柱式Ti质粒DNA提取试剂盒(国产,进口)

特别声明：本产品及我公司所售其他产品均为科研类试剂产品，严禁用于药物、医疗及其他非科研用途。

百奥莱博专业生产销*(代"售")柱式Ti质粒DNA提取试剂盒(国产,进口)，我公司供应的分子生物学试剂品类齐全，且具有优势价格，欢迎新老客户垂询订购。

名称：柱式Ti质粒DNA提取试剂盒(国产,进口)
编号：BTN130954
规格：50次
品牌：百奥莱博
英文名：Ti plasmid DNA column extraction kit

关于柱式Ti质粒DNA提取试剂盒(国产,进口)的更详细说明，请致电我公司咨询，我们将以最饱满的热情为您提供解答，此外，我公司专业供应下列产品：

·丙*(代"烯")酰胺-甲叉双丙*(代"烯")干粉(29:1)
编号：BTN130968
英文名称：Premixed Acr-Bis Powder
规格：100g
本产品为即用型丙*(代"烯")酰胺-甲叉双丙*(代"烯")酰胺预混干粉(29:1)，用户可直接加入去离子水溶解即可得到丙*(代"烯")酰胺溶液，用于配制各种PAGE胶，如SDS-PAGE，Tricine-SDS-PAGE等。使用方便，避免了用户直接接触有毒的丙*(代"烯")酰胺和甲叉双丙*(代"烯")酰胺。

储存条件：常温运输及避光干燥保存，有效期一年。

·蜗牛酶干粉
编号：BTN100917
英文名称：Snail enzyme,powder
规格：5g
本品是从蜗牛(Helix pomatia)的嗦囊和消化道中制备的混合酶，它含有β-glucoronidase、endo-β-glucanase、arylsulphatase、纤维素酶，果胶酶，淀粉酶，蛋白酶等20多种酶，呈褐色结晶粉末。可以用于真菌细胞核酸和蛋白质制备、原生质球制备等。

储存条件：低温运输，4℃保存，有效期一年。

使用方法：(处理酵母细胞举例)
1.配制山梨醇缓冲液(10mL)：1.82g山梨醇、0.042g柠檬酸*，用10mL pH5.8的磷酸*缓冲液溶解，涡旋震荡混匀，超净台中，滤器过滤除菌。
2.取5mL 山梨醇缓冲液加入到装有1g蜗牛酶的棕色瓶中，轻轻摇动混匀，务必使蜗牛酶完全溶解，使用之前用枪头挑一下瓶底，看是否有未溶解的酶，若有沉淀，则继续摇动或用枪头吹吸，使其溶解，得到的溶液为浓度是200mg/mL的蜗牛酶溶液。
3.取3-5mL酵母细胞，200μL无菌水洗涤菌体(吹吸重悬)，室温10000rpm离心1min，弃上清。重复洗涤2-3次。
4.将酵母细胞重悬于300-500μL巯基化合物中，32℃水浴15-30min。期间轻轻颠倒离心管两三次。
5.室温10000rpm离心1min，弃上清。将沉淀重悬浮于500μl山梨醇缓冲液中。
6.按照每克细胞30-40mg蜗牛酶的比例，加适量体积的第2步配制的蜗牛酶溶液到酵母细胞溶液中，37℃保温1小时。(破壁率一般达90%以上。)
7.4℃保存或直接用于核酸、蛋白质提取制备。

附：巯基化合物配制方法
巯基化合物(0.04M EDTA和0.14M β-巯基乙醇)(30mL)：

 

试剂	剂量
0.5M EDTA	2.4ml
巯基乙醇(分析纯ρ=1.11439g/mL)	294μl
无菌水	27.3ml

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·博莱霉素溶液
编号：BTN120704
英文名称：Bleomycin Solution
规格：1mL
本产品浓度为100mg/mL博莱霉素的水溶液。博莱霉素(争光霉素；Bleocin ；Zeocin)，分子式：C55H83N19O21S2Cu，分子量：1137.41，外观为绿色液体。博来霉素为弱碱性物质。易溶于水、甲醇，微溶于乙醇，是一种属于争光霉素家族的糖蛋白抗生素，在体内能作用于大多数细菌(包括E. coli)、真菌(如：酵母菌)、植物细、动物细胞。

储存条件：低温运输，-20℃避光保存，有效期一年。

·DNA Shuffling试剂盒
编号：BTN131178
英文名称：DNA Shuffling Kit
规格：10次
DNA Shuffling即DNA分子的体外同源重组，它是一种分子水平上的定向进化(directed evolution)技术，它以一个或多个基因为起始材料，通过先随机断裂成小片段，再进行互为模板和引物的PCR(无外加引物)，最后再进行常规PCR(外加引物)等处理，最后得到含有大量DNA重组突变的PCR产物。其原理示意图如下：


产品特点：
1.即开即用，用户只需要提供样品DNA模板，无需单独准备各成分。
2.操作手册经过优化，1-2天即可完成，节省大量优化时间。
3.本产品只适用于科研，不能用于临床诊断。

试剂盒组成：

成分	规格
PCR Mix 3.0，2×	1.5mL
DNase I溶液(1U/μL)	10μl
溶液A，10×	60μl
溶液B，10×	60μl
超纯水	1mL
说明书	1份

储存条件：低温运输，-20℃保存，保存期限一年。

使用方法：
1.待突变基因片段的制备：待突变基因片段可以用含此基因的质粒为模板、用PCR法或酶切法制备。制备时需保证含此基因(或此基因的一部分)的DNA片段总长度不要超过1kb，同时比DNA shuffling终产物(第二轮PCR产物)长200-400bp。每次DNA Shuffling实验至少需要2μg起始DNA片段(如果含几个基因片段，则彼此的比例为1:1)，并且必须通过胶回收的方法回收，以便彻底去除残留的质粒模板、引物和非特异扩增产物等。最后需用分光光度法准确定量。
2.提前准备37℃和75℃水浴，同时新鲜配制0.1U/μL的DNase工作液放冰上待用(必须在用时才配制，方法是将1μl 本试剂盒提供的1U/μL的DNase I溶液和1μl溶液A和8μl超纯水混合)。此溶液需在24小时内使用。
3.在一个离心管中，按顺序加入下列成分：

成分	用量
待突变基因片段(第1步制备)	2μg
溶液A	5μl
溶液B	5μL
DNase I工作液(第2步制备)	2μL
超纯水	36μL

4.充分轻柔吹打混匀后37℃水浴8分钟，然后立即放75℃水浴处理10分钟以灭活DNase I。
5.在2-3%琼脂糖凝胶上电泳，用常规的胶回收法回收25-150bp范围的所有片段待用。注意：一定要加合适的DNA marker以便确定片段范围，最好使用本公司生产的绿如蓝核酸染料(可见光型)作为电泳染料以避免用UV照射DNA，否则UV使DNA发生的交联将极大降低后续扩增效果。
6.分光光度法精确测定回收片段的浓度。
7.在PCR管中按顺序加入0.5μg上步回收得到的回收片段、50μl 2×PCR Mix、加超纯水到100μl。
8.按下面的PCR反应参数进行第一轮无引物PCR：

过程	温度	时间
PCR前变性	94℃	150s
PCR反应(40循环)	94℃	30s
	47.5℃	45s
	72℃	10s，每次循环后增加5s
PCR后延伸	72℃	10min

9.取5-10μl进行电泳检测，然后进行PCR回收，得到第一轮PCR产物。
10.将回收的第一轮PCR产物1μl原液作为模板设置3管第二轮PCR反应。

成分	用量
回收的第一轮PCR产物	1μL
PCR Mix 3.0，2×	50μL
自备DNA Shuffling引物	各1μM
超纯水	加水到100μL

11.按下列PCR参数进行第二轮PCR。

过程	温度	时间
活化	94℃	150s
PCR反应(25次循环)	94℃	30s
	47.5℃	45s
	72℃	60s，每次循环后增加5s
PCR后延伸	72℃	10min

12.电泳检测，回收预期大小的PCR产物，用于后续的构建克隆文库实验(略)。

疑难解答：
Q：易错PCR和DNA Shuffling有何区别？
A：前者引入的是点突变，后者引入的是重组突变。示意图如下：



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ARB10548 人皮质醇(CortIsol)ELISA代测服务 Human cortisol ELISA KIT
*氧化铝 Citric acid 21645-51-2
ARB13620 兔子促肾上腺皮质激素(ACTH)Elisa方法检测 Rabbit adrencocorticotropic hormone,acth ELISA KIT
ARB12747 小鼠CA-ATP酶elisa检测操作说明书 Mouse ca-atp ELISA KIT
BL0277 琼脂糖凝胶FF DEAE Sepharose Fast Flow
焦磷酸铜 2′-Da 10102-90-6
硫*(代"酸")镧(III) 水合物 Isomalto-oligosaccharide 57804-25-8
F020108 山羊抗乙肝表面抗原抗体 Polyclonal Goat Anti-HBsAg
组织胍溶液(5mol/L,RNase free)   100ml
BTN130640 核酸内切酶V Endonuclease V
64485-93-4 噻孢霉素 Cefotaxime,Sodium Salt
乐氏液   500ml
PY01-170  甲基紫  BS  25克  
N,N"-二琥珀酰亚胺基碳酸酯 Penicillin V potassiu*(代"m") salt 74124-79-1

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