BTN81201型酵母电转感受态细胞制备液怎么卖

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百奥莱博专业生产销*(代"售")BTN81201型酵母电转感受态细胞制备液怎么卖，我公司供应的分子生物学试剂品类齐全，且具有优势价格，欢迎新老客户垂询订购。

名称：BTN81201型酵母电转感受态细胞制备液怎么卖
编号：BTN81201
产地：国产|进口
英文名：Yeast Electro Competent Cell Preparation Kit
规格：20次
本酵母电感受态细胞制备试剂是一种通过化学处理酿酒酵母和裂殖酵母电感受态细胞，使之不但马上能用于电转化，还能长期放置后用于电转化。

产品特点：
1. 操作简单，单溶液制备，除酵母培养的时间外，整个操作只需要10余分钟。
2. 制备得到的感受态细胞可以-80℃保存一年，方便多次使用，免去每次转化都要新鲜制备感受态细胞。
3. 主要用于酿酒酵母S.cerevisia和S.pombe，但能否用于其他酵母(如C.albicans、Pichia pastoris等)不详。
4. 最高转化效率可达到0.2-1×106个转化子/ug质粒DNA。
5. 得到的感受态细胞可以用各种线性或环状酵母穿梭质粒DNA进行转化，例如YIp，YRp，YCp，YEp和YAC等。
6.可以用于酵母双杂交、定点突变、基因破坏、等位突变基因修复等实验。
7. 本试剂盒足够处理200mL酵母菌液，制备40管酵母感受态细胞。

储存条件：常温运输和保存，有效期一年。

自备试剂：
灭菌水，SD液体培养基(不含*基酸的0.67% Bacto Yeast Nitrogen Base，2%葡萄糖)，SD固体培养基(在SD液体培养基中再加2%琼脂)，YPD液体培养基(1% Bacto Yeast Extract，2% Bacto Peptone，2%葡萄糖)，YPD固体培养基(在YPD液体培养基中再加2%琼脂)

使用方法：

一：电感受态细胞的制备
 说明：按本方法制备1 管酵母电感受态细胞就需要OD600达到1.0的新鲜酵母培养液5mL，用户需根据制备的酵母感受态细胞数量决定培养细胞的体积。下面操作只是以10mL酵母为例说明。
1.培养S.pombe细胞：挑取新鲜单菌落(4℃放置不超过3周的也可以)，接种到10mL SD液体培养基中。30℃摇晃培养，摇床速度250rpm/分钟，直到OD600达到1.0左右(相当于1×107细胞/mL)。
2.培养S.cerevisiae细胞：挑取新鲜单菌落(4℃放置不超过3周的也可以)，接种到装在10mL YPD液体培养基中。30℃摇晃培养，摇床速度250rpm/分钟，直到OD600达到1.0左右(相当于1×107细胞/mL)。
3. 冰上放置15分钟。
4.室温1600rpm离心5 min，弃上清。
5. 用冰浴的灭菌水洗涤3次。
6. 用0.2mL冰浴的本产品重悬细胞。
7. 按每管0.1mL分装到1.5-2mL的冷冻管中，直接放入-80℃冰箱待用。
 注意：不能放在液氮中，否则将丧失电转化能力。

二：电转化酵母感受态细胞
1. 将装有0.1mL感受态细胞的冷冻管从冰箱取出的、放置在30℃水浴中快速化冻(快速化冻的效果好于缓慢化冻)。
2. 用1mL冰浴的本产品洗涤一次。
3. 加入50μL冰浴的本产品重悬细胞。
4. 加入1-30 ng质粒DNA 并轻柔混匀。
5.转移到预冷的、距离为0.2cm的电击杯中。
6. 按电击仪的手册设置电击参数并进行电击处理，参考条件为：10kV/cm(对0.2 cm的电击杯，则为2kV)，5ms(25F，200)(各厂家仪器的使用略有不同，请严格按电击仪厂家提供的手册进行操作)。
7.电击后将细胞转移到1mL预冷的本产品中，轻柔混匀。
8. 取0.2mL转化细胞涂盘(S.pombe细胞需涂盘在SD 固体培养基上，S.cerevisiae细胞需涂盘在YPD固体培养基上)，30℃培养4-6天。

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·Cre重组酶
编号：BTN130665
英文名称：Cre Recombinase
规格：50U
Cre重组酶是细菌噬菌体P1的I型拓扑异构酶，催化loxP位点间的DNA进行位点特异性重组。本酶无需能量辅助因子，Cre介导的重组很快在底物与反应产物之间达到平衡。loxP识别元件是一个34bp序列，其两端是两个13bp的反向重复序列，中间是起定向作用的8bp间隔区。重组产物根据 loxP位点的位置和相对方向而不同，两个含单loxP 位点的DNA将被融合。两个正向重复 loxP位点间的DNA将以环状形式切割，而两个反向loxP位点间的DNA序列将被翻转。


产品用途：
➤ 两个loxP位点之间DNA的切割。
➤含loxP位点DNA分子的融合。
➤ loxP位点之间DNA序列的翻转。

产品组成：

 

成分	规格
Cre重组酶，1000 U/mL	50μl
10× Reaction Buffer	1ml
说明书	1份

储存条件：低温运输，-20℃保存，有效期一年。

活性定义：1单位指在50μl反应体系，37℃条件下，30分钟使0.25μg的pLox2+对照DNA产生最大位点特异性重组所需要的酶量。最大重组可以通过琼脂糖凝胶电泳分析或通过反应物转化后行*苄抗性平板筛选。

热灭火：70℃加热10分钟。

使用举例：
1．按下列组份配制反应液：

DNA溶液	-
10×Reaction Buffer	5μl
Cre重组酶	1μl(1U)
超纯水	Up to 50μL

2．37℃孵育30分钟。
3．70℃孵育10分钟，灭活酶活。

注意事项：
1．建议进行琼脂糖凝胶电泳前，将Cre重组酶反应混合物于70℃温育10分钟。
2．由于Cre重组酶反应是一个动态平衡过程，用loxP2+对照底物仅有20-30%发生重组。由于重组产物的量较少，故*化乙锭染色后呈现微弱条带，同时伴有底物染色强度相应减弱。
3．延长温育时间不会提高重组效率，相反，还可能导致大分子量重组产物的生成。
4．反应中增加Cre重组酶量将形成loxP依赖性Cre-DNA复合物，从而抑制重组反应。


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·柱式探针纯化试剂盒
编号：BTN121122
英文名称：Column Probe Purification Kit
规格：10次
本试剂盒是基于分子排阻层析原理的、专门用于纯化同位素和非同位素标记的核酸探针的试剂盒。在分子排阻层析过程中，大分子(标记的核酸探针或Oligo探针)将绕过层析介质，快速穿透出层析柱，小分子(未参入的核苷酸)将进入层析介质中，缓慢穿透出层析柱。根据这一时间差而将两者分开。此过程的示意图如下：


产品特点：
1. 即开即用，提供纯化所需要的所有溶液和介质，不需要单独准备每种试剂，免去用户自己摸索条件。
2.适用于PCR 标记、随机引物标记、切口平移和填入法标记。
3. 能去掉绝大部分的未标记物、盐离子等小分子。
4. 足够10次纯化使用，每次可以纯化50μl的标记反应液。
5.可用于DIG、生物素、Cy3、Cy5等非同位素标记的DNA和RNA探针(由于标记分子带非极性基团，容易进入有机相，因此这些探针不能用传统的酚*仿抽提-乙醇沉淀法纯化)。

试剂盒组成：

成分	规格
Sephadex G50 介质	15ml
0.7mL离心柱及管套	10套
TE溶液	10ml
说明书	1份

储存条件：常温运输及保存，有效期一年。

使用方法：
注意：由于非同位素标记的探针浓度一般都比较低，非常容易吸附到枪头或离心管的表面，造成探针的损失，因此最好使用硅化的离心管和枪头。

1. 摇晃Sephadex G50介质至均匀，迅速转移0.5mL 到离心柱中，套上套管(又叫收集管)。
2. 2000rpm室温离心1分钟，Sephadex G50介质将压紧在柱子里面。
3. 倒掉套管中的穿透液，再加0.5mL的摇晃后得到的Sephadex G50 介质，2000rpm室温离心1分钟。
4. 经上述步骤会得到体积约为0.5mL 压紧后的Sephadex G50介质。如不足，再加入少量的G50介质离心，直到体积达到0.5mL左右。倒掉套管中的穿透液。
5.在柱子中Sephadex G50 界面的上面加入50μl TE缓冲液，套上套管，2000rpm室温离心1分钟，测量收集管中穿透液的体积。
6. 重复上步3-5次，直到收集管中穿透液的体积跟加入的体积一样(50μL)。
7. 将50μl的标记探针(必须使用50μl样品。如果没有50μl，需要用TE缓冲液或水补足到50μl)加到柱子中Sephadex G50 界面的上面，套上一个自备的(最好是硅化的)离心管。
8. 2000rpm室温离心1分钟，离心管中的穿透液将含标记探针，未参入的标记物将滞留在介质中。
9.电泳或点杂交检测探针回收效率后直接使用或放-20℃长期保存。

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