- ￥2155 - 3855
- 翌圣生物（Yeasen）
- 41201ES
- 上海
- 2025年10月14日
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- 详细信息
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- 文献和实验
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- 英文名：
Hieff Quick exosome isolation kit(for Cell Culture Media)
- 保质期：
有效期2年
- 供应商：
翌圣生物科技(上海)股份有限公司
- 保存条件：
常温
- 规格：
25mL(41201ES25)/50mL(41201ES50)
| 规格： | 25mL(41201ES25) | 产品价格： | ￥2155.00 |
|---|---|---|---|
| 规格： | 50mL(41201ES50) | 产品价格： | ￥3855.00 |
产品信息
细胞培养上清外泌体快速抽提试剂盒采用独特的分离技术，可以快速从细胞培养上清中获得大量完整的外泌体颗粒，适用于下游的细胞共培养、电镜分析、Western Blot、荧光定量（qPCR）和高通量测序等应用。
产品描述
Exosome（外泌体）是由活细胞分泌的直径约为30-150 nm的小囊泡，具有典型的脂质双分子层结构；存在于细胞培养上清液、血清、血浆、唾液、尿液、羊水以及其它生物体液中；Exosome携带有多种蛋白质、脂类、DNA和RNA等重要信息，不仅在细胞与细胞间的物质和信息传递中起重要作用，更有望成为多种疾病的早期诊断标志物。
产品组分
| 编号 | 组分 | 产品编号/规格 | |
| 41201ES25 | 41201ES50 | ||
| 41201-A | Exosome isolation solution（ Cell Culture Media） | 25 mL | 50 mL |
运输和保存方法
室温运输，本试剂盒可于室温稳定保存24个月。
注意事项
1）为了确保获得的外泌体是来自于您的细胞，最好使用无外泌体的血清进行培养。
2）如果想要进一步纯化外泌体，可以使用相应抗体包被的磁珠进行亲和纯化。
3）产品只针对细胞培养上清来源的外泌体分离，不适用血清/血浆中外泌体的抽提，如果需要进行血清/血浆的外泌体分离，请选用血清/血浆外泌体快速抽提试剂盒。
4）为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
操作方法
样品制备：
收集细胞培养基至15 mL离心管中，3000×g，离心10 min；小心收集上清，并转移至新的离心管中（勿破坏沉淀），于冰上放置待用。
【注】若收集的细胞上清不能及时使用，可先放置于-20℃或-80℃冷冻。使用时，于25℃水浴锅中解冻，完全溶解后置于冰上待用。
外泌体分离：
1）试剂准备：使用前请将外泌体抽提试剂充分混匀。
2）上清预处理：吸取10 mL的细胞培养上清，加入2.5 mL外泌体抽提试剂（41201-A），涡旋振荡混匀1 min，再放置于2℃至8℃静置2h；
| 细胞培养上清 | 外泌体抽提试剂 | 用途 |
| 10 mL | 2.5 mL | 电镜、NTA粒径、Western Blot |
| 40 mL | 10 mL | 多基因核酸分析（qPCR）、测序 |
【注】上述用量的推荐，仅针对外泌体分泌量高的肿瘤细胞，对于外泌体分泌量少的样品（例如干细胞）可以适当加大上清的用量。其它规格的细胞上清可以根据外泌体抽提试剂的用量进行等比例换算。
3）外泌体沉淀：取出装有混合液的离心管于4℃，10000×g离心60 min，弃上清，收集沉淀（尽可能吸尽上清）。
4）外泌体重悬：取100 μL 1×PBS均匀吹打离心沉淀物，使其充分混匀，并转移至新的1.5 mL离心管中；
【注】外泌体颗粒会附着在管壁上，重悬时可以使用PBS对管壁进行反复吹打洗脱（避免剧烈吹打）。重悬用的PBS的量可以根据细胞上清的量进行等比例增加，也可以根据可能获得的外泌体的量进行适当的增加或者减少。
5）外泌体的洗涤：将含有外泌体的1.5mL离心管于4℃，12000×g离心2 min，弃沉淀，保留上清液。
6）外泌体的保存：纯化后的外泌体可于4℃保存3天，-80℃ 长期保存，避免反复冻融。
外泌体浓缩（可选）：
如果获得的外泌体浓度比较低，可以使用密理博3kD孔径的超滤管于4℃，14000×g离心10-30 min，内管中即为纯化后的外泌体颗粒。
外泌体除菌（可选）：
获得的外泌体后期需要与细胞共培养，可以使用0.22 μm的滤器进行过滤除菌。初次尝试时，建议外泌体蛋白浓度在10-100 μg/mL内做梯度摸索，选择一个较为合适的条件。
结果展示：
| NTA粒径检测：结果显示通过Yeasen外泌体抽提获得的外泌体分散性好，大小均一，峰形单一。 | |
    | 样品来源：293T细胞培养上清。 检测仪器：ZetaView 上清用量：10 mL |
| 表面标志物分析：通过Western Blot分析外泌体表面蛋白，可以很好的检测到TSG101，CD63和MHCC的存在。 | |
 | 样品来源：293T细胞培养上清。 裂解方式：RIPA裂解液 上清用量：10 mL |
| 核酸分析：通过Agilent 4200分析，可以检测到较为明显的外泌体小RNA条带，足以满足下游高通量测序的需求。 | |
 | 样品来源：293T细胞培养上清。 检测仪器：Agilent 4200 抽提方法：Trizol 上清用量：40 mL |
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| 货号 | 名称 | 规格 | |
| 外泌体分离 | 41202ES30 | HieffTM Quick exosome isolation kit（ for Serum/Plasma） 血清/血浆外泌体快速抽提试剂盒 | 30 mL |
| 外泌体定量 | 20118ES60 | Lysis Buffer for WB/IP Assays 免疫印迹及免疫沉淀用（WB/IP）裂解液 | 100 mL |
| 20201ES76 | BCA Protein Quantification Kit BCA 蛋白浓度测定试剂盒（增强型） | 500 T(100 mL) | |
| 外泌体鉴定 （Western Blot） | 36230ES10 | Precast Protein Improve Gels, 8%-20%, 10 wells 8%-20%高分辨率梯度预制胶,10孔 | 1盒（10块） |
| 36231ES10 | Precast Protein Improve Gels,,4%-20%, 10 wells 4%-20%高分辨率梯度预制胶,10孔 | 1盒（10块） | |
| 36232ES10 | Precast Protein Improve Gels,, 8%, 10 wells 8% 高分辨率梯度预制胶,10孔 | 1盒（10块） | |
| 36233ES10 | Precast Protein Improve Gels,, 10%, 10 wells 10%高分辨率梯度预制胶,10孔 | 1盒（10块） | |
| 36234ES10 | Precast Protein Improve Gels,, 12%, 10 wells 12%高分辨率梯度预制胶,10孔 | 1盒（10块） | |
| 36235ES10 | Precast Protein Improve Gels,, 15%, 10 wells 15%高分辨率梯度预制胶,10孔 | 1盒（10块） | |
| 20351ES76 | GoldBand 3-color Regular Range Protein Marker（10-180 kDa）三色预染蛋白质分子量标准 | 2×250 μL | |
| 20352ES76 | GoldBand 3-color High Range Protein Marker（10-245kDa） 三色预染蛋白质分子量标准 | 2×250 μL | |
| 外泌体标记 | 40726ES10 | DiI (DiIC18(3)) 细胞膜橙红色荧光探针 | 10 mg |
| 40757ES25 | DiR Iodide (DiIC18(7)) 细胞膜深红色荧光探针 | 25 mg |
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文献和实验[1] Li Z, Qin X, Bian W, et al. Exosomal lncRNA ZFAS1 regulates esophageal squamous cell carcinoma cell proliferation, invasion, migration and apoptosis via microRNA-124/STAT3 axis. J Exp Clin Cancer Res. 2019;38(1):477. Published 2019 Nov 27. doi:10.1186/s13046-019-1473-8(IF:11.161)
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了外泌体中的脂质、RNA 和蛋白质，还有微囊泡、凋亡小体等囊泡类型的信息。 ExoCarta（http://exocarta.org/index.html）数据库主要收录了包括人、大鼠、小鼠、绵羊、豚鼠、果蝇、马、穴兔、牛在内的几个物种的 286 个研究结果，含蛋白质、mRNA、miRNA 和脂质等信息。 三、如何获得外泌体样本及预处理？ 外泌体广泛存在于细胞培养上清以及各种体液中，包括血液、淋巴液、唾液、尿液、精液、乳汁等。不同的样本来源，预处理及注意细节均不同，下面
分化、肿瘤侵袭、促血管新生等生理过程，与多种疾病的发生和进程密切相关。 由于外泌体的特殊结构和功能，使得它具有潜在的应用价值，一方面可以作为诊断多种疾病的生物指标，另一方面也可以作为治疗手段，未来有可能作为药物的天然载体用于临床治疗。 三、如何分离外泌体？ 外泌体的样本来源主要有细胞培养上清、血清/血浆、尿液、腹水、乳汁、脑脊液、唾液、滑液等，其中细胞培养上清、血清/血浆、尿液是最常见的来源。如果是使用细胞培养上清，要注意细胞培养中一定不能添加 FBS
-GlyTCC-5、tRNA-ValAAC-5 和 tRNA-GluCTC-5)的水平显著升高，这表明血浆外泌体tsRNA可以作为一种新的诊断生物标志物。 图四 细胞培养上清外泌体的 tsRNAs 谱 图五 血浆外泌体的 tsRNAs 谱 三、以外泌体蛋白为标志物： Raghu Kalluri 教授与他的研究团队发表研究论文[3]，阐明胰腺癌患者血清中外泌体表达了一种特殊的蛋白 glypican-1 (GPC1)，而在健康人和胰腺其他疾病血清外泌体中没有检测到 GPC
