ClearVTM细胞周期与凋亡检测试剂盒

ClearVTM细胞周期与凋亡检测试剂盒

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  • ¥298 - 528
  • Arcegen
  • C331408
  • 美国
  • 2025年11月13日
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      现货

    • 英文名

      ClearVTM Cell Cycle and Apoptosis Analysis Kit

    • 保质期

      2年

    • 供应商

      魔兜儿

    • 保存条件

      -20°C

    • 规格

      50T/100T

    规格:50T产品价格:¥298.0
    规格:100T产品价格:¥528.0

    产品简介

    本产品采用了经典的碘化丙啶染色(Propidium staining ,即 PI staining)方法对细胞周期与细胞凋亡进行分 析。碘化丙啶(Propidium,PI)是一种双链 DNA 荧光染料 ,其嵌入双链 DNA 后可以产生荧光 ,并且荧光 强度和双链 DNA 的含量成正比。

    细胞内的 DNA 被 PI 染色后 ,可以用流式细胞仪对细胞进行 DNA 含量测定。假设 G0/G1 期细胞的荧光强  度为 1 ,那么含有双份基因组 DNA 的 G2/M 期细胞的荧光强度的理论值为 2 ,正在进行 DNA 复制的 S 期  细胞的荧光强度为 1-2 之间。凋亡细胞由于细胞核发生浓缩以及发生 DNA 片段化(DNA fragmentation)导 致部分基因组 DNA 片断在染色过程中丢失 ,因此凋亡细胞 PI 染色后呈现弱染 ,荧光强度小于 1 ,在流式  荧光图上出现 sub-G1 峰 ,即凋亡细胞峰。

    细胞凋亡也可以用流式细胞仪观察细胞光散射的变化来检测。细胞发生凋亡时 ,由于胞浆和染色质浓缩、 核碎裂 ,产生凋亡小体 ,使细胞的光散射性质发生变化。凋亡前期 ,染色质皱缩 ,细胞密度增加 ,前向角 光散射色显著降低。凋亡后期 ,细胞产生凋亡小体 ,前向角光散射和侧向角光散色都显著降低。

    本试剂盒通常应用于贴壁或悬浮细胞的细胞周期与细胞凋亡检测。如果用于组织的细胞周期与细胞凋亡检 测 ,则必须把组织消化成单细胞状态 ,才可以进行检测。

     

    产品规格

    产品货号

    C331408E

    C331408S

    产品规格

    50 T

    100T

     

    组分信息

    组分编号

    组分名称

    C331408E

    C331408S

    C331408-A

    RNase A

    0.5 mL

    1 mL

    C331408-B

    PI Solution

    0.5 mL

    1 mL

    C331408-C

    Staining Solution

    25 mL

    25 mL*2

     

    产品储存

    冰袋(wet ice)运输。-20°C 避光保存 ,有效期为 2 年。

    【注】 :如果需要在短时间内多次重复使用 ,可以于 4℃避光保存 ,2 个月内有效。

     

    操作注意

    1.  本试剂盒需要使用流式细胞仪进行检测。

    2.  细胞处理需轻柔 ,尽量避免人为的损伤细胞。

    3.  为防止不同批次细胞在实验时所处周期不同导致重复性差 ,可以在实验前进行细胞的同步化处理。实验 细胞应处于对数生长期 ,贴壁细胞一般在 50~80%汇合度时收集为宜。
    4.  400 目筛网过滤是用来将粘在一起的细胞团滤掉 ,留下单细胞 ,否则会出现人为的多倍体干扰。如果没 有条件过滤 ,请在染色之前将细胞轻弹以分散 ,再进行染色。

    5.  荧光染料均存在淬灭问题 ,保存和使用过程中请尽量注意避光 ,以减缓荧光淬灭。

    6.  操作碘化丙啶时 ,应注意防护 ,保护眼睛、避免吸入。

    7.  为了您的安全和健康 ,请穿实验服并戴一次性手套操作。

    8.  本产品仅作科研用途!

     

    操作说明

    1.  样品制备:

    细胞数量控制在 1×105~ 1 × 106 个。

    a)贴壁细胞:小心吸除细胞培养液,用胰酶消化细胞,制备成单细胞悬液。1000 g 离心 5 min,沉淀细胞, 弃上清 ,用 1 mL 预冷的 PBS 润洗细胞一次 ,离心收集细胞。

    b)悬浮细胞: 1000 g 离心 5 min ,沉淀细胞 ,小心吸除上清。加入 1 mL 预冷的 PBS ,重悬细胞 ,再次离 心收集细胞。

    c)组织细胞:将组织块用剪刀剪成尽量小的小块后 ,用 0.25%的胰酶消化 0.5-1 h ,经过 200-400 目筛网过 滤得到单细胞悬液。1000 g 离心 5 min,沉淀细胞。加入约 1 mL 预冷的 PBS ,重悬细胞 ,再次离心沉淀细 胞。如组织难以消化 ,可加入适量胶原酶。

    2.  细胞固定

    细胞沉淀用 1 mL 预冷的 70%乙醇轻轻混匀 ,4℃固定 2 h 以上或者过夜。接下来 1000 g ,离心 5 min 沉淀 细胞后 ,用 1 mL 预冷的 PBS 重悬。然后再次 1000 g 离心 5 min 沉淀细胞。

    3.  染色

    在 0.5 mL Staning Solution(C331408-C)中加入 10 μL PI Solution(C331408-B)和 10 μL RNase A(C331408-A) 溶液,混匀待用。每个细胞样品加入 0.5 mL 配置好的碘化丙啶染色液,轻轻混匀重悬细胞。37℃避光孵育  30 min,就可以进行流式检测 ,流式检测最好在 5 h 内完成。

    【注】 :配置好的 PI 染色液在短时间内可以 4℃保存 ,宜当日使用。

    4.  流式检测和分析

    细胞用 400 目筛网过滤 ,用流式细胞仪进行检测 ,在激发波长 488 nm 波长处检测 ,同时检测光散射情况。 采用适当分析软件进行细胞 DNA 含量分析和光散射分析。

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