北京现货细胞周期与凋亡检测试剂盒怎么卖

特别声明：本产品及我公司所售其他产品均为科研类试剂产品，严禁用于药物、医疗及其他非科研用途。

北京百奥莱博专注于生命科学和生物技术领域，致力于为客户提供包括北京现货细胞周期与凋亡检测试剂盒怎么卖在内的一系列细胞生物学试剂产品，并提供一系列相关的技术服务。

名称：北京现货细胞周期与凋亡检测试剂盒怎么卖
英文名：Cell Cycle and Apoptosis Detection Kit
编号：WE0326
产地：国产|进口
规格：50次
  细胞周期与凋亡检测试剂盒是一种采用经典的碘化丙啶染色方法进行细胞周期与细胞凋亡分析的检测试剂盒。本试剂盒每个样品的细胞数量可以为10-100万。
  碘化丙啶是一种双链DNA的荧光染料。碘化丙啶和双链DNA结合后可以产生荧光，并且荧光强度和双链DNA的含量成正比。细胞内的DNA被碘化丙啶染色后，可以用流式细胞仪对细胞进行DNA含量测定，然后根据DNA含量的分布情况，可以进行细胞周期和细胞凋亡分析。碘化丙啶染色后，假设G0/G1期细胞的荧光强度为1，那么含有双份基因组DNA的G2/M期细胞的荧光强度的理论值为2，正在进行DNA复制的S期细胞的荧光强度为1-2之间。凋亡细胞由于细胞核发生浓缩以及发生DNA片段化(DNA fragmentation)导致部分基因组DNA片断在染色过程中丢失，因此凋亡细胞碘化丙啶染色后呈现明显的弱染，即荧光强度小于1，在流式检测的荧光图上出现所谓的sub-G1峰，即凋亡细胞峰。细胞发生凋亡时，由于胞浆和染色质浓缩、核碎裂，产生凋亡小体，使细胞的光散射性质发生变化。在细胞凋亡的早期，细胞对前向角光散射的能力显著降低，对侧向光散射的能力增加或没有变化。在细胞凋亡的晚期，前向和侧向光散射的信号均降低。因此可通过流式细胞仪测定细胞光散射的变化观察细胞凋亡情况。
  本试剂盒通常应用于培养的贴壁或悬浮细胞的细胞周期与细胞凋亡检测。如果用于组织的细胞周期与细胞凋亡检测，则必须把组织消化成单细胞状态，才可以进行检测。

试剂盒组成：

 

组份	50次
Dyeing Buffer	22.5ml
25×Propidium Iodide，PI	750μl

注意事项：
1、本试剂盒需使用流式细胞仪进行检测。
2、需自备PBS、95%乙醇和RNase A。
3、荧光染料均存在淬灭问题，保存和使用过程中请尽量注意避光，以减缓荧光淬灭。
4、PI对人体有刺激性，请注意适当防护。
5、请穿实验服并戴一次性手套操作。

操作步骤：

1、细胞样品的准备：
a．对于贴壁细胞：小心收集细胞培养液到一离心管内备用。用胰酶消化细胞，至细胞可以被轻轻用移液管或枪头吹打下来时，加入前面收集的细胞培养液，吹打下所有的贴壁细胞，并轻轻吹散细胞。再次收集到离心管内。1000×g左右离心3-5分钟，沉淀细胞。对于特定的细胞，如果细胞沉淀不充分，可以适当延长离心时间或稍稍加大离心力。小心吸除上清，可以残留约50μl左右的培养液，以避免吸走细胞。加入约1毫升冰浴预冷的PBS，重悬细胞，再次离心沉淀细胞，小心吸除上清。再次加入1ml冰浴预冷的PBS，重悬细胞。
b．对于悬浮细胞：1000×g左右离心3-5分钟，沉淀细胞。对于特定的细胞，如果细胞沉淀不充分，可以适当延长离心时间或稍稍加大离心力。小心吸除上清，可以残留约50微升左右的培养液，以避免吸走细胞。加入约1ml冰浴预冷的PBS，重悬细胞，并转移到1.5毫升离心管内。再次离心沉淀细胞，小心吸除上清，可以残留约50μl左右的PBS，以避免吸走细胞。再次加入1ml冰浴预冷的PBS，重悬细胞。

2、细胞固定：
取4毫升冰浴预冷的95%乙醇，低速涡旋震荡的同时加入1毫升细胞悬液，混匀后4℃固定2小时或更长时间。固定12-24小时可能效果更佳。1000×g左右离心3-5分钟，沉淀细胞。对于特定的细胞，如果细胞沉淀不充分，可以适当延长离心时间或稍稍加大离心力。小心吸除上清，可以残留约50μl左右的乙醇，以避免吸走细胞。加入约5ml冰浴预冷的PBS，重悬细胞，再次离心沉淀细胞，小心吸除上清，可以残留约50μl左右的PBS，以避免吸走细胞。轻轻弹击离心管底以适当分散细胞，避免细胞成团。

3、PI染色液的配制：
参考下表，根据待检测样品的数量配制适量的PI染色液：

	1个样品	6个样品	12个样品
Dyeing Buffer	0.4ml	2.4ml	4.8ml
25×Propidium Iodide，PI	15μl	90μl	180μl
RNase A(10mg/ml，自备)	1μl	6μl	12μl

注：配制好的PI染色液短时间内可以4℃保存，宜当日使用。

4、染色：
每管细胞样品中加入400μl PI染色液，缓慢并充分重悬细胞沉淀，37℃避光温浴30分钟。随后可以4℃或冰浴避光存放。染色完成后宜在24小时内完成流式检测，最好能在当日完成流式检测。

5、流式检测和分析：
用流式细胞仪在激发波长488 nm波长处检测红色荧光，同时检测光散射情况。采用适当分析软件进行细胞DNA含量分析和光散射分析。

储存条件：-20℃，避光保存

北京现货细胞周期与凋亡检测试剂盒怎么卖极具性价比，此外，我公司正火爆促销以下产品：

·dNTP混合溶液(10 mM)
编号：WE0159
英文名称：dNTP Mix(1mM each)
规格：1ml|5ml
  本产品为高质量的脱氧核苷酸(dNTP)的混合物，包括等摩尔的dATP、dGTP、dCTP、dTTP。经过PCR检测的脱氧核苷酸，可与所有的耐热聚合酶配套使用。其中高纯dNTP纯度均达到99%以上，超纯dNTP纯度均达到99.9%以上，不含DNase和RNase。

使用方法：
dNTP(10 mM each)可直接使用，或用调节至中性(PH7.5 左右)的无菌超纯水稀释至适当浓度使用。可用于PCR反应、Real-time PCR、DNA序列测定、分子标记、cDNA合成等。

储存条件：-20℃。

·FITC标记山羊抗大鼠IgG(H+L)
编号：WE0373
英文名称：Goat Anti-Rat IgG(H+L), FITC Conjugated
规格：100μl
本产品为FITC(硫*酸荧光素)标记的经亲和纯化的山羊抗体，特异识别大鼠IgG重链和轻链，其检测灵敏度高，本底低。荧光素标记抗体广泛应用于免疫学、细胞化学、流式细胞分析等研究，在临床检验上也用于细菌、病毒和寄生虫的检验及自身免疫病的诊断等。

免疫原：大鼠IgG
缓冲液：0.01M PBS，50%甘油，pH7.6
稳定剂：15 mg/ml BSA(不含IgG和蛋白酶)
防腐剂：0.05%叠氮*
荧光团：FITC，Amax=492; Emax=520
应用范围：对于大多数实验(1：25-100)


·蛋白印迹膜再生液
编号：WE0304
英文名称：Stripping Buffer
规格：100ml|500ml
  本产品采用温和洗涤配方，可在不影响目的蛋白的情况下，去除结合在印迹膜上的一抗和二抗，使同一张膜可进行多次抗体检测，无需反复电泳和转膜，节省样品和时间，适用于使用NC或PVDF膜进行Western Blot检测时条件的优化或同一样品不同蛋白的检测。

注意事项：建议先检测表达量较低的目的蛋白，用再生液处理后检测表达量高的蛋白，如内参蛋白等。

操作步骤：
1、将曝光后的膜取出，加入适量的Stripping Buffer(蛋白印迹膜再生液)，再生液充分覆盖膜表面，8.5 cm×5.5 cm膜加入15ml左右蛋白印迹膜再生液，室温振摇孵育15分钟左右(孵育时间应根据不同的目的蛋白来调整：比如内参抗体等表达量较高的蛋白，使用蛋白印迹膜再生液时可以延长孵育时间至1小时或者在37℃孵育30分钟)。
2、弃去蛋白印迹膜再生液，用15ml缓冲液(PBST或TBST)洗膜3次，每次5 分钟，室温振摇。
3、为了检测酶标二抗洗脱是否完全，此时可以用显色方法来确定二抗是否洗脱掉。
4、待检测完毕，确认膜上无残留的酶活性，再生后的膜通过加入15ml的封闭液进行封闭，室温30分钟或者4℃封闭过夜。
5、重新加入待测一抗，进行下一轮的WB实验。

储存条件：室温


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·FastStar热启动DNA聚合酶
编号：WE0122
英文名称：HotStar DNA Polymerase
规格：500U|2500U
  HotStar DNA Polymerase是抗Taq酶单克隆抗体和WE0101 Taq DNA Polymerase的混合制品，适用于Hot Start PCR。使用Taq酶抗体进行PCR扩增时，高温变性前由于Taq酶抗体与Taq酶结合抑制DNA聚合酶活性，能够在低温条件下有效抑制引物的非特异性退火及引物二聚体引起的非特异性扩增。Taq酶抗体在PCR反应最初的DNA变性步骤中变性，DNA聚合酶活性恢复，达到热启动效果。使用本品无需特殊地对Taq酶抗体失活处理，可以在常规PCR反应条件下使用。
  HotStar DNA Polymerase具有5"→3"DNA聚合酶活性和5"→3"外切酶活性，无3"→5"外切酶活性，酶延伸速度2 kb/min，可以扩增长度达5 kb的片段。扩增得到的PCR产物3"端附有一个“A”碱基，因此可直接用于T/A克隆。本产品具有延伸速度快、扩增效率高的特点，主要适用于PCR法扩增DNA片段、DNA序列测定等实验。

产品组成：

组份	500U	2500U
HotStar DNA Polymerase, 5 U/μl	100μl	5×100μl
10×PCR Buffer	1.8ml	5×1.8ml

注意：本产品的10×PCR Buffer中含有15 mM*离子。

活性定义：用活性化的大马哈鱼精子DNA作为模板/引物，在74℃，30分钟内，将10 nmol脱氧核苷酸掺入到酸性不溶物质所需的酶量定义为1个活性单位(U)。

质量控制：
1、经过多次柱纯化，SDS-PAGE检测其纯度大于99%；
2、经检测无外源核酸酶活性；
3、PCR方法检测无宿主残余DNA；
4、能有效地扩增人基因组中的单拷贝基因。

使用方法：
以下举例为以人基因组DNA为模板，扩增1 kb的片段的PCR反应体系和反应条件，实际操作中应根据模板、引物结构和目的片段大小不同进行相应的改进和优化。

1、PCR反应体系

试剂	50μl反应体系	终浓度
10×PCR Buffer	5μl	1×
dNTP Mix，10 mM each	1μl	200μM each
Forward Primer，10μM	2μl	0.4μM
Reverse Primer，10μM	2μl	0.4μM
Template DNA	<0.5μg	<0.5μg/50μl
HotStar DNA Polymerase,5U/μl	0.25-0.5μl	1.25-2.5 U/50μl
ddH2O	up to 50μl

注意：可以在室温下配制反应液，须将试剂置于冰上。

2、PCR反应条件

步骤	温度	时间	循环数
预变性	94℃	2 min
变性	94℃	30 s	25-35个循环
退火	55-65℃	30 s
延伸	72℃	30 s
终延伸	72℃	2 min

注意：
1)一般实验中退火温度比扩增引物的熔解温度Tm低5℃，无法得到理想的扩增效率时，适当降低退火温度。
2)延伸时间应根据所扩增片段大小设定。
3)可根据扩增产物的下游应用设定循环数。如果循环次数太少，扩增量不足；如果循环次数太多，错配机率会增加，非特异性背景严重。所以在保证产物得率的前提下应尽量减少循环次数。

储存条件：-20℃，避免反复冻融。


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Tris-Triton-NaCl缓冲液(pH9.0)   500ml
BTN130817 ROX参考染料,高浓度型 ROX Reference Dye
ARB10954 人肝素结合性表皮生长因子(HB-EGF)Elisa分析 Human heparin-binding epidermal growth factor-like growth factor,hb-egf ELISA KIT
细菌膜蛋白提取试剂盒(2D电泳用)   50T|100T
C1601 驴血清(无菌过滤)
ARB12097 大鼠末端补体复合物C5b-9(TCC C5b-9)酶标法分析 Rat terminal complement complex c5b-9,tcc c5b-9 ELISA KIT
CYB165004 生物素化羊抗猪IgG
ARB13333 犬细小病毒CPV Elisa定量检测 
ARB12983 小鼠抑瘤素M(OSM)含量分析 Mouse oncostatin-m,osm ELISA KIT
金属硫蛋白 Valinomycin
多聚赖*酸溶液(1×PLL)  0.1mg/ml 50ml
ARB14046 猴γ干扰素(IFN-γ)含量检测 Monkey interferon γ ,ifn-γ ELISA KIT
ARB11786 人叠氮胸苷(AZT)代做ELISA实验 Human azidothymidine,azt ELISA KIT
73049-39-5 DNA(calf thymus)  小牛胸腺DNA
PY08-066  PH7.0*化*蛋白胨缓冲液 225ml  20瓶/箱，用于样品的稀释液
L-*甘*醇 Cibacron Blue F3G-A 20989-17-7
L0204 小鼠IgG3类单克隆抗体腹水纯化试剂盒
芴甲氧羰基-S-乙酰*甲基-L-半胱*酸 Q Sepharose FF 86060-81-3

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