人牙髓间充质干细胞成骨诱导分化培养试剂盒

人牙髓间充质干细胞成骨诱导分化培养试剂盒
不同来源间充质干细胞的应用
干细胞是一类具有自我复制和多向分化能力的细胞，可不断自我更新，是形成机体各种组织器官的始祖细胞。干细胞家族中有一个重要的成员——间充质干细胞，它存在于脐带、脐带血、脂肪等组织中，目前已应用于膝关节软骨修复的临床研究中，也就是说，运动人士可像存钱一样把三种组织中任意一种的间充质干细胞储存在“生命银行”的深低温环境中，在将来膝关节软骨受损时随取随用。
脐带血间充质干细胞
脐带血间充质干细胞(UCB-MSCs)是从新生儿脐带血中分离获得的一种多功能干细胞，近年来，有研究利用UCB-MSCs 和透明质酸复合水凝胶材料修复膝关节软骨全层缺损， 已在大鼠模型中取得显著成果。
脐带间充质干细胞
脐带间充质干细胞(UC-MSCs)是存在于新生儿脐带华通氏胶和血管周围组织中的一种间充质干细胞。因其取材方便，无道德伦理争议，可获取的细胞数量多、增殖能力强、免疫调节作用大，分泌细胞生长因子的总量也非常高，便于扩增和传代，同时又没有配型、排异等问题，极其适合用于临床研究和应用。
脂肪间充质干细胞
脂肪组织是成人获取间充质干细胞的一个重要来源，脂肪干细胞(AD-MSCs) 经分离后能稳定扩增， 并因其多向分化潜能对膝关节软骨临床修复有重要的意义。
如何选择间充质干细胞培养基呢？
随着各种间充质干细胞研究的深入，间充质干细胞培养基已经成为干细胞研究的必备品。间充质干细胞培养基品质的好坏直接影响细胞的状态以及实验的成败。
主要特性：
间充质干细胞(MSCs)是属于中胚层的一类多能干细胞，主要存在于结缔组织和器官间质中，以骨髓组织中含量最为丰富，由于骨髓是其主要来源，因此统称为骨髓间充质干细胞。骨髓间充质干细胞具有以下特性：
一、具有强大的增殖能力和多向分化潜能，在适宜的体内或体外环境下具有分化为肌细胞、肝细胞、成骨细胞、脂肪细胞、软骨细胞、基质细胞等多种细胞的能力。
二、具有免疫调节功能，通过细胞间的相互作用及产生细胞因子抑制T细胞的增殖及其免疫反应 ，从而发挥免疫重建的功能。
三、具有来源方便，易于分离、培养、扩增和纯化，多次传代扩增后仍具有干细胞特性，不存在免疫排斥的特性。
四、面目模糊，表面抗原不明显，异体移植排异较轻，配型要求不严格。
正是由于间充质干细胞所具备的这些免疫学特性，使其在血液病治疗方面具有广阔的临床应用前景。通过自体移植可以重建组织器官的结构和功能，并且可避免免疫排斥反应。
人牙髓间充质干细胞成骨诱导分化培养试剂盒

规格：    kit
一、 产品基本信息
名称：人牙髓间充质干细胞成骨诱导分化培养试剂盒。
产品编号：K-06-005

二、产品简介
本产品由康朗干细胞科技股份有限公司技术中心研发团队潜心研发优化的人牙髓间充质干细胞成骨诱导分化培养试剂盒。包括间充质干细胞成骨分化基础培养基、人牙髓间充质干细胞成骨诱导分化试剂盒和茜素红染色液。 本产品仅用于科研，不可用于临床治疗、诊断及其他用途。

三、主要组成成分包括
间充质干细胞成骨分化基础培养基 110mL 4℃
人牙髓间充质干细胞成骨分化试剂盒 试剂A：1.25mL；试剂B：1.25mL；试剂C：12.5uL；试剂D：12.5mL。 -20℃
茜素红染色液 10mL RT

四、使用说明
1、配液前30min左右，人牙髓间充质干细胞成骨分化试剂盒中试剂A、试剂B、试剂C和试剂D预先放置室温溶解，可短暂离心（2000g），以确保试剂能全部收集。
2、于超净台内无菌环境打开间充质干细胞基础培养基和四种试剂的瓶/管盖。
3、将试剂A、试剂B、试剂和试剂D全部加入间充质干细胞成骨分化基础培养基中。可吸取少量基础培养基洗涤各试剂管，以确保四种试剂完全加入。
4、充分混匀后即可使用。
注：本试剂盒中的每个成分均为无菌分装，但为确保完全无菌，也可以将混合后的完全培养基进行再次过滤除菌（0.22 μm滤膜）。

五、产品稳定性及保存条件
1、间充质干细胞成骨分化基础培养基置于2-8℃保存，保质期为1年；
人牙髓间充质干细胞成骨分化试剂盒置于-20℃保存，保质期为2年；
完全培养基配制好后于2-8℃保存，保质期为1个月。
茜素红染色液置于室温保存，保质期为2年。
2、保质期内使用。
3、避免反复冻融相关产品。

六、质量控制
人牙髓间充质干细胞成骨分化培养基已使用人牙髓间充质干细胞进行性能测试。
主要的鉴定标准包括：
1、无菌检测（细菌、真菌和支原体检测）
2、内毒素检测
3、渗透压检测
4、pH测试

七、产品使用示例
（以六孔板为例）实验操作流程：
1、人牙髓间充质干细胞置于37℃，5% CO2的培养箱中常规培养。
2、当细胞融合度达到80-90%时，用0.25%Trypsin-0.04%EDTA进行消化。
3、将消化下来的人牙髓间充质干细胞按照1×104 cells/cm2 的细胞密度接种在六孔板中，每孔加入2 mL完全培养基。
4、将细胞置于37℃，5% CO2的培养箱中进行培养。
5、当细胞融合度达到60%-70%时，小心吸弃旧培养基，加入2 mL配制好的人牙髓间充质干细胞成骨分化完全培养基。
6、每隔3天换用新鲜的人牙髓间充质干细胞成骨分化完全培养基（诱导分化两周后可改为每隔2天换液一次）。
7. 诱导3周左右，观察细胞的形态变化及生长情况，用茜素红进行染色。
注：为了避免诱导过程中间质干细胞出现漂浮现象，建议对成骨诱导使用的培养器皿表面进行明胶包被。

八、操作步骤
1、细胞接种60min前，加适量0.1%明胶到培养器皿中，能覆盖整个培养器皿底面的量即可。
2、将铺有0.1%明胶的培养器皿放置培养箱内。
3、60min后弃去明胶，待培养器皿晾干后，即可用于接种细胞。

九、茜素红染色步骤
1、吸弃六孔板中的培养基,1×PBS冲洗2-3次。每孔加入2 mL 4%多聚甲醛溶液，固定15-20 min。
2、吸弃4%多聚甲醛溶液,1×PBS冲洗3-4次。每孔中加入1 mL茜素红染液染10-15 min。
3、吸弃茜素红染液,1×PBS冲洗2-3次。
4、 于显微镜下观察成骨染色效果。