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北京三日疟原虫荧光PCR检测试剂盒价格

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  • ¥4200 - 5800
  • 百奥莱博
  • 北京
  • 2025年07月10日
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      北京百奥莱博科技有限公司

    特别声明:本产品及我公司所售其他产品均为科研类试剂产品,严禁用于药物、医疗及其他非科研用途。

    北京百奥莱博致力于最快速、最有效的检测产品,包括北京三日疟原虫荧光PCR检测试剂盒价格在内的细菌PCR检测试剂盒产品是我公司倾力打造的优势产品,欢迎选购。


    名称:北京三日疟原虫荧光PCR检测试剂盒价格
    等级:科研试剂
    编号:SYA125
    产地:国产|进口
    规格:48次/盒
    品牌:百奥莱博
    一、简介:
    本试剂盒用一对三日疟原虫特异性引物,结合一条特异性荧光探针,用荧光PCR 探针技术进行三日疟原虫的检测。

    二、用途:
    本试剂盒可用于三日疟原虫检测鉴定及突发公共卫生事件的处置,还可用于三日疟原虫的环境监测、卫生检疫及感染的辅助诊断,其检测结果仅供临床参考。

    三、试剂盒组成:(48T/ Kit)
    组份 数量 规格
    三日疟原虫荧光PCR 反应液(qPCR MIX) 1管 672μL/管
    DNA抽提液(DNA Extraction) 2管 1.5mL/管
    酶混合物(DNA Polymerase MIX) 1管 48μL/管
    阴性对照(NTC) 1管 50μL/管
    三日疟原虫阳性对照(PTC) 1管 50μL/管

    四、荧光PCR 仪器适用范围
    ABI系列,Bio-Rad系列,Roche系列等荧光定量PCR检测仪等。

    五、储存条件及有效期:
    本试剂盒于-20℃保存,避免反复冻融,有效期为6个月。

    六、实验操作步骤
    6.1 标本采集
    血液:用一次性无菌5ml注射器抽取疑似人或动物血3-5ml,置于枸橼酸*或EDTA2Na抗凝管中,摇匀送检。
    肺脏等组织:取上述组织1g左右,置于1.5ml洁净EP管中送检。
    乳液、体液等标本:取相应标本3-5ml,转至1.5ml洁净EP管中送检。
    6.2 DNA提取
    可采用PCR试剂盒配备的DNA抽提液,按以下说明进行DNA核酸的粗提。也可采购北京百奥莱博科技有限公司生产的(DNA提取试剂盒(过柱法-荧光配套)或其他合适的商业化产品,并按照相应试剂盒说明进行操作。
    血液样本:直接取200μl 抗凝血,转至一洁净的1.5ml 离心管中,加入1ml 双蒸水,剧烈震荡30s,8000rpm 离心5min,弃上清,至无明显红色沉淀。(若沉淀明显,请再重复上述步骤一次)。加入1ml生理盐水,剧烈震荡15s,13000rpm 离心5min,弃上清。沉淀加入50μl 核酸提取液(使用前请室温溶解并充分混匀)并与沉淀混匀,100℃恒温10min,13000rpm 离心3min,取上清4μl 进行PCR 反应。
    肺、淋巴结等固体组织:剪取约0.1g 组织,用生理盐水洗去血污,剪碎加入0.5mL TE 转移到匀浆器中匀浆。将匀浆液50μl 转移到1.5mL 离心管中,加入50μl 核酸提取液(使用前请室温溶解并充分混匀)并与沉淀混匀,100℃恒温10min,13000rpm 离心3min,取上清4μl 进行PCR 反应。
    乳液等液体标本:取标本2-3mL,13000rpm 离心3min,弃上清,沉淀加入50μl 核酸提取液(使用前请室温溶解并充分混匀)并与沉淀混匀,100℃恒温10min,13000rpm 离心3min,取上清4μl进行PCR反应。
     注:阳性对照和阴性对照为已经抽提好的核酸(无需提取),直接取5μL加入到反应体系中即可。由于阳性对照浓度较高,建议最后在样品制备区域加入阳性对照。

    七、检测步骤:
    7.1 PCR 扩增
    从试剂盒中取出荧光PCR反应液(三日疟原虫-qPCR MIX)、酶混合物(DNA Polymerase MIX),室温融化并振荡混匀后,10000rpm离心10s。
    设所需要的PCR 反应管管数为N(N=样本数+1 管阴性对照+1 管阳性对照),每个测试反应体系配制如下表:
    试剂 每个反应加入的量 N个反应加入的量
    荧光PCR反应液 14µL N×14µL
    酶混合液 1µL N×1µL
    总量 15µL N×15µL
    计算好各试剂的使用量,加入一适当体积洁净离心管中,充分混匀,10000rpm离心10s,向设定的N个PCR 反应管中分别加入15μL,向每管中加入处理后样品或阴性对照(NTC)和阳性对照(PTC)5μL,10000rpm瞬时离心10秒。
    7.2 qPCR反应条件
    将各反应管放入定量PCR仪器的反应槽内。
    推荐循环条件:
    1循环 50℃ for 2 min
    预变性 1循环 95℃ for 10 min
    PCR扩增 40循环 95℃ for 15 sec
    60℃ for 60 sec
    在60℃延伸时收集荧光信号。报告基团:设置为FAM。淬灭基团:NONE,请勿选择ROX参比荧光。

    八、结果分析:
    8.1 结果分析条件设定
    直接读取检测结果。基线和阈值设定原则根据仪器噪声情况进行调整,以阈值线刚好超过正常阴性样品扩增曲线的最高点为准。
    8.2 试验成立判定
    阴性对照(NTC):不应产生任何的扩增曲线。
    阳性对照(PTC):均产生扩增曲线。
    以上条件应同时满足,否则,此次试验视为无效。
    8.3 结果判定
    在试验成立的条件下,Ct值≤35的样本为阳性,表明三日疟原虫核酸阳性。
    Ct值显示为无的样本为阴性样本,表明三日疟原虫核酸阴性。
    如果35<Ct值≤40,判为可疑样品。对于可疑样品,先看扩增曲线。如果扩增曲线为对数扩增曲线,则为可疑阳性,否则判为阴性。
    对于可疑阳性样品,重新抽提核酸,再次进行三日疟原虫real time PCR检测。如果重复扩增曲线为对数扩增曲线,判为样本阳性,表明三日疟原虫核酸阳性;否则判为样本阴性。

    九、注意事项:
    (1)初次使用前请仔细阅读说明书。并严格按照说明书步骤操作。
    (2)所有使用的离心管应高压灭菌,而且必须不含DNA酶。
    (3)PCR 操作应严格按照要求分区(试剂配制区、标本处理区、PCR 扩增区等),防止实验室污染。
    (4)样本提取、试剂配置、加样需在不同区的超净工作台进行,以免污染。
    (5)试剂盒里所有物品应视为污染物对待,并按照卫生部《微生物生物医学实验室生物安全通则》进行处理。


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