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文献和实验冰冻切片免疫组织化学染色 1.新鲜组织或在-80℃保存的组织用恒冷箱冰冻切片机切片,厚度为10~40gm; 2.将切片裱于载玻片上,立即用电吹风吹干或室温放置30分钟,如不能及时染色,密封后一20℃保存; 3.染色前组织切片用冷丙酮4℃固定10―20分钟,PBS洗2次,每次5分钟; 4。必要时应用0.1%枸橼酸钠与0.1%Triton X―100的混合液将细胞膜打孔。 其余步骤同石蜡切片。SABC法染色,DAB显色大鼠小肠腺细胞核呈棕色为BrdU免疫
内保存。2)染色程序:①新鲜组织恒冷箱切片(可用10%福尔马林固定10分钟,或不固定);②人孵育液,37C~孵育10分钟(肾)至 60分钟(肝);③流水冲洗;分钟;④人2%硝酸钴溶液2分钟;⑤蒸馏水浸洗;⑥人1%硫化铵溶液内1分钟;⑦蒸馏水洗;⑧甘油明胶封固。3)结果与评价:酶活性部位显示棕黑色为硫化钴沉淀。该法的反应产物可发生扩散,定位欠准确,应加以注意。4)对照实验:加入抑制剂L四咪唑等结果为阴性;去底物(孵育液中用10ml蒸馏水代替底物)结果为阴性。 碱性磷酸酶钙-钴染色大鼠小肠绒毛吸收细胞呈
地鼠肾BS-C-1 非注洲绿猴肾C2C12 小鼠成肌细胞C3H 10T1/2 2A6 小鼠成纤维细胞CHOdhfr 二氢叶酸缺陷型中国仓鼠卵巢细胞CHO-K1 中国仓鼠卵巢细胞COS-1 非洲绿肾COS-7 非洲绿猴肾细胞 CV-1 猴肾细胞 FDC-P1 小鼠正常骨髓细胞 IAR20 小鼠肝细胞 IEC-6 大鼠小肠隐窝上皮细胞 LL-PK1 猪肾细胞 MC3T3-E1 小鼠胚胎成骨细胞 MDCK 狗肾细胞 MEF 小鼠
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