N端Myc标签融合蛋白质粒现货价格

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北京百奥莱博主要从事生物试剂的生产和销*(代"售")，产品线涵盖N端Myc标签融合蛋白质粒现货价格在内的分子生物学试剂产品，还包括PCR及荧光定量PCR、核酸提取试剂盒类、样本核酸保护试剂、核酸提取、克隆与转化、蛋白纯化、蛋白检测、免疫组化、细胞凋亡与抗体等。

名称：N端Myc标签融合蛋白质粒现货价格
编号：YT482
英文名：N-Myc plasmid（with CMV promoter）
产地：国产|进口
本质粒是用于在哺乳动物细胞中表达N端和Myc tag(Myc标签)融合的目的蛋白的表达质粒。含有CMV启动子可以高效启动目的蛋白在细胞中的表达；在多克隆位点的5"端含有一个可以编码Myc标签的序列，因此可以表达出含有Myc标签的融合蛋白，可以方便地使用抗Myc的抗体来识别目的蛋白，有利于目的蛋白检测和分离纯化。质粒为卡那霉素抗性。转染细胞后，可使用G418筛选稳定表达目的蛋白的细胞株。

本质粒质粒的主要信息如下：

 

Feature Nucleotide	Position
CMV promoter	1-602
T3 promoter and T3 primer binding site	620-639
Myc tag	679-708
multiple cloning site	711-784
T7 promoter and T7 primer binding site	827-848
SV40 polyA signal	860-1243
f1 origin of ss-DNA replication	1381-1687
bla promoter	1712-1836
SV40 promoter	1856-2194
neomycin/kanamycin resistance ORF	2229-3020
HSV-thymidine kinase(TK)polyA signal	3021-3479
pUC origin	3608-4275

本质粒的图谱如下：


使用说明：
1. 首次使用时请先取少量本质粒转化大肠杆菌，进行质粒小量、中量或大量抽提后再用于后续用途。抽提获得的质粒可以通过酶切电泳进行鉴定，或通过测序进行鉴定。
2. 本质粒在其多克隆位点适当酶切后可以插入待表达的目的基因，需注意插入基因片段和tag之间的读码框要一致，即需要避免发生移码突变。构建的质粒可以用常规方法转染细胞。

储存条件：-20℃。

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·M-MLV反转录酶II(RNase H-)(逆转录酶)
编号：YT394
英文名称：M-MLV reverse transcriptase II (RNase H-)
规格：2000U|10KU|50KU
本品是一种经过改造和优化的M-MLV反转录酶，具有正常的依赖于RNA或DNA模板的DNA聚合酶活性，能够以RNA或DNA为模板，在引物存在的情况下进行互补DNA链的合成，即可以进行cDNA(complementary DNA)的第一链合成。

本产品是最常用的反转录酶之一，广泛用于获得总RNA或mRNA后cDNA第一条链的合成，后续可以用于PCR、real-time PCR也称定量PCR(quantitative PCR, qPCR)、cDNA的第二链合成以及cDNA文库的构建等。本品还可以通过反转录用于DNA探针的荧光、生物素、地高*(代"辛")或同位素标记等，也可以通过引物延伸(primer extention)来分析和研究RNA。

本产品无RNase H活性，反转录效率高、产物长度长。本产品与野生型M-MLV反转录酶相比，无RNase H活性，不能选择性剪切RNA和DNA杂合双链中的RNA，从而有助于高效合成长度更长的cDNA。本产品经测试可以轻松完成长度为8 kb及以下基因的反转录(参考图1)，反转录的最大长度可以超过10kb。


使用本品反转录总RNA后，对于不同长度的cDNA进行PCR扩增后的电泳效果图。图中可见对于0.2-8kb的cDNA可以非常高效地被反转录。

本产品热稳定性高。最适反应温度为42-45℃，但当温度达到50℃时仍具有很高活性，且可获得较高产量的cDNA。


在不同温度下的反转录效果。用从NIH3T3细胞抽提获得的总RNA 500 ng，在20μl的反转录体系中按照图中所示温度进行反转录。反转录完成后取1μl反转录产品进行目的基因的PCR扩增和电泳。

本品是一种大肠杆菌重组高表达的的反转录酶，由于其表达量非常高，大大提高了本产品的性价比。本反转录酶含有从Moloney Murine Leukemia Virus reverse transcriptase基因克隆的缺失RNase H domain的pol基因，并进行了突变优化以提高其热稳定性、反转录效率和表达量。

酶活性定义：One unit of the enzyme incorporates 1 nmol of dTTP into acid-precipitable material in 10 min at 37℃ using poly(A)·oligo(dT) 12-18 as template-primer。反应体系为 50 mM Tris-HCl(pH 8.3), 75 mM KCl, 3 mM MgCl2, 10 mM DTT, 0.5mM [3H]-dTTP and 0.4 mM polyA·oligo(dT)12-18。

纯度：不含DNA内切酶、外切酶和磷酸酯酶和RNA酶，可以满足常规反转录合成cDNA第一条链等的需要。

酶储存溶液：20 mM Tris-HCl (pH 7.5), 300 mM NaCl, 0.1 mM EDTA, 1 mM DTT, 0.01% NP-40 and 50% glycerol。

失活或抑制：80℃孵育10分钟可以导致M-MLV反转录酶(RNase H-)失活；EDTA、EGTA等螯合剂、无机磷酸盐或焦磷酸盐以及聚*(polyamine)对M-MLV反转录酶(RNase H-)有抑制作用。

本产品中M-MLV反转录酶(RNase H-)的浓度为200U/μl，用于体积为20微升的反转录体系时足够进行10次反转录反应。

储存条件：-20℃。


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