T4 RNA连接酶2(截短型)批发

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百奥莱博专业生产销*(代"售")T4 RNA连接酶2(截短型)批发，我公司供应的分子生物学试剂品类齐全，且具有优势价格，欢迎新老客户垂询订购。

名称：T4 RNA连接酶2(截短型)批发
英文名：T4 RNA Ligase 2(truncated)
编号：BTN130856
品牌：百奥莱博
产地：国产|进口
T4 RNA连接酶2(截短型)，又称T4 RNL2截短型，可特异性地将DNA或RNA的预腺苷酰化5´末端连接到RNA 3´末端。该酶连接时不需要ATP，但需要预腺苷酰化底物。该酶的表达来自E.coli质粒，该质粒编码T4 RNA连接酶2基因的前249个*基酸。与全长的T4 RNA连接酶2不同，T4 RNL2截短型不能将底物的5´末端腺苷酰化，因此无法将RNA或DNA的5´磷酸末端连接到RNA 3´端。该酶可用于microRNA克隆中接头连接的优化，因为此酶只能利用腺苷酰化的引物，因此，可以降低连接背景。其结构式如下图：


产品用途：
1．将5´预腺苷化的DNA或RNA连接到任何 RNA 3´末端；
2．将单链腺苷化引物连接至小RNA上，用于cDNA克隆文库构建；
3．将单链腺苷化引物连接至RNA上，用于链特异cDNA文库构建；
4．无单链和双链DNA核酸外切酶、核酸内切酶、RNase以及磷酸酶的污染。

储存条件：低温运输，-20℃保存，有效期一年。

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·血液RNA提取试剂盒
编号：BTN3071
英文名称：Blood RNA Extraction Kit
规格：50次
本试剂盒是专门从全血样品中快速提取总RNA的试剂盒，主要用于提取全血细胞的总RNA(提取血浆病毒RNA 需使用病毒RNA提取试剂盒，提取纯化后的白细胞RNA可使用动物RNA提取试剂盒)。

试剂盒特点：
1. RNA 无明显降解和DNA污染，OD260/280 均在1.9以上。血液RNA的产量与动物种类和动物的状态(如有疾病与否)有很大关系，人全血产量为2-6μg/mL，兔全血产量为5-10μg/mL。
2. 操作简单，直接使用新鲜的或冷冻的抗凝全血样品，不需裂解红细胞等任何预处理步骤，整个提取过程只需要十多分钟，可以全在室温下进行。
3.处理量大，每管的样品处理量可以达到1.5mL，高于进口的同类产品。
4.与常用的抗凝剂(包括肝素，EDTA，柠檬酸*，草酸*)兼容，得到的RNA可以直接用于RT-PCR和Northern杂交等研究。

试剂盒组成：

 

成分	50T
溶液A	50ml
溶液B	15ml
溶液C	25ml
溶液D	25ml
说明书	1份

储存条件：常温运输，4℃保存，溶液B和溶液C有腐蚀性。4℃保存的溶液A可能会产生白色沉淀，用前需65℃水浴加热直到沉淀溶解。有效期一年。

使用方法：
1. 将0.2-1.5mL 新鲜或解冻后的抗凝全血加入到1.5mL塑料离心管中，15000g室温离心3分钟，弃上清(血浆)。如果此时血液细胞沉淀体积大于0.2mL，则需要减少血液的使用量，具体减少量需根据具体情况决定，因为各个个体(尤其是患者)血液中白细胞数目差别很大。如果提取0.1mL以下的微量血液样品最好加入百奥莱博的微量助沉剂RNApp。
2. 将1mL溶液A加入到血液细胞沉淀中，用移液枪吹打沉淀使细胞裂解。
3. 将0.3mL的溶液B和0.2mL *仿加入离心管，剧烈震荡30秒。
4. 13000-15000g室温离心5分钟，将上清液(为无色或浅红色，约0.5-0.9mL)转移到另一干净离心管中。为防止污染，最好留100μl左右的上清液。下层有机相一般呈深红色，中间层为白色，含有DNA，蛋白质和其他细胞破碎物，避免触及或吸取。
5. 加入0.5mL的溶液C和0.2mL的*仿到上清液中，用手上下剧烈摇晃30秒。
6. 13000-15000g室温离心3分钟，将上清液(无色，约1mL)转移到另一干净离心管中，避免触及或吸取有机相及其上面的白色膜状物(蛋白质)。可以按每次吸取100-200μl的方式分批转移。
7.在上清液中加入1/2 体积的溶液D，用手上下剧烈摇晃30秒，溶液将呈白色浑浊状。
8. 13000-15000g室温离心5-30分钟，小心移弃上清液，避免触及管底大量的白色RNA沉淀。
9.在离心管中加入1mL 75%乙醇，振荡器上振荡混均30秒。室温离心13000-15000g 1分钟，RNA 此时在管底形成细小沉淀。小心吸弃上清液，注意不要吸弃RNA沉淀。
10. 重复第9 步的75%乙醇清洗步骤一次。
11. 短暂快速离心数秒使管壁上残留液体沉到管底(约50μl)，用移液枪小心吸弃，注意不要吸弃沉淀。此步十分重要，因为残留的乙醇会影响后续反应。
12.室温短暂放置2分钟，立即加入适量(一般为10-30μl)溶解液使RNA沉淀溶解。建议使用具有灭活残留RNase 功能的新型RNA 溶解液液相RNase Scavenger 而不要使用经典的DEPC 水。千万不要用真空离心法使RNA沉淀过于干燥，否则RNA将变得十分难溶。RNA样品可以直接使用，也可以存放于-80℃长期保存。

疑难解答：
1．有的样品在第4 步离心后有很厚的中间层，上清很少。原因是蛋白质变性不充分，可以适当减少血液的用量。白细胞多的血液容易产生这种情况。
2．有的样品在加入溶液D离心后，沉淀上浮在液面，这是由于液体的比重大于沉淀，可以加入少量的超纯水使溶液的比重降低，直到沉淀能下去为止。也可能把下层的有机相取上来了，如果这样需要重做。
3．千万不要用真空离心法使RNA沉淀过于干燥，否则将变得十分难溶。
4．无论使用甲醛变性胶还是非变性胶电泳时，一定要使用RNA变性/上样液(如百奥莱博的RNAload)以让RNA 充分变性，否则加样孔中会有RNA复合物(人们会误以为是DNA污染)。使用没有变性能力的DNA上样液不能使RNA 复合物分离。
5．测OD时一定要使用pH8.0的缓冲液(如TE)，不要使用微酸性的DEPC水，否则OD 值会比真实的值低15-20%。


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·Masson三色染色试剂盒
编号：BTN131272
英文名称：Masson Staining Kit
规格：6×100mL
Masson三色染色又称马松染色，是结缔组织染色中最经典的一种方法，是胶原纤维染色权威而经典的技术方法。所谓三色染色通常是指染胞核和能选择性的显示胶原纤维和肌纤维。该法染色原理与阴离子染料分子的大小和组织的渗透有关：分子的大小由分子量来体现，小分子量易穿透结构致密、渗透性低的组织；而大分子量则只能进入结构疏松的、渗透性高的组织。然而，淡绿或**(代"胺")蓝的分子量都很大，因此Masson染色后肌纤维呈红色，胶原纤维呈绿色(淡绿)或蓝色(**(代"胺")蓝)，主要用于区分胶原纤维和肌纤维。

产品特点：
➤染色稳定。
➤ 分化时间短，一般仅需1～2秒。
➤ 色彩清晰鲜艳。
➤适用范围广，适宜于组织的石蜡切片、冰冻切片等染色。
➤ 所染切片保存时间长且不易褪色。

试剂盒组成：

成分	规格
溶液A	100mL
溶液B	100mL
溶液C	100mL
溶液D	100mL
溶液E	100mL
溶液F	100mL
使用手册	1份

储存条件：常温运输，室温避光保存，有效期一年。

使用方法：
1．切片常规脱蜡至水，如用Zenker液固定，应进行除汞处理。
2．用溶液A染色5～10分钟。
3．在95%乙醇中洗2次。
4．用溶液B(酸性乙醇分化液)分化，分化时间应根据切片厚薄、组织的类别和新旧而定。
5．在流水中洗，蒸馏水洗。
6．在溶液C中复染5分钟。


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·福林酚试剂
编号：BTN100939
英文名称：Folin Phenol Reagent
规格：100mL
福林酚试剂又叫Folin-Ciocalteau酚试剂，其本身并不含酚，而是磷钼酸和磷钨酸混合物，它是由美国科学家Folin和Ciocalteau在1929年发明，主要用于检测含酚成分。后被Lowry用于蛋白定量，现主要作为Lowry蛋白定量法的成分使用。
注：福林酚试剂跟福林试剂不同，后者是1,2-*醌-4-磺酸*。

储存条件：常温运输和保存，有效期一年。

·环孢霉素A
编号：BTN120687
英文名称：Cyclosporin A Solution
规格：1mL
本产品为浓度为10mg/mL的环孢霉素A溶液。环孢霉素A(Antibiotic S 7481F1；环孢多肽A ；环孢灵；山地明)，分子式: C62H111N11O12 ，分子量:1202.61 ，CAS号: 59865-13-3，环孢霉素A是由11个*基酸组成的环状多肽，它的第1、2、3、11位*基酸残基上可形成亲水性免疫抑制活性位点。

储存条件：低温运输，-20℃避光保存，有效期6个月。

·IPTG干粉
编号：BTN100884
英文名称：IPTG Powder
规格：2.5g
IPTG学名为异丙基-β-D-硫代半乳糖苷；分子式为C9H8O5S，分子量为238.31，CAS号为367-93-1。本产品为白色或类白色结晶。溶于水和乙醇。

储存条件：低温运输、-20℃保存、有效期两年。

·β-半乳糖苷酶活性检测试剂盒
编号：BTN130599
英文名称：β-galactosidase Assay Kit
规格：24样
本产品是分光光度法测定β-GAL活力的，测定原理为β-GAL分解对-硝基*(代"*")-β-D-吡喃半乳糖苷生成对-硝基*(代"*")酚，后者在400nm有最大吸收峰，通过测定吸光值升高速率来计算β-GAL活性。

β-半乳糖苷酶广泛存在于动物、植物、微生物和培养细胞中，能够催化β半乳糖苷化合物中的β半乳糖苷键水解，此外还具有转半乳糖苷的作用。β-GAL不仅可为植物的快速生长释放储存的能量，还能在正常的多糖代谢、细胞壁组分代谢以及衰老时细胞壁降解过程中催化多糖、糖蛋白以及半乳糖脂末端半乳糖残基的水解，释放自由的半乳糖。

试剂盒组成：

成分	规格
酶提取液	50ml
溶液A	粉剂1瓶
溶液B	15ml
溶液C	50ml
说明书	1份

储存条件：低温运输，4℃保存，其中试剂A需-20℃保存，有效期半年。

使用方法：
正式测定前务必取2-3个预期差异较大的样本做预测定

一、酶液提取
1．细菌或培养细胞：先收集细菌或细胞到离心管内，离心后弃上清；按照细菌或细胞数量(104个)：酶提取液体积(mL)为500～1000：1的比例(建议500万细菌或细胞加入1mL酶提取液)，超声波破碎细菌或细胞(冰浴，功率20％或200 W，超声3秒，间隔10秒，重复30次)；15000g 4℃离心10分钟，取上清，置冰上待测。
2．组织：按照组织质量(g)：酶提取液体积(mL)为1：5～10的比例(建议称取约0.1 g组织，加入1mL酶提取液)，进行冰浴匀浆。15000g 4℃离心10分钟，取上清，置冰上待测。

二、 测定操作步骤
1．分光光度计预热30分钟以上，调节波长至400nm，蒸馏水调零。
2．取出试剂A，临用前向试剂瓶中加入5mL蒸馏水，充分溶解备用，制备成溶液A工作液(用不完的溶液A仍需-20℃保存)。
3．样本测定(在EP管中依次加入下列试剂)：

试剂名称	对照管(μl)	测定管(μl)
样本	50	50
蒸馏水	200	0
溶液A工作液	0	200
溶液B	250	250
迅速混匀，放入37℃准确水浴30分钟
溶液C	1000	1000
充分混匀，400nm处测定吸光值A，计算ΔA=A测定-A对照。每个测定管需设一个对照管。

三、酶活性计算公式
标准条件下测定的回归方程为y=0.00543x -0.0027；x为标准品浓度(nmol/mL)，y为吸光值。
注：V反总：反应总体积，0.5mL；V样：反应中样本体积，0.05mL；V样总：加入酶提取液体积，1mL；Cpr：样本蛋白浓度，mg/mL；W：样本质量，g；500：细胞或细菌总数，500万；T：反应时间，30分钟。
1．按照样本蛋白浓度计算：
 酶活性定义：每mg 组织蛋白每分钟产生1nmol对-硝基*(代"*")酚定义为一个酶活力单位。
 β-GAL活力(nmol/min/mg prot)=[(ΔA+0.0027)÷0.00543×V反总]÷(V样×Cpr)÷T=61.39×(ΔA+0.0027)÷Cpr
 如果需要另外测定，建议使用本公司BCA蛋白质含量测定试剂盒。
2．按照样本鲜重计算：
 酶活性定义：每g组织每分钟产生1nmol对-硝基*(代"*")酚定义为一个酶活力单位。
 β-GAL活力(nmol/min/g鲜重)＝[(ΔA+0.0027)÷0.00543×V反总]÷(W×V样÷V样总)÷T=61.39×(ΔA+0.0027)÷W
3．按细菌或细胞密度计算：
 酶活性定义：每1万个细菌或细胞每分钟产生1nmol 对-硝基*(代"*")酚定义为一个酶活力单位。
 β-GAL活力(nmol/min/104cell)=[(ΔA+0.0027)÷0.00543×V反总]÷(500×V样÷V样总)÷T=0.123×(ΔA +0.0027)

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