BTN130949型革兰氏阳性菌DNA提取试剂盒(百万碱基级

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名称：BTN130949型革兰氏阳性菌DNA提取试剂盒(百万碱基级)价格厂家
品牌：百奥莱博
英文名：Gram positive bacteria DNA extraction kit(millions of base)
编号：BTN130949
产地：国产|进口
规格：10次

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BL0936 生物素化羊抗人IgG抗体
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ARB10621 人血栓素B2(TXB2)代做ELISA实验 Human thromboxane b2,tx-b2 ELISA KIT
ARB13127 小鼠促性腺激素释放激素(GnRH)定量分析 Mouse gonadotropin-releasing hormone,gnrh ELISA KIT
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免疫染色洗涤液   500ml
D-谷*酰胺 L-Cystathionine 5959-95-5
HC0217 尼龙细胞塞网
NF-229 羊抗牛IgG血清
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ZCSXQ01 鼠血清 100ml
F030309 胶体金标记羊抗乙肝e抗原抗体 Polyclonal Goat Anti-HBeAg*GOLD
BL0937 生物素化羊抗人IgM抗体
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·5´RACE试剂盒
编号：BTN101105
英文名称：5´-RACE Kit
规格：10次
研究真核基因的最基础的工作之一就是确定其转录终止位点，目前最通用的方法是5´-RACE法，RACE(Rapid Amplification of cDNA Ends)是Frohman发明的、通过PCR快速克隆cDNA末端的技术，它在不建立cDNA文库的前提下，利用已知cDNA序列设计引物，通过往两端延伸和扩增获得其5´-端序列。本试剂盒就是根据5´-RACE原理而开发。RACE的原理如下图：


产品特点：
1. 即开即用，客户不需要单独准备各种材料。
2.反应条件经过精心优化，包括使用无RNase H活性的MMLV和优化的引物。

试剂盒组成：

 

成分	规格
MMLV逆转录酶-RI混合液(RNase H-，200U/μL)	10μl
MMLV Buffer-dNTP混合液	60μl
微量核酸沉淀剂	400μl
TdT(末端转移酶)	10μl
2×TdT Buffer(含dATP)	100μl
PCR MagicMix 3.0	1.5ml
5´-RACE引物A-引物B混合液	100μl
5´-RACE引物C	100μl
RNase-Free水	1ml

储存条件：低温运输、-20℃保存、有效期一年。

使用方法：

1.变性模板RNA：将1μg mRNA或5μg总RNA加入到一个RNase-free的PCR管中，补RNase-Free水到9μL，65℃保温5分钟后短暂离心，立即放冰上待用。如果RNA浓度偏低，体积超过9μl,可以使用本公司的核酸浓缩剂(需另购,产品编号为BTN110801)浓缩到所需的体积。
2. 设置RT反应(用户可以根据需要设阴性对照)：在上步的含变性后的RNA模板的PCR管中，按顺序加入：

成分	用量
自备的基因专一性引物A(10μM)	4μl
MMLV Buffer-dNTP混合液	6μl
MMLV逆转录酶-RI混合液	1μl
合计	20μl

3. 37℃保温60分钟，42℃保温30分钟，50℃保温10分钟，最后75℃保温10分钟使逆转录酶变性。
4. 短暂离心5秒后待用。
5.在PCR管中加入40μl微量核酸沉淀剂(本产品含不溶的核酸助沉剂，用前需要充分摇匀再取用)，震荡混匀。
6.室温12000rpm离心15分钟，小心吸弃上清。
7. 加入1mL自备75%乙醇，室温12000rpm离心5分钟，小心吸弃上清。
8. 短暂离心数秒，小心吸弃残留液体后，稍微晾干后加入10μL RNase-free水，充分吹打溶解，得到cDNA溶液。注意：为保证加尾效率，溶解cDNA的RNase-free水最好不要超过10μl。
9. 加尾反应：在10μL cDNA溶液中加10μL 2×TdT Buffer(含dATP)和1μL TdT酶，轻柔吹打混匀。
10. 37℃保温15分钟进行加尾反应，然后75℃保温3分钟灭活末端转移酶。
11. 加入0.5mL RNase-free水稀释加尾反应体系。此稀释液将作为PCR的模板。
12. 第一轮PCR：用不同量的稀释后的加尾反应液设置PCR反应(样品组最好设用量梯度，单位：μL)。

成分	梯度1	梯度2	梯度3	梯度4
PCR MagicMix 3.0	25	25	25	25
自备基因专一性引物B(10μM)	2.5	2.5	2.5	2.5
5´RACE引物 A-引物B混合液	2.5	2.5	2.5	2.5
稀释后的加尾反应液	1	5	10	15
RNase-free 水	19	15	10	5
合计	50	50	50	50

13. 按下列条件进行 PCR(注：应根据实际情况选择适当的退火温度)。
 第1次循环：94℃ 5分，48-52℃ 2分，72℃ 4分
 第2-30次循环：94℃ 40秒，52-60℃ 1分，72℃ 3分
 最后延伸：72℃ 15分
14. 取10-20μL PCR产物进行琼脂糖电泳电泳检查PCR结果，如果一条清晰的条带，则可以不做后续的第二轮PCR，而直接进行 DNA 测序或TA克隆。
15. 第二轮PCR：如果第一轮PCR没有一条清晰的条，则带从4管PCR产物中各取1μL分别加入到20μL RNase-free水中进行稀释，然后各取1μL分别作为4管第二轮PCR的模板：

成分	用量
第一轮 PCR产物的稀释液	1μl
PCR MagicMix 3.0	25μl
5´RACE引物 C	2.5μl
自备基因专一性引物 C(10μm)	2.5μl
RNase-free 水	补水至50μl
合计	50μl

16. 按下列条件进行 PCR：第 1-30次循环(94℃ 40秒，52-60℃ 1 分，72℃ 3分)，最后延伸：72℃ 15分
17. 取10-20μL第二轮 PCR产物进行琼脂糖电泳，一般都会有一个样品有清晰的条带出现，则可以直接进行DNA测序或TA克隆。


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·大提柱式Ti质粒DNA提取试剂盒
编号：BTN130955
英文名称：Mass-Ti plasmid DNA column extraction kit
规格：5次

·柱式DNA污染清除剂(大处理量)
编号：BTN90802
英文名称：Maxi Column DNA Scavenger
规格：5次
本品是柱式DNA清除剂(BTN90318)的大提升级产品，可用于细胞总RNA样品中基因组DNA污染的去除。目前最常用的RNase-free DNase处理方法因DNase中所含残留的RNase能破坏RNA完整性而具有很大缺陷。本公司开发的大提柱式非酶DNA清除剂不但彻底避免了RNase-free DNase的这一缺陷，同时还具有下列特点。

产品特点：
1.处理量大，一次可以处理高达400μg的总RNA。
2. 操作简单快速，全部操作只需要十余分钟。
3. 回收率高达80%以上。
4.高效，能使总RNA中的基因组DNA污染降低到电泳检测不到的水平，而 RNA分子完整性不受任何影响。
5. 本身不含RNase污染，避免了用DNase处理的最大问题。
6. 稳定，本产品为非酶产品，可以常温运输和4℃长期保存；而RNase-free DNase的运输和长期保存必须在低温进行。
7. 性价比高，单位成本远低于RNase-free DNase。

产品组成：

成分	规格
溶液A	5ml
溶液B	100ml
大提离心吸附柱	5套
通用洗柱液	100ml
RNA洗脱液	5ml
说明书	1份

储存条件：常温运输、除溶液A 需要 4℃保存外其余均可室温保存、有效期一年。

使用方法：
1. 将1mL 总 RNA溶液与1mL溶液A 加入一个自备的30-50mL塑料离 心管中，并充分震荡 1分钟。注意：RNA溶液中盐(如*离子)的浓度 不能高于0.2 M，如果 RNA溶液的量不足 1mL，最好加自备的无 RNase 水补足到 1mL以便后续操作。
2. 加入9倍体积(即 18mL)的溶液B，颠倒数次充分混匀。注意：溶液B在 4℃放置后可能会产生沉淀，用前需检查，如果确实有沉淀，必须放在 65℃水浴使沉淀彻底溶解并充分摇匀后再取用。
3. 将混合液转移到离心吸附柱中，室温 5000-7000rpm离心一分钟，弃穿透液。
4. 加 10mL 通用洗柱液到离心吸附柱中，室温 5000-7000rpm离心一分钟，弃穿透液。
5.一次洗涤一般足够去除杂质。如果有必要，可以再加 10mL 通用洗柱液 到离心吸附柱中，室温 5000-7000rpm离心一分钟，弃穿透液。一般 情况，此步可以省略。
6.室温 5000-7000rpm离心一分钟。此步十分重要，否则残留的通用洗 柱液会影响 RNA的使用。
7. 将离心吸附柱转移到一个新的自备的50mL塑料离心管中，加入0.5mL RNA 洗脱液，室温放置 1-2分钟。室温 5000-7000rpm离心一分钟，离心管中溶液即为RNA样品。
8. 由于离心吸附柱吸附能力强，还有大量 RNA 吸附在柱上，所以还需要加 入0.5mL RNA 洗脱液，室温放置 1-2分钟。室温 5000-7000rpm离 心一分钟。
9. 两次收集的1mL RNA样品，可以立即使用，也可以存放于-80℃待用。

疑难解答：
Q：能否用本产品对同一样品进行反复处理？
A：可以。
Q：本产品跟 DNA Scavenger-2有何区别？
A：本产品为柱式升级产品，比 DNA Scavenger-2 更快速清除 RNA样品中的DNA污染。

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