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- 百奥莱博
- ALH347-UYE
- 北京
- 2025年07月07日
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949
- 英文名：
T Simple vector ligation Kit
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长期
- 供应商：
北京百奥莱博科技有限公司
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2～8℃
特别声明：本产品及我公司所售其他产品均为科研类试剂产品，严禁用于药物、医疗及其他非科研用途。
北京百奥莱博专业生产供应T Simple 载体连接试剂盒(不含多克隆位点)厂商，我公司销*(代"售")全品类的分子生物学试剂，价格优惠，欢迎广大科研工作者垂询订购。
名称：T Simple 载体连接试剂盒(不含多克隆位点)厂商
品牌：百奥莱博
编号：ALH347
产地：国产|进口
规格：20次|60次
英文名：T Simple vector ligation Kit
本试剂盒T Simple Vector是一种高效克隆PCR产物 (TA Cloning) 的专用载体。这种载体是由pBlueScript II SK(+)质粒改建而成，和传统T载体ECOR V切开后加T方法不同，T Simple载体通过改造pBlueScript II SK(+)，在原pBlueScript II SK(+)多克隆位点引入 Xcm I酶切后使其原多克隆位点两侧的3’末端直接产生未配对的T碱基，因此有更高的重组效率。同时它消除了pBlueScript II SK(+)载体上的多克隆酶切位点，需要在PCR扩增引物上导入合适的酶切位点。此时如果使用PCR扩增引物导入的酶切位点进行DNA酶切时，酶切反应将不会受到T载体上其它多克隆酶切位点上的限制酶影响，可以大大提高酶切效率，增加亚克隆成功率。此外，本公司载体连接体系还有背景低（蓝斑小于10%），重组率高（白斑中超过90%有插入片段），可快速连接等特点。本说明书末列出了T Simple 载体相关的技术资料，其全序列可参照pBlueScript II SK(+)序列，只是其多克隆酶切位点处序列稍有不同。
试剂盒组份：
T Simple Vector(30ng/μl)———————20μl
1000bp Control（30ng/μl）-——————5μl
10×PEG Enhancer-———————————50μl
10×Ligation Buffer-—————————40μl
2×Quick Ligation Buffer-———————100μl
T4 DNA ligase（5Uμl）—————————20μl
储存条件：-20℃。
本品别名：T Simple 载体连接试剂盒（不含多克隆位点）|T载体克隆试剂盒
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文献和实验℃。 另外，再设立两个对照反应，其中含有（１）只有质粒载体；（２）只有外源ＤＮＡ片段。如果外源ＤＮＡ量不足，每个连接反应可用50-100ng质粒ＤＮＡ，并尽可能多加外源ＤＮＡ，同时保持连接反应体积不超过10μl。可用至少３种不同方法来测定Ｔ４噬菌体ＤＮＡ连接酶的活性。大多数制造厂商（除New England Biolabs公司外）现在都用Weiss等，１1968)对该酶进行标化。１个Weiss单位是指在37℃下20分钏内催化１mmol32P从焦磷酸根置换到[γ,β-32P]ATP所需酶时
原理】 1.DNA片段回收方法：DNA片段在适当浓度的琼脂糖凝胶中，通上一定电压进行电泳，不同大小的DNA分子由于迁移率的不同而分离开。切下带有所需DNA片段的凝胶，用冻融法、玻璃奶回收法或商品化胶回收试剂盒将目的片段回收纯化。 2.利用Taq酶能够在PCR产物的3’末端加上一个非模板依赖的A，而T载体是一种带有3’T突出端的载体，在连接酶作用下，可以把PCR产物插入到质粒载体的多克隆位点，可用于PCR产物的克隆和测序。
热稳定性聚合酶（1，2）产生PCR产物提供一个匹配碱基。如表1总结的，这些聚合酶常常以不依赖模板方式在扩增产物的3’端加上一个脱氧腺苷酸（3，4）。pGEM®-TEasy高拷贝数载体包含有T7和SP6RNA聚合酶启动子，其侧翼和多克隆位点区相接，多克隆位点区位于β半乳糖苷酶的α肽编码区内。α肽插入失活允许在指示培养基用颜色直接筛选重组克隆。另外这两个载体的多克隆位点区的限制性酶切位点适用于采用Promega公司Erase-a-Base®系统（产品目录号#E5750）产生一系列巢式缺失
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