蛋白酶抑制剂混合物(100×) 蛋白质研究

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名称：蛋白酶抑制剂混合物(100×) 蛋白质研究
编号：RFT194
产地：国产|进口
英文名：Protease inhibitor cocktail
规格：1ml|5×1ml
本品是一种通用型用于细胞或组织蛋白提取等的蛋白酶抑制剂混合物(200mMAEBSF, 30μM Aprotinin, 1 mMBestatin,1.4mME64 and 1mMLeupeptin in DMSO)，并提供独立包装的0.1MEDTA。EDTA为单独包装，以便选择性使用。如用于检测金属蛋白酶活性，则不宜添加EDTA。一个包装的本产品通常足够用于100ml裂解液的配制。

细胞或组织提取物等样品中含有许多内源性的蛋白酶、磷酸酶等，容易导致提取物中的蛋白降解或去修饰，从而影响后续的蛋白检测。因此在提取物等样品中添加适当的蛋白酶、磷酸酶等抑制剂是防止蛋白降解和去修饰的有效方法。

本产品为经优化和测试的用于常规细胞或组织蛋白提取等的蛋白酶抑制剂混合物，包含了广谱的丝*酸、半胱*酸和酸性蛋白酶抑制剂以及*基肽酶抑制剂。

本产品使用便捷，通常以1:100的比例分别把蛋白酶抑制剂混合物(通用型, 100×)和0.1MEDTA(100×)加入裂解液中，即可用于常规的细胞或组织蛋白的提取，并有效抑制蛋白降解。

本产品可以有效抑制常规细胞或组织提取物中的各种蛋白酶活性，如丝*酸蛋白酶、*基肽酶、半胱*酸蛋白酶、苏*酸和天冬*酸蛋白酶、金属蛋白酶等。其中AEBSF是一种水溶性的丝*酸蛋白酶不可逆抑制剂，其抑制常数与PMSF和DFP的抑制常数相似，可以有效抑制胰蛋白酶(trypsin)、糜蛋白酶(chymotrypsin)、纤溶酶(plasmin)、激肽释放酶(kallikrein)和凝血酶(thrombin)等蛋白酶，作为PMSF和DFP的替代物，AEBSF的毒性更低、水溶性和水溶液稳定性更好。Aprotinin是丝*酸蛋白酶的竞争性可逆抑制剂；Bestatin是*基肽酶可逆抑制剂；E64是半胱*酸蛋白酶不可逆抑制剂；Leupeptin是丝*酸和半胱*酸蛋白酶可逆抑制剂；EDTA作为螯合剂是金属蛋白酶的可逆抑制剂。

使用方法：
1、本蛋白酶抑制剂混合物为100×的储存液，使用时按照1:100的比例加入到裂解液中(例如，1ml裂解液中加入10μl蛋白酶抑制剂混合物)，混匀后即可使用。含有蛋白酶抑制剂混合物的裂解液宜现用现配，不宜配制后冻存待后续使用。根据需要，0.1M的EDTA也按照1:100的比例加入到裂解液中。
2、待所需的抑制剂添加完毕混匀后，就可以开始进行常规细胞或组织的裂解和蛋白提取。
提示：蛋白酶抑制剂混合物尽量避免反复冻融，第一次使用后，可按照每次使用量分装冻存。


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·蛋白酶抑制剂混合物(真菌或酵母蛋白提取用)
编号：RFT197
英文名称：Protease inhibitor cocktail for fungal and yeast extracts
规格：1ml|5×1ml
本品是一种用于真菌或酵母蛋白提取的蛋白酶抑制剂混合物(100mM AEBSF，1.5mM E64，2mM Pepstatin A，500mM Phenanthroline in DMSO)。一个包装的本产品通常足够用于100ml裂解液的配制。

真菌或酵母提取物中含有许多内源性的蛋白酶、磷酸酶等，容易导致提取物中的蛋白降解或去修饰，从而影响后续的蛋白检测。因此在提取物中添加适当的蛋白酶、磷酸酶等抑制剂是防止蛋白降解和去修饰的有效方法。

本产品为经优化和测试的用于真菌或酵母蛋白提取的蛋白酶抑制剂混合物，包含了广谱的丝*酸、半胱*酸和酸性蛋白酶抑制剂、以及金属蛋白酶抑制剂。

本产品使用便捷，通常以1:100的比例把蛋白酶抑制剂混合物加入裂解液中，即可用于真菌或酵母蛋白的提取，并有效抑制蛋白降解。

本产品可以有效抑制真菌或酵母提取物中的各种蛋白酶活性，如丝*酸蛋白酶、半胱*酸蛋白酶、苏*酸和天冬*酸蛋白酶、金属蛋白酶等。其中AEBSF是一种水溶性的丝*酸蛋白酶不可逆抑制剂，其抑制常数与PMSF和DFP的抑制常数相似，可以有效抑制胰蛋白酶(trypsin)、糜蛋白酶(chymotrypsin)、纤溶酶(plasmin)、激肽释放酶(kallikrein)和凝血酶(thrombin)等蛋白酶，作为PMSF和DFP的替代物，AEBSF的毒性更低、水溶性和水溶液稳定性更好。E64是半胱*酸蛋白酶不可逆抑制剂；Pepstatin A是天冬*酸蛋白酶可逆抑制剂；Phenanthroline是金属蛋白酶的可逆抑制剂。

使用方法：

1、本蛋白酶抑制剂混合物为100×的储存液，使用时按照1:100的比例加入到裂解液中(例如，1ml裂解液中加入10μl蛋白酶抑制剂混合物)，混匀后即可使用。含有蛋白酶抑制剂混合物的裂解液宜现用现配，不宜配制后冻存待后续使用。
2、待所需的抑制剂添加完毕混匀后，就可以开始进行常规细胞或组织的裂解和蛋白提取。

储存条件：-20℃，有效期12个月。


蛋白酶抑制剂混合物(100×) 蛋白质研究关键词：RFT194,蛋白酶抑制剂混合物(100×),Protease inhibitor cocktail


·2×ligation solution MasterMix
编号：RFT108
规格：150μl
2×ligation solution MasterMix是含有T4 DNA Ligase，ligation buffer的2×MasterMix，实验时，只需加入片段和载体即可进行连接反应。适用于DNA片段和载体DNA的连接以及DNA片段和Linker或Adaptor DNA的连接。按照10μl连接体系计算，每次使用5μl，可以使用30次。

注意事项
1、2×ligation solution MasterMix由于含有T4 DNA ligase，使用前冰浴中彻底融化，混匀后使用。
2、为了提高转化效率，转化时建议所加入连接产物的量不要超过感受态细胞体积的10%。

使用方法：
一、DNA片段和载体DNA的连接
(1)粘性末端的连接
1．反应体系：

 

	10μl体系	终浓度
线性载体DNA	xμl	10-50 ng
插入DNA片段	yμl	插入片段：载体=1:1-5:1*
2×ligation solution MasterMix	5μl	1×
ddH2O	up to 10μl

注意：载体与插入片段的摩尔数比需要优化：一般vector:insert在1:1～1:5之间均可得到较好的结果。用以下公式计算片段摩尔数：pmol数= DNA量(ng)/(660×片段bp数)×1000。例如：插入片段2000bp，线性载体为3000bp，如果载体使用量为50ng(0.025pmol)，10μl连接体系中vector:insert的摩尔比是1:3，则需要2000bp pmol数为0.075pmol，插入片段2000bp的使用量为100ng。
2、彻底轻柔混匀后，瞬间离心，将管壁上的溶液收集到管底。
3、反应条件：16℃孵育30分钟。
4、可取5μl连接产物热击转化50μl感受态细胞或取1-2μl连接产物电击转化50μl感受态细胞。
注意：
a.若要提高电转实验效率，推荐65℃孵育10分钟或70℃孵育5分钟以灭活T4 DNA Ligase后，用DNA产物纯化试剂盒或*仿抽提对连接后的DNA片段进行纯化后进行电击转化。
b.若要提高转化子数目，可将连接时间延长至1小时。
(2)平末端的连接
1、反应体系：

	10μl体系	终浓度
线性平末端载体DNA*	xμl	10-50 ng
插入DNA片段	yμl	插入片段：载体=1:1-5:1**
2×ligation solution MasterMix	5μl	1×
ddH2O	up to 10μl

注意：
a.平滑末端的载体与 DNA 片段进行连接时，应首先将载体进行去磷酸化处理，以防止其自身环化。
b.载体与插入片段的摩尔数比需要优化：一般vector:insert在1:1~1:5之间均可得到较好的结果。用以下公式计算片段摩尔数：pmol数= DNA量(ng)/(660×片段bp数)×1000。例如：插入片段2000bp，线性载体为3000bp，如果载体使用量为50ng(0.025pmol)，10μl连接体系中vector:insert的摩尔比是1:3，则需要2000bp pmol数为0.075pmol，插入片段2000bp的使用量为100ng。
2、彻底轻柔混匀后，瞬间离心，将管壁上的溶液收集到管底。
3、反应条件：16℃孵育30分钟。
4、可取5μl连接产物热击转化50μl感受态细胞或取1-2μl连接产物电击转化50μl感受态细胞。
注意：
a.若要提高电转实验效率，推荐65℃孵育10分钟或70℃孵育5分钟以灭活T4 DNA Ligase后，用DNA产物纯化试剂盒或*仿抽提对连接后的DNA片段进行纯化后才能进行电击转化。
b.若要提高转化子数目，可将连接时间延长至1小时。

二、线性DNA的自身环化
1、反应体系：

	10μl体系	终浓度
线性载体DNA	xμl	10-50 ng
2×ligation solution MasterMix	5μl	1×
ddH2O	up to 10μl

2、彻底轻柔混匀后，瞬间离心，将管壁上的溶液收集到管底。
3、反应条件：16℃孵育30分钟。
4、可取5μl连接产物热击转化50μl感受态细胞或取1-2μl连接产物电击转化50μl感受态细胞。
注意：若要提高电转实验效率，推荐65℃孵育10分钟或70℃孵育5分钟灭活T4 DNA Ligase后，用DNA产物纯化试剂盒或*仿抽提对连接后的DNA片段进行纯化后才能进行电击转化。

三、接头连接
1、反应体系：

	10μl体系	终浓度
线性DNA	xμl	100-300 ng
磷酸化接头	yμl	0.5-1 μg
2×ligation solution MasterMix	5μl	1×
ddH2O	up to 10μl

2、彻底轻柔混匀后，瞬间离心，将管壁上的溶液收集到管底。
3、反应条件：16℃孵育30分钟。
4、65℃孵育10分钟或70℃孵育5分钟灭活T4 DNA Ligase。连接产物可以直接进行限制性内切酶酶切反应。

储存条件：-20℃


蛋白酶抑制剂混合物(100×) 蛋白质研究关键词：RFT194,蛋白酶抑制剂混合物(100×),Protease inhibitor cocktail


·彩色预染超低分子量蛋白Marker(1.2～45kD)
编号：RFT043
英文名称：Rainbow pre dyeing ultra low molecular weight protein
规格：10T(50μl)
本蛋白Marker可以直接观察蛋白电泳及清晰判断Western Blotting的转膜效果。本产品包含3种多肽和3种低分子量蛋白质组成，分子量范围为1.2kD-45kD，分子量大小为 1.2kD，4.6kD，10kD，16kD，27kD，45kD (注：蛋白大小已在18%Tricine-SDS-PAGE中用非预染蛋白Marker标定过。



储存条件：-20℃。

·15kb plus DNA ladder(250～15000bp)
编号：RFT012
英文名称：Rainbow pre dyeing ultra low molecular weight protein
规格：100T(2×250μl)
本产品是由10条带状双链DNA条带组成的DNA Ladder，适用于琼脂糖凝胶电泳中DNA条带的分析。含有1×loading buffer，可根据实验需要，直接取2-5μl电泳，使用方便，电泳图像清晰。10条带大小包括250，500，1000，1500，2500，4000，5000，7500，10000，15000bp。其中2500bp条带为100ng/5μl，其余条带浓度50ng/5μl。



使用方法：
1. 取2-5μl本产品加入到琼脂糖凝胶的加样孔中就行电泳。
注：根据梳子的厚度和宽度进行上样。
每1mm×1mm(厚度×宽度)加样孔上样1μl；
窄齿梳子(一般为1mm×2mm)上样2μl；
宽齿梳子(一般为1mm×5mm)上样5μl；
如果使用厚齿梳子或宽于5mm的梳子，可以适当调整上样量。
2. 建议电泳条件：凝胶浓度为0.8-1.0％，凝胶长度10cm，电泳电压4-10v/cm，电泳时间35-40分钟。
3. 通过EB染色后紫外灯下观察条带。

注意事项：
1. 琼脂糖的质量对DNA的电泳有很大影响，电泳时请尽量使用质量优等的琼脂糖。
2. 请使用新鲜配制的电泳缓冲液和新鲜配制的琼脂糖凝胶进行电泳，以保证Marker良好的分离效果。

储存条件：-20℃，有效期1年。

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