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北京百奥莱博科技有限公司
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北京百奥莱博专业生产销*(代"售")北京X-α-Gal促销,我公司供应的分子生物学试剂品类齐全,且具有优势价格,欢迎新老客户垂询订购。
名称:北京X-α-Gal促销
规格:25mg
产地:国产|进口
品牌:百奥莱博
X-α-Gal是一种酵母半乳糖苷酶 (MEL1) 的显色底物,用于在培养基上直接检测GAL4系统的酵母双杂交作用。通过蓝白颜色筛选,快速和简便地识别阳性的蓝色克隆,无需费时的β-半乳糖苷酶报告基因检测。
X-α-Gal检测酵母MEL1基因的激活,MEL1是GAL4酵母双杂交系统的一个报告基因,编码分泌型的α-半乳糖苷酶。该酶可水解无色的X-α-Gal底物并最终产生蓝色产物。表达α-半乳糖苷酶的酵母菌落在含有X-α-Gal的培养基上显蓝色,即阳性的双杂交作用。
产品用途:
1) α-半乳糖苷酶的显色底物,形成蓝色沉淀。在培养基上直接检测酵母双杂交相互作用,利用此底物可以省去双杂交体系中的β-半乳糖苷酶溶液和filter-lift assays;
2) 用于区分肠杆菌科内的不同菌种以及区分双歧杆菌和乳酸菌;
3) 在组织化学中用于酶活性的检测。
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·细胞核/细胞浆蛋白抽提试剂盒
编号:SY0326
英文名称:Nuclear and Cytoplasmic Protein Extraction Kit
规格:50T
细胞核蛋白、细胞浆蛋白在细胞研究和蛋白质组学中具有重要意义,因此在体外研究中需要将其从细胞或组织中分离。本试剂盒提供了一种较为简单方便,高效的蛋白抽提方法,其原理是:通过细胞浆蛋白抽提试剂A和B,在低渗透压条件下,使细胞充分膨胀,然后破坏细胞膜,释放出细胞浆蛋白,然后通过离心得到细胞核沉淀。最后通过高盐的细胞核蛋白抽提试剂C抽提得到细胞核蛋白。
本试剂盒1次可对2×106个细胞和30-50mg组织样品进行抽提,按照该使用量,SY0326可抽提50个样品。
产品组份:
胞浆蛋白抽提试剂A————10ml
胞浆蛋白抽提试剂B————0.5ml
胞核蛋白抽提试剂————2.5ml
储存条件:-20℃,有效期一年。
使用方法
将试剂盒各组分溶解后立即放置在冰上,混匀。取适量的胞浆蛋白抽提试剂A(以下统称:试剂A)和胞核蛋白抽提试剂(以下统称:试剂C)备用,在使用前数分钟内加入PMSF,使PMSF的最终浓度为1mM。
1 细胞样品蛋白的抽提
1)细胞处理
对于贴壁细胞:PBS清洗细胞1次,EDTA溶液消化细胞或用细胞刮子刮下细胞,并用移液器吹打下细胞。离心收集细胞,尽量吸尽上清,留下细胞沉淀备用。
【注】:尽量避免用胰酶消化细胞,以免胰酶降解抽提的目的蛋白。
对于悬浮细胞:离心收集细胞,PBS清洗细胞1次,收集细胞,尽量吸尽上清,留细胞沉淀备用。
2) 每20µl细胞沉淀加入200µl含PMSF的试剂A。
【注】:对于2×106个Hela细胞,其细胞沉淀的体积大约为20µl或40mg。
3) 最高速剧烈涡旋5s,完全悬浮分散细胞沉淀。
【注】:如果细胞沉淀没有完全悬浮并分散开,可以适当延长旋涡震荡的时间。
4) 冰浴10-15min。
5) 加入胞浆蛋白抽提试剂B(以下统称:试剂B) 10µl。最高速剧烈涡旋5s,冰浴1min。
6) 最高速剧涡旋5s,4℃12,000-16,000g离心5min。
7) 立即吸取上清至一预冷的塑料管中,上清即为抽提得到的细胞浆蛋白。可以立即使用,也可以冻存备用。
【注】:此步千万不要触及沉淀,可以在沉淀上方保留极小体积的上清,以免吸到沉淀。
8) 对于沉淀,完全吸尽残余上清,加入50µl含PMSF的试剂C。
【注】:此步需完全吸尽上清,否则会带来细胞浆蛋白的污染。
9) 最高速剧烈涡旋15-30s,把沉淀完全悬浮并分散开。然后放回冰浴中,每隔1-2min再高速剧烈涡旋15-30s,共30min。10)4℃ 12,000-16,000g离心10min。
11)立即吸取上清至一预冷的塑料管中,即为抽提得到的细胞核蛋白。可以立即使用,也可以-70℃冻存备用。
2 组织样品的抽提
1) 将组织切成非常细小的碎片。根据后续使用量按照20:1的比例混合试剂A和B,并加入PMSF至最终浓度为1mM,混匀即可配制成组织匀浆液。按照每60mg组织加入200µl组织匀浆液的比例混合组织和组织匀浆液,并在玻璃匀浆器内充分匀浆。
【注】:匀浆需在冰浴或4℃进行。
2) 匀浆后将匀浆液转移至塑料离心管内,冰浴放置15min。
3) 4℃ 1,500g离心5min。把上清转移至一预冷的塑料管中,上清含部分细胞浆蛋白。
【注】:吸上清时千万不要触及沉淀。
4) 对于上述收集得到的沉淀,已经充分匀浆,但很多细胞仍没有破碎。接下来请参照【细胞样品蛋白抽提】的步骤2)开始操作,即把沉淀当做已经离心收集好的细胞沉淀操作,即可得到细胞浆蛋白和细胞核蛋白。抽提得到的细胞浆蛋白可以和步骤【组织样品抽提】中步骤3)抽提得到的细胞浆蛋白合并备用。
北京X-α-Gal促销关键词:SY0277,X-α-Gal,百奥莱博
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北京X-α-Gal促销关键词:SY0277,X-α-Gal,百奥莱博
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