，转移至流式检测管中重悬。
12. FACS 检测或者储存于4℃。

注意事项
1.所有的沉淀细胞步骤为2,000 rpm, 5 min。
2.可渗透化处理细胞后细胞浓度大约为106 ，样品可以4°C 储存于乙醇中到2 个星期。
3.流式细胞检测时需要设立对照试验：
只用PI 染细胞
只用羊抗小鼠IgG-FITC 染细胞
未染色的细胞组

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·H-89(PKA抑制剂)
编号：KFS294
规格：1mg|5mg
H89 2HCl 是一种有效的PKA 抑制剂，Ki 为48 nM，作用于PKA 比作用于PKG 选择性高10倍，比作用于PKC， MLCK，*调蛋白激酶II 和酪蛋白激I/II 选择性高500倍。

·Caspase 3分光光度法检测试剂盒
编号：KFS198
英文名称：Caspase-3 Colorimetric Assay Kit
规格：20T|50T|100T
本试剂盒适用于培养细胞及新鲜组织caspase-3 检测。Caspase 家族在介导细胞凋亡的过程中起着非常重要的作用，其中caspase-3 为关键的执行分子，与DNA 断裂、染色质凝聚和凋亡小体形成有关。Caspase-3 在正常状态下以酶原的形式存在于胞浆中，没有活性；但在细胞发生凋亡阶段，它被激活，活化的Caspase-3 由两个大亚基和两个小亚基组成，裂解相应的胞浆胞核底物，最终导致细胞凋亡。Caspase-3 分光光度法检测试剂盒就是将caspase-3 序列特异性的多肽偶联至发色基团。当该底物被Caspase-3 剪切后，发色基团即游离出来，可通过酶标仪或分光光度计（λ=405nm或400nm）测定其吸光值，考察caspase-3 的活化程度。

注意事项
1. Caspase-3 Substrate 避光保存及使用。
2. 对某些凋亡诱导剂引起的细胞凋亡可能存在非依赖于Caspase-3 活化的机制，这种情况时利用本试剂盒检测Caspase-3 活性无明显改变，需要考虑凋亡机制中的其他信号通路。
3. 细胞数量需达到3~5×106 个或新鲜组织50~100mg，以便能达到测定需要的100~200μg 蛋白的要求，因为Caspase-3 的活性与细胞裂解液的蛋白含量有关，如测定的OD 值偏低，可通过增加细胞数量或组织量的方法来提高蛋白量。


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