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- 技术资料
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640
- 英文名:
Non-enzymatic polysaccharide scavengers
- 保质期:
一年
- 供应商:
北京百奥莱博科技有限公司
- 保存条件:
常温
特别声明:本产品及我公司所售其他产品均为科研类试剂产品,严禁用于药物、医疗及其他非科研用途。
百奥莱博专业生产销*(代"售")北京现货非酶多糖清除剂(DNA专用)优惠,我公司供应的分子生物学试剂品类齐全,且具有优势价格,欢迎新老客户垂询订购。
名称:北京现货非酶多糖清除剂(DNA专用)优惠
规格:50次
编号:BTN111008
产地:国产|进口
英文名:Non-enzymatic polysaccharide scavengers
品牌:百奥莱博
用很多方法提取的植物、真菌或细菌基因组DNA样品中经常会含有多糖(Polysaccharide)污染,这些污染会严重影响下游的酶切和PCR等实验。为此北京我公司开发了非酶法多糖清除剂(DNA专用)
产品特点:
1.高效,能有效地去除基因组DNA中的多糖污染,使DNA溶液不再粘稠。
2. DNA分子完整性不会受到任何影响。
3.快速,全部操作在样品管中完成,只需要二十多分钟。
4. 稳定,本产品为非酶产品,可以常温运输和保存。
产品组成:
| 成分 | 规格 |
| 溶液A | 2.5ml |
| 溶液B | 5ml |
| 微量核酸沉淀剂 | 10ml |
| 说明书 | 1份 |
储存条件:常温运输和保存,有效期一年。
使用方法:
1. 如果DNA溶液的体积不够100μL,用水或TE补到100μL。如果超过100μL,可以用我公司的核酸浓缩液(需另买)浓缩到100μL,或者分成几个100μL再处理。
2. 将50μL溶液A加入到100μL待处理的DNA样品中,充分吹打混匀。
3. 15μL的溶液B,充分吹打混匀。如果溶液B过于粘稠,可以先在65℃保温后再取用。
4. 加入150μL的*仿,充分振荡半分钟。
5. 12000~15000g离心2分钟,小心转移上清到一新的1.5mL塑料离心管中,交界处将有白膜样的多糖沉淀。
6. 重复上步操作,白膜样的多糖沉淀将减少。是否需要继续此步操作根据多糖污染严重程度决定。可以一直重复直到白膜不再出现。本产品提供的溶液B的量足够抽提5-6次。
7.在最后得到的上清液中加入两倍体积(200μL)的微量核酸沉淀剂,混匀后12000~15000g离心10-20分钟,小心弃上清。注意不要触及DNA沉淀。
8. 加入1mL自备的75%乙醇,振荡器上短暂振荡数秒后12000~15000g离心2分钟,小心弃上清。注意不要触及DNA沉淀。
9. 短暂离心数秒,用移液枪小心吸去残留液体(约50μL)后,加入适量自备TE,立即电泳检测,OD检测后放-80℃长期保存。
我公司的北京现货非酶多糖清除剂(DNA专用)优惠,性价比高,货期短,送货上门,欢迎您来电咨询购买,另外,我公司还生产供应销*(代"售")下列产品:
·绿如蓝核酸染料(可见光型)
编号:BTN121002
英文名称:DNAgreen(Visible Light)
规格:10mL
本品是国内首款可见光核酸染料,用于电泳时替代EB,在可见光下观察DNA或RNA的电泳。
产品特点:
1. 无毒。对人体和环境没有任何毒害,有利于保护使用者的健康和保护日益恶化的环境。
2. 实时染色。可以在电泳过程中实时观察DNA和RNA的泳动,不需要任何额外的仪器设备或光源。注:本产品在紫外条件下不发光。
3. 由于避免了UV 对DNA的伤害,胶回收片段的克隆效率比UV下回收的片段高2-10倍,非常适用于PCR或酶切回收。
4. 稳定。对光、水和热的稳定性很好,可加入琼脂糖凝胶中反复熔化。
5. 灵敏。检测灵敏度跟EB相当,能满足常规核酸电泳实验要求。
6. 使用方法多样。既可以电泳中染色,也可以电泳后染色;既可用于琼脂糖胶,还可用于PAGE。
7.跟各种常用的核酸电泳缓冲液(如超快核酸电泳液、TBE、TAE)兼容,但在超快核酸电泳液中背景最低。
储存条件:常温运输和保存(长期保存最好放4℃),保存期限一年。
使用方法之一:电泳中染色(琼脂糖电泳时使用)
1.在 100mL 融化的琼脂糖凝胶加入100μl 本产品,充分混合均匀后倒胶,凝固后凝胶将呈淡紫色。本产品不能跟其他任何核酸染料同时使用(如EB和SYBR Green I),否则会相互干扰,不会出现任何条带。使用时请严格按照此比例加入染料,否则将出现糊带现象。
2. 将凝固的琼脂糖凝胶放在 5分钟超快核酸电泳液、TEB或TAE中。为节约染料,不推荐将染料加到电泳缓冲液中。
3. 将DNA样品与6×A型DNAload 按5:1的比例混合后上样,由于本染料比EB 灵敏度稍低,所以DNA的上样量和DNA Marker的上样量最好比使用EB染料时多1倍。
注意:不推荐使用常规的含*酚蓝和二甲*蓝的上样液,因为这些染料的颜色跟DNA和RNA的颜色都将呈蓝色,将严重干扰条带的观察和解读。本产品提供的6×A型DNAload 只含相当于50bp大小的红色染料,不会干扰蓝色DNA和RNA 条带的观察。
4.电泳,电泳参数同常规的电泳。跑在前面的是红色的电泳示踪染料(来于上样液),其泳动速度相当于50bp的DNA。
5. 直接在光线明亮的位置直接观察电泳的进行,DNA和RNA 将呈现蓝色条带。如果有观察X光片用的灯箱,可以将电泳中的电泳槽或电泳后的凝胶平放在铺有塑料布的灯箱发光面的上面观察效果更佳。典型电泳结果如下:
6. 如果要回收DNA,则关闭电泳后直接切下所需条带,其余回收过程同常规方法。
使用方法之二:电泳后染色(PAGE胶染色必须使用电泳后染色法,琼脂糖电泳也可以选择本方法。不论是PAGE胶还是琼脂糖胶,本方法所需染料的用量比电泳中染色大2-10倍)
7. 按照常规方法进行 PAGE电泳或琼脂糖电泳。
8. 用电泳液将本产品稀释100-500倍(100mL 水需要加0.2-1mL 本产品),将胶放入,室温下摇晃染色1-10分钟即可看见蓝紫色的DNA和RNA条带。具体染色多长时间取决于DNA和RNA的浓度。
9.染色液可以避光放4℃保存,能反复使用数次。
疑难解答:
Q:为何电泳的前沿出现下图这种只出现一条带的情况呢?
A: 这是由于样品中有大量RNA小片段污染(基因组DNA提取时没有RNase处理的话常常会有大量RNA污染),这些小片段裹走了凝胶中的染料,使其后面的凝胶区域没有染料,因此后面的大片段没法染色。建议电泳后再染色观察大片段。
Q: 本产品可否用于RNA染色?
A:可以,也呈蓝紫色条带。
Q:本产品是否可以加入上样液中进行染色?
A:不行,本产品只能直接加入琼脂糖凝胶中进行染色或PAGE电泳后再染色。
Q:为何电泳时间长的话前端的DNA和RNA 条带很淡或根本看不见?
A:跟EB一样,电泳时本产品朝负极方向移动,当前端的DNA(最小片段)进入没有染料的区域时,已经跟DNA或RNA 结合的染料分子会逐渐脱落,所以条带会变淡或看不见。解决办法之一是缩短电泳时间或电泳后再染色。
Q:本产品在哪种缓冲液中效果最好?
A:本产品跟各种电泳缓冲液兼容,但背景最浅的是中超快核酸电泳液。
北京现货非酶多糖清除剂(DNA专用)优惠关键词:Non-enzymatic polysaccharide scavengers,非酶多糖清除剂(DNA专用),BTN111008
·PCR抑制物清除剂
编号:BTN60804
英文名称:Scavengers of PCR inhibitor
规格:1mL
用血液、土壤、植物、中药材等样品中提取的DNA 经常含有会抑制PCR的产物。本产品专门用于解除这些PCR 抑制剂的抑制作用,使DNA 能够用于PCR扩增。
产品特点:
1. 使用简单,直接加入PCR反应体系中使用。
2.适用范围广,可以用于解除血液、土壤、植物、中药材等DNA样品中的PCR 抑制剂。
低温运输,-20℃保存,有效期一年。
使用方法:将本产品按1:10的比例加入到PCR反应体系中即可进行PCR,如果PCR反应体系为50μL,则需要加本产品5μL。
·随机引物法DNA探针标记试剂盒
编号:BTN90603A
英文名称:Random Primer DNA Labeling Kit
规格:5次
本试剂盒是基于Feinberg和Vogelstein发明的随机引物标记法而开发出来的即用型DNA探针标记试剂盒,标记过程由双链DNA热变性、随机引物与单链DNA结合、在Klenow DNA聚合酶催化下,引物的延伸合成DNA探针并掺入标记的核苷酸三步组成,可用下面的示意图表示:
本产品对Feinberg和Vogelstein经典方法进行了改良。
产品特点:
1. 提供的标记反应液整合了除酶和模板外的所有成分,简化了反应加样步骤,提高了标记反应的可重复性。
2. 使用无外切活性的Klenow exo- DNA聚合酶,已标记DNA探针不会被酶降解。
3.快速,最快1小时即可完成标记反应。
4. 得到的DNA探针比活性高(如果是同位素,可以达到109cpm/μg DNA),检测灵敏度高。
5. 所需模版DNA量少(只需要10ng以上即可),DNA可以是各种形状(线状和环状)的、也可以是单链或双链的,长度在100bp以上均可。
6. 得到的探针长度在200-400nt之间,可以用于Southern杂交、Northern杂交、原位杂交、菌落和斑点印迹杂交等。
7. 提供三种标记选择,其中BTN90603A可用于各种同位素标记和其他任何非同位素标记,但需自备标记底物;BTN90603B和BTN90603C可分别用于生物素和地高*(代"辛")标记,不需自备标记底物。
试剂盒组成:
| 成分 | 规格 |
| 2×A型标记反应液(自备标记物型) | 50μl(仅A型有) |
| 2×B型标记反应液(生物素型) | 50μl(仅B型有) |
| 2×C型标记反应液(DIG型) | 50μl(仅C型有) |
| dATP,2mM | 10μL(仅A型有) |
| dTTP,2mM | 10μL(仅A型有) |
| dGTP,2mM | 10μL(仅A型有) |
| dCTP,2mM | 10μL(仅A型有) |
| Klenow exo-聚合酶(2U/μL) | 5μl |
| 超纯水 | 1ml |
| 说明书 | 1份 |
储存条件:低温运输,-20℃保存,有效期一年。
使用方法:
1.在一干净的硅化的塑料离心管中加入下列成分:
| 成分 | 用量 |
| 模板DNA | 50-150ng |
| 2×标记反应液(ABC三种之一) | 10μl |
| 超纯水 | 补水到15μl |
注意:非同位素标记物由于疏水性强,容易与常用的塑料离心管表面非特异性结合,所以一定要使用硅化的塑料离心管。模板DNA并非越多越好,因为模板会在杂交反应中跟标记的探针杂交,竞争性地抑制探针跟靶分子的杂交。
2. 沸水浴5-10分钟,或在PCR仪上100℃加热5-10分钟使DNA模版充分变性,立即放冰上待用。注意:如果PCR仪器不能设置到100℃,99℃加热5分钟也可。
3.高速离心数秒使所有液体集中在管底,根据试剂盒类型加入下列成份:
| 试剂盒类型 | 成分及用量 |
| BTN90603A型 | dATP、dGTP、dCTP各1μl(共3μL,浓度均为2mM) 自备的2mM dTTP/标记dUTP混合物(见注)1μL 1μl Klenow exo聚合酶 |
| BTN90603B型 | 1μl Klenow exo聚合酶 4μl超纯水 |
| BTN90603C型 | 1μl Klenow exo聚合酶 4μl超纯水 |
注:上表中的dTTP/标记dUTP混合物中dTTP和标记的dUTP的总浓度为2mM(在20μL体系中混合液的终浓度为0.1mM,dTTP与生物素或DIG标记的dUTP的比例最好为65:35)。由于空间阻碍,并非标记生物素或DIG标记的dUTP越多灵敏度越高,一般dTTP与标记dUTP的比例在65:35为最佳。但如果使用自备的其他标记核苷酸,如fluorescein、hydroxycoumarin、resorufin和aminoallyl标记的dUTP,则用户需要自己摸索其与dTTP之间的最佳比例,如果使用32P标记的dUTP,则比活最好为3000Ci/mmol,浓度为好为10uCi/μL,并且不需要加入dTTP。
4. 轻柔吹打混匀。如有液滴沾在管壁上,高速离心数秒使所有液体集中在管底。
5. 37℃保温1-20小时。标记效率跟模版量和保温时间相关,具体见下表:
| 模版DNA用量 | 1小时后探针合成量 | 20小时后探针合成量 |
| 10ng | 80ng | 900ng |
| 30ng | 150ng | 1.35μg |
| 100ng | 350ng | 1.65μg |
| 300ng | 750ng | 2.2μg |
| 1μg | 1.3μg | 2.6μg |
| 3μg | 1.6μng | 2.6μg |
6. 加1μl自备的0.5M EDTA(pH8.0)终止反应,立即放冰上待用或放-20℃保存一年。用前需要加热100℃ 5分钟使DNA探针变性成单链,然后直接加入到杂交反应液中即可。如果电泳检测,标记产物将是弥散状态。
注意:本方法标记核苷酸掺入率极高,因此可以不经纯化直接使用。如果需要纯化,注意不要用酚抽提法纯化非同位素(生物素、DIG和其他等)标记的DNA探针,因为这些标记分子疏水性强,能使标记的DNA进入疏水的有机相而丢失,但可以用乙醇沉淀和Sephadex G50回收(可另购非同位素探针柱式纯化试剂盒)。对比活高的同位素探针,由于其极其不稳定,因此应该立即使用,不要长久放置。
北京现货非酶多糖清除剂(DNA专用)优惠关键词:Non-enzymatic polysaccharide scavengers,非酶多糖清除剂(DNA专用),BTN111008
·Tris饱和酚-*仿-异戊醇混合液(DNA提取用)
编号:BTN100805B
英文名称:Phenol-Chloroform-Isoamylol
规格:250mL
本产品是Tris饱和酚和*仿和异戊醇的25:24:1的预混液,可以替代Tris饱和酚,用于抽提核酸,去除其中的蛋白质和脂溶性物质。跟Tris饱和酚相比,它不再需要*仿抽提。同时使用本产品不容易产生倒相现象(就是*酚相在上层,水相在下层)。A型pH<5.0,为RNA提取专用;B型pH>7.8,为DNA提取专用。
储存条件:常温运输和保存、避光。有效期一年。
相关知识:
Q:*酚提取法的局限在哪里?
A:酚提取法的局限是不能去除核酸以外的其他水溶性的多糖和糖蛋白(Howe曾经用酚提取法来提取糖蛋白,文献见Meth. Enzymol. 28,236,1972),所以在用酚提取+醇沉淀法从富含多糖的样品(如植物)和富含糖蛋白的样品(如血液、软骨)中提取DNA或RNA时,很容易产生多糖污染。
Q:离心后为何*酚相消失?
A:酚跟水互溶,互溶比例跟温度、离子强度、去污剂浓度相关有时(如65℃时)可以达到彻底互溶。酚相消失可能就是上述原因造成,由于液体成本一般不能随意改动,所以解决办法一是用冷冻离心机、二是增加酚的用量、三是直接使用酚-*仿-异戊醇混合液,将酚抽提和*仿抽提合二为一。
Q:饱和酚为何呈淡黄色或棕色?
A:*酚本身是无色,但为了防止其氧化,一般加入了一定比例的抗氧化剂8-羟基喹*(代"啉"),后者是淡黄色或棕色(取决于浓度),所以酚也呈淡黄色或棕色。
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