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- 详细信息
- 文献和实验
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- 库存:
662
- 英文名:
Human Methylated/Non-methylated DNA Standard
- 保质期:
一年
- 供应商:
北京百奥莱博科技有限公司
- 保存条件:
常温运输、-20℃
特别声明:本产品及我公司所售其他产品均为科研类试剂产品,严禁用于药物、医疗及其他非科研用途。
百奥莱博专业生产供应BTN100936型人甲基化/非甲基化DNA标准品批发,我公司销*(代"售")全品类的分子生物学试剂,价格优惠,欢迎广大科研工作者垂询订购。
名称:BTN100936型人甲基化/非甲基化DNA标准品批发
品牌:百奥莱博
英文名:Human Methylated/Non-methylated DNA Standard
产地:国产|进口
规格:100次
甲基化专一PCR必须要使用甲基化的DNA做修饰和PCR的阳性对照,用非甲基化的DNA做修饰和PCR的阴性对照,否则无法判断样品是否甲基化。本产品通过nested WGA方法用人血液DNA 制备而得,主要用于检测和优化设计的甲基化引物。产品即开即用,非常方便。
产品组成:
| 成分 | 规格 |
| 人甲基化DNA(10ng/μL) | 100μl |
| 人非甲基化DNA(10ng/μL) | 100μl |
| 说明书 | 1份 |
储存条件:常温运输、-20℃保存、有效期一年。
自备试剂:超纯水、甲基化PCR引物。
使用方法:
取10-100ng 本产品作为甲基化PCR的模板。PCR 参数由客户根据引物,PCR区域长度等因素决定。
甲基化专一性PCR 条件(仅供参考)
| 成分 | 体积 |
| PCR MagicMix 2.0 | 15μl |
| 模板DNA(10ng/uL)(甲基化或非甲基化DNA) | 1-10μl |
| 自备甲基化PCR引物一 | 0.2-0.5μM(需优化) |
| 自备甲基化PCR引物二 | 0.2-0.5μM(需优化) |
| 超纯水 | 补水到30μL |
PCR 参数需要用户自己根据引物和PCR产物的长度决定。
除BTN100936型人甲基化/非甲基化DNA标准品批发外,我公司正在打折促销以下产品:
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BTN100936型人甲基化/非甲基化DNA标准品批发关键词:Human Methylated/Non-methylated DNA Standard,人甲基化/非甲基化DNA标准品,BTN100936
·M13噬菌体单链基因组DNA提取试剂盒
编号:BTN130952
英文名称:M13 phage single chain genomic DNA extraction kit
规格:50次
·Southern DNA Marker Oligo(DIG标记)
编号:BTN120654F
英文名称:Southern DNA Marker Oligo(Labeled by DIG)
规格:20次
·RNA洗脱液
编号:BTN71207
英文名称:RNA Elution Buffer
规格:10mL
本产品是专门从硅胶膜离心吸附柱上高效洗脱结合的RNA。本产品与各种硅胶膜兼容,洗涤普通离心吸附柱一次需要本产品20-100μl。
储存条件:常温运输及保存、有效期一年。
·脱脂奶粉
编号:BTN130907
英文名称:Non-fat Milk
规格:50g
本产品为分子生物学级脱脂奶粉,可广泛用于Southern、Northern和Western印迹杂交实验的封闭试验。
储存条件:常温运输和保存、有效期半年。
·随机引物法DNA探针地高*(代"辛")标记试剂盒
编号:BTN90603C
英文名称:Random Primer DNA Labeling Kit(Digoxin)
规格:5次
本试剂盒是基于Feinberg和Vogelstein发明的随机引物标记法而开发出来的即用型DNA探针标记试剂盒,标记过程由双链DNA热变性、随机引物与单链DNA结合、在Klenow DNA聚合酶催化下,引物的延伸合成DNA探针并掺入标记的核苷酸三步组成,可用下面的示意图表示:
本产品对Feinberg和Vogelstein经典方法进行了改良。
产品特点:
1. 提供的标记反应液整合了除酶和模板外的所有成分,简化了反应加样步骤,提高了标记反应的可重复性。
2. 使用无外切活性的Klenow exo- DNA聚合酶,已标记DNA探针不会被酶降解。
3.快速,最快1小时即可完成标记反应。
4. 得到的DNA探针比活性高(如果是同位素,可以达到109cpm/μg DNA),检测灵敏度高。
5. 所需模版DNA量少(只需要10ng以上即可),DNA可以是各种形状(线状和环状)的、也可以是单链或双链的,长度在100bp以上均可。
6. 得到的探针长度在200-400nt之间,可以用于Southern杂交、Northern杂交、原位杂交、菌落和斑点印迹杂交等。
7. 提供三种标记选择,其中BTN90603A可用于各种同位素标记和其他任何非同位素标记,但需自备标记底物;BTN90603B和BTN90603C可分别用于生物素和地高*(代"辛")标记,不需自备标记底物。
试剂盒组成:
| 成分 | 规格 |
| 2×A型标记反应液(自备标记物型) | 50μl(仅A型有) |
| 2×B型标记反应液(生物素型) | 50μl(仅B型有) |
| 2×C型标记反应液(DIG型) | 50μl(仅C型有) |
| dATP,2mM | 10μL(仅A型有) |
| dTTP,2mM | 10μL(仅A型有) |
| dGTP,2mM | 10μL(仅A型有) |
| dCTP,2mM | 10μL(仅A型有) |
| Klenow exo-聚合酶(2U/μL) | 5μl |
| 超纯水 | 1ml |
| 说明书 | 1份 |
储存条件:低温运输,-20℃保存,有效期一年。
使用方法:
1.在一干净的硅化的塑料离心管中加入下列成分:
| 成分 | 用量 |
| 模板DNA | 50-150ng |
| 2×标记反应液(ABC三种之一) | 10μl |
| 超纯水 | 补水到15μl |
注意:非同位素标记物由于疏水性强,容易与常用的塑料离心管表面非特异性结合,所以一定要使用硅化的塑料离心管。模板DNA并非越多越好,因为模板会在杂交反应中跟标记的探针杂交,竞争性地抑制探针跟靶分子的杂交。
2. 沸水浴5-10分钟,或在PCR仪上100℃加热5-10分钟使DNA模版充分变性,立即放冰上待用。注意:如果PCR仪器不能设置到100℃,99℃加热5分钟也可。
3.高速离心数秒使所有液体集中在管底,根据试剂盒类型加入下列成份:
| 试剂盒类型 | 成分及用量 |
| BTN90603A型 | dATP、dGTP、dCTP各1μl(共3μL,浓度均为2mM) 自备的2mM dTTP/标记dUTP混合物(见注)1μL 1μl Klenow exo聚合酶 |
| BTN90603B型 | 1μl Klenow exo聚合酶 4μl超纯水 |
| BTN90603C型 | 1μl Klenow exo聚合酶 4μl超纯水 |
注:上表中的dTTP/标记dUTP混合物中dTTP和标记的dUTP的总浓度为2mM(在20μL体系中混合液的终浓度为0.1mM,dTTP与生物素或DIG标记的dUTP的比例最好为65:35)。由于空间阻碍,并非标记生物素或DIG标记的dUTP越多灵敏度越高,一般dTTP与标记dUTP的比例在65:35为最佳。但如果使用自备的其他标记核苷酸,如fluorescein、hydroxycoumarin、resorufin和aminoallyl标记的dUTP,则用户需要自己摸索其与dTTP之间的最佳比例,如果使用32P标记的dUTP,则比活最好为3000Ci/mmol,浓度为好为10uCi/μL,并且不需要加入dTTP。
4. 轻柔吹打混匀。如有液滴沾在管壁上,高速离心数秒使所有液体集中在管底。
5. 37℃保温1-20小时。标记效率跟模版量和保温时间相关,具体见下表:
| 模版DNA用量 | 1小时后探针合成量 | 20小时后探针合成量 |
| 10ng | 80ng | 900ng |
| 30ng | 150ng | 1.35μg |
| 100ng | 350ng | 1.65μg |
| 300ng | 750ng | 2.2μg |
| 1μg | 1.3μg | 2.6μg |
| 3μg | 1.6μng | 2.6μg |
6. 加1μl自备的0.5M EDTA(pH8.0)终止反应,立即放冰上待用或放-20℃保存一年。用前需要加热100℃ 5分钟使DNA探针变性成单链,然后直接加入到杂交反应液中即可。如果电泳检测,标记产物将是弥散状态。
注意:本方法标记核苷酸掺入率极高,因此可以不经纯化直接使用。如果需要纯化,注意不要用酚抽提法纯化非同位素(生物素、DIG和其他等)标记的DNA探针,因为这些标记分子疏水性强,能使标记的DNA进入疏水的有机相而丢失,但可以用乙醇沉淀和Sephadex G50回收(可另购非同位素探针柱式纯化试剂盒)。对比活高的同位素探针,由于其极其不稳定,因此应该立即使用,不要长久放置。
BTN100936型人甲基化/非甲基化DNA标准品批发关键词:Human Methylated/Non-methylated DNA Standard,人甲基化/非甲基化DNA标准品,BTN100936
·柱式昆虫DNA提取试剂盒
编号:BTN81101
英文名称:Insect DNA column extraction kit
规格:50次
本试剂盒是专门用于从昆虫、节肢动物、蛔虫、扁形虫和一些富含多糖的动物组织中提取基因组DNA的试剂盒。其原理是基于去垢剂在适当的离子强度条件下,特异地跟基因组DNA结合形成沉淀,然后在用硅胶膜离心吸附法进行进一步纯化得到DNA。
产品特点:
1.适用于用常规方法难以提取的、各种富含多糖的动物,包括昆虫、节肢动物、蛔虫、扁形虫等。
2. 除新鲜样品外,还适合于各种保存状态的样品,包括冷冻的样品、用乙醇保存的样品和福尔马林保存的样品。
3. 提取到的基因组DNA完整性,长度一般在20-50 Kb。
4. DNA纯净,OD260/280一般都在1.8左右,可直接用于PCR、酶切、杂交等。
5. 操作简单,整个过程约30分钟。
6. 安全无毒,本试剂盒对人体无毒,无腐蚀性和刺激性气味。
试剂盒组成:
| 成分 | 规格 |
| 溶液A | 50ml |
| 溶液B | 50ml |
| 溶液C | 50ml |
| 离心吸附柱 | 50套 |
| 通用洗柱液 | 50ml |
| DNA洗脱液2.0 | 10ml |
| 说明书 | 1份 |
储存条件:常温运输及保存,有效期一年。
使用方法:
1. 称取0.1-0.3 g昆虫样品转移到塑料研钵中,液氮研磨成粉后转移到一个干净的1.5mL塑料离心管中。
注意:最好避免使用含二氧化硅的玻璃研钵,因为DNA会吸附在表面,影响得率。
2.在离心管中加入1mL 65℃预热的溶液A并用移液枪头充分吹打混匀(如果溶液A有沉淀,需先在65℃加热溶解后摇匀再使用)。
3. 65℃保温5-30分钟,其间最好吹打混匀2-3次。
4. 12000~15000g室温离心3分钟。
5. 将不超过0.75mL的上清转移到新离心管中。有时候上清液中还会有少量细小悬浮物,但对后续操作没有影响,不必进行特殊处理。
6.在上清液中加入等体积的溶液B,上下颠倒30秒充分混匀,溶液将呈白色混浊状。
7. 将其置于冰浴中放置5-10分钟。
8. 12000~15000g室温离心3分钟,转移上清到新的1.5mL塑料离心管中。
9. 加入0.2mL的*仿(自备),震荡器上充分振荡30秒混匀。
10. 12000~15000g室温离心3分钟,两相交界面将有白色膜状物,小心转移上清到新1.5-5mL塑料离心管中。注意:由于下一步要加1.5倍体积的溶液C,所以新的离心管的体积要足够大。
11. 加入1.5倍体积的溶液C,上下颠倒30秒混匀,然后分多次的将混合液转移到离心吸附柱中。
12. 每次转移0.7-0.8mL混合液后,室温放置5-10分钟。
13. 12000~15000g室温1分钟,弃穿透液。
14. 对需要多次上柱的样品,可以在此将剩余的样品加到离心吸附柱式中,重复第12-14步的操作。
15. 将0.7mL通用洗柱液加入离心柱,室温离心1分钟,弃穿透液。
16.在离心吸附柱中加入0.3mL的通用洗柱液,12000~15000g离心半分钟(此步为第二次洗涤)。
17. 空甩1分钟去除残留液体。
18. 将离心柱放置在一新的1.5mL塑料离心管中,加入30-100μl DNA洗脱液2.0。
19.室温放置5分钟后离心1分钟,管底即为昆虫DNA溶液,可立即使用,也可长期保存在-20℃。
20.可以重复上步一次,以洗脱更多的DNA。
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