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- 详细信息
- 文献和实验
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675
- 英文名:
Human Genomic DNA Quantification Kit
- 保质期:
长期
- 供应商:
北京百奥莱博科技有限公司
特别声明:本产品及我公司所售其他产品均为科研类试剂产品,严禁用于药物、医疗及其他非科研用途。
北京百奥莱博专业生产销*(代"售")WE0230型人基因组DNA定量试剂盒厂家现货,我公司供应的分子生物学试剂品类齐全,且具有优势价格,欢迎新老客户垂询订购。
名称:WE0230型人基因组DNA定量试剂盒厂家现货
品牌:百奥莱博
编号:WE0230
规格:1ml|5ml
本产品是采用探针法进行实时荧光定量PCR(qPCR),实现对从各种样品(石蜡样本、流式分选的细胞、血清或血浆样本及少量临床样本等)中抽提的DNA进行浓度和质量的准确检测。产品提供了qPCR过程中所需的全*(代"套")试剂,包括反应混合液,引物混合物,标准品,只需添加提取好的DNA即可开始实验,操作简单方便、省时省力。反应混合物使用了高效、快速的热启动BaldStar Taq DNA Polymerase,扩增灵敏度高,特异性好,缩短了程序反应的时间。
ROX染料用于校正定量PCR仪孔与孔之间产生的荧光信号误差,一般用于ABI、Stratagene等公司的Real Time PCR 扩增仪。不同仪器的激发光学系统有所不同,因此ROX染料的浓度必须与相应的荧光定量PCR仪相匹配。
不需要ROX校正的仪器:Roche LightCycler 480,Roche LightCyler 96,Bio-radiCyler iQ,iQ5,CFX96等。
需要Low ROX校正的仪器:ABI Prism7500/7500 Fast,QuantStudio® 3 System,QuantStudio® 5 System, QuantStudio® 6 Flex System,QuantStudio® 7 Flex System,ViiA 7 system, Stratagene Mx3000/Mx3005P,Corbett Rotor Gene 3000等。
需要High ROX校正的仪器:ABI Prism7000/7300/7700/7900,Eppendorf,ABI Step One/Step One Plus等。
除WE0230型人基因组DNA定量试剂盒厂家现货外,我公司正在打折促销以下产品:
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M0110 TMB-2HCL
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WE0230型人基因组DNA定量试剂盒厂家现货关键词:人基因组DNA定量试剂盒,WE0230,Human Genomic DNA Quantification Kit
·Protein G琼脂糖凝胶
编号:WE0270
英文名称:Protein G-Sepharose
规格:5ml
本产品为Protein G与Sepharose偶联后产物,可从血清,腹水,细胞培养上清和细胞抽提物中分离和纯化多种哺乳动物丌同亚型的抗体或包含抗体Fc片段的基因工程重组蛋白。Protein G是链球菌(group C和G)细胞表面蛋白。它不Protein A类似,通过不免疫球蛋白的Fc区相互作用,可结合大多数哺乳动物的IgG。但两者结合特异性有所丌同。Protein G对人IgG3,小鼠IgG1,大鼠IgG2a等具有高亲和力。天然Protein G具有白蛋白和细胞表面结合域。重组Protein G去除了白蛋白和细胞表面结合域,以减少非特异性结合。本产品具有广谱 IgG结合、高Fc段结合活性、高抗体吸附量和性能稳定等特点,可重复多次使用。
注意事项:
1、凝胶从冷室或冰箱中取出后在室温下缓慢振摇恢复到室温后装柱,避免产生气泡影响柱效。
2、装柱时尽可能维持凝胶长径比为5:3-2:1,长径比过大将导致洗脱峰拖尾,洗脱体积增大;长径比过小将导致样品与填料接触时间短,吸附不充分,填料吸附蛋白量小。
3、若上样液中抗体浓度过高,应使用平衡缓冲液稀释至1-2 mg/ml,以免上样浓度过高影响柱效。
4、可以采用降低上样时的流速来增加样品与填料接触时间从而提高纯化抗体量。
5、凝胶用低pH缓冲液洗脱时间应尽可能短,洗脱后用中性缓冲液尽快中和至pH中性,以延长亲和介质的使用寿命。
6、洗脱后,应立刻用如中和缓冲液将收集到的抗体溶液中和到中性(pH7.4左右),以利于维持抗体的生物活性,避免抗体失活。
7、填料使用后应用0.1 M柠檬酸*缓冲液(pH3.0)做再生处理,长期采用极端的洗脱条件将缩短亲和介质的使用寿命。
使用方法:
I 缓冲液的准备
1、平衡缓冲液:20 mM PBS,150 mM NaCl,pH7.4-8.5。
2、洗脱缓冲液:0.1 M Glycine,pH2.5-3.0。
3、再生缓冲液:1 M NaCl。
4、中和缓冲液:1 M Tris-Cl,pH9.0。
注意:
1)以上缓冲液使用前均需0.45μM滤膜过滤。
2)为提高抗体和介质的吸附力。可适当提高平衡缓冲液中的盐浓度和ph值。
II 样本制备
1、样品用平衡缓冲液稀释5-10倍。
2、细胞培养液中大量的血清蛋白会对亲和层析造成一定的干扰,去血清处理或稀释样品将提高纯化抗体收率。
注意:样品在上柱前需0.45μM微孔滤膜过滤。
III 操作步骤
1、将Protein G-Sepharose填料混匀后加入层析柱,室温静置10分钟,待凝胶与溶液分层后,把底部的出液口打开,让乙醇通过重力作用缓慢流出。
2、向装填后的柱中加入3-5个柱床体积的超纯水将乙醇冲洗干净,用平衡缓冲液流洗5-10个柱床体积平衡柱子。
3、将样品上柱,上样流速60 cm/h。
4、平衡缓冲液再洗5-10个柱床体积,直至基线平稳。
5、洗脱缓冲液洗脱,收集洗脱峰,用中和缓冲液将洗脱收集样品中和到中性。
6、立即用5-10个柱床体积平衡缓冲液平衡柱子到中性。
7、再生缓冲液流洗3-5个柱床体积。先后用纯水、20%乙醇分别流洗3-5个柱床体积。柱子置于2~8℃保存。
注意:操作中如果没有实时的蛋白监测系统,收集洗脱峰时可以分阶段收集到多个管中,最后根据测定结果重新调整收集方式。
8、本产品使用10次以上后先用20%乙醇洗5个柱床体积,再用70%乙醇洗脱5-10个柱床体积,再用20%乙醇流洗3-5个柱床体积。柱子置于2~8℃保存。
储存条件:2~8℃,避免冷冻
WE0230型人基因组DNA定量试剂盒厂家现货关键词:人基因组DNA定量试剂盒,WE0230,Human Genomic DNA Quantification Kit
·一步法快速WB试剂盒(兔源一抗)
编号:WE0298
英文名称:One Step Western Kit HRP(Rabbit)
规格:50次
本试剂盒是百奥莱博最新研发的Western Blot检测试剂盒,能够在1小时左右得到高质量的Western Blot结果,且操作简便、检测灵敏度高、背景低、不需再加入二抗、系统稳定性强。常规的Western Blot间接法检测过程(封闭、一抗结合和二抗结合)需要较长的时间,实验流程复杂且需要多步条件优化。胶上的蛋白转移到载体膜上后,使用试剂盒中的封闭液孵育5 min,再用抗体反应液处理后的一抗孵育载体膜,经洗涤三次(每次5 min)后,即可进行发光或显色检测。本试剂盒针对目的蛋白一抗为兔来源的实验系统使用。
| 组份 | 50次 |
| Blocking Buffer |
500ml |
| Antibody Pretreat Solution(HRP/Rabbit) | 5×1ml |
| Dilution Buffer | 500ml |
| Wash Buffer(10×) | 500ml |
注意事项:
1、客户需自己准备兔来源的一抗。
2、使用Blocking Buffer封闭液、Antibody Pretreat Solution(HRP/Rabbit)抗体反应液(兔)、Wash Buffer(10×)漂洗液之前请充分混匀。
3、漂洗液如在2~8℃保存时出现沉淀,请恢复到室温,把沉淀溶解后正常使用,1×漂洗液可在室温保存一个月。
4、建议转膜完成后用丽春红等试剂染色,并把膜上多余部分剪去以增加试剂的使用效率。
5、一抗和抗体反应液HRP(兔)需要通过预实验来确定最佳的稀释用量。
6、抗体反应液HRP(兔)、抗体稀释液和抗体用量可根据膜的大小按比例放大或减少。
7、加入一抗的抗体稀释液可以回收重复使用一次。特异性及亲和力低的抗体不建议重复使用。回收后抗体如在1-2天内使用放置在2~8℃,长期保存请在-20℃冻存,避免多次反复冻融。
8、如果存在较高背景的情况,请调整抗体的用量,并增加洗膜次数。
9、试剂盒内所有试剂请于2~8℃保存,避免冻融。
操作步骤:
本产品适用于转膜完成后的封闭及抗体孵育步骤,以5cm×8cm 膜为例:
1、漂洗液准备:取10ml Wash Buffer(10×)用蒸馏水稀释至100ml,即为1×Wash Buffer,待用。每次洗膜用8-10ml。
2、封闭:转膜完成后,将膜浸没到10ml Blocking Buffer中,室温封闭5分钟。
3、漂洗:倒掉封闭液,加入8-10ml 1×Wash Buffer,于摇床上用较大速度漂洗1分钟。
4、洗膜的同时可准备抗体孵育液:取Antibody Pretreat Solution(HRP/Rabbit)100μl到离心管中,加入兔源一抗3-10μg,枪头吸打至充分混匀,室温孵育5分钟。加入至10ml Dilution Buffer中,充分混匀。
注意:
1)一抗的用量也可根据抗体的稀释度来进行调整。以抗体的最终稀释度1:1000为例,取100μl抗体反应液HRP(兔)到EP管中,加入10μl一抗,加入到10ml 抗体稀释液中,充分混匀,室温孵育5分钟。
2)如果膜面积较小,可按比例减少抗体、反应液及稀释液的用量。
5、完成步骤3后,倒掉漂洗液,将一抗、Antibody Pretreat Solution(HRP/Rabbit)及Dilution Buffer混合而成的抗体孵育液加到膜上(确保孵育液完全浸没膜表面),在摇床上以60 rpm左右的速度室温孵育40分钟。
6、弃去(回收)抗体孵育液,用配制的1×Wash Buffer漂洗3-5次,每次3分钟。
7、进行后续检测。建议采用ECL或者DAB法进行检测。
应用实例:
实例一 抗原为293T细胞全裂解液
A:普通WB对照:beta-actin兔多抗 3.3ug 室温孵育40min,洗膜后二抗羊抗兔-HRP(WE0394)1:10000稀释,室温40min,ECL(WE0308)曝光
实例二 抗原为293T细胞全裂解液
C:普通WB对照:PAK1,Epitomics兔单抗1:1000 室温孵育40min,洗膜后二抗羊抗兔-HRP(WE0394)1:10000稀释,室温40min,ECL(WE0308)曝光
D:一步法WB: Epitomics兔单抗1:1000 室温孵育40min,ECL(WE0308)曝光。
常见问题及解决方法:
| 问题 | 可能原因 | 解决方案 |
| 信号太弱或者 看不到条带 |
蛋白上样量太少 | 进行SDS-PAGE电泳时加大上样量。 |
| 蛋白转膜效率太低 | 优化转膜时间或者电流,确保转膜时膜与胶之间没有气泡。 | |
| 一抗亲和力较低 | 增加膜在溶液中的孵育时间或者增加抗 体浓度可以增加信号 |
|
| 一抗亲和力较低 | 对于低亲和力抗体来说,减少洗膜时间可以增加信号。由每次10 分钟,减少到每次5分钟可以增加信号。 | |
| 背景偏高 | 一抗使用过量 | 减少一抗的使用量。 |
| 一抗有非特异性结合或者 与封闭试剂有交叉反应 |
使用和二抗来源一致的血清或者无IgG的BSA。 | |
| 洗膜时间太短 | 增加洗涤的步骤可以进一步的降低背景。 | |
| 曝光显影时间过长 | 减少曝光时间。如果信号和背景都高,可以等待一段时间 ,等背景信号减弱后,再进行曝光。 |
|
| 容器或者试剂被污染 | 每次洗涤的时候使用清洁的容器。带手套,使用清洁的镊子处理膜。 |
储存条件:2~8℃保存,避免冷冻
北京百莱博科技有限公司是基因结构和功能产品的专业生产供应销*(代"售")商,恭候您的咨询选购WE0230型人基因组DNA定量试剂盒厂家现货。
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