北京质谱兼容型蛋白银染试剂盒厂商

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北京百奥莱博科技有限公司专业生产供应北京质谱兼容型蛋白银染试剂盒厂商，产品信息：

类别：蛋白质研究

英文名：MS-Comp*(代"a")tible Silver Stain for Protein

产品名	产品编号	包装规格
质谱兼容型蛋白银染试剂盒	BTN100811	10次

编号：BTN100811

规格：10次

产地：国产|进口

品牌：百奥莱博

银染是目前检测PAGE电泳分离后的蛋白质的最灵敏的方法，MS(质谱)是确定未知蛋白最常用和最快捷的方法，但将银染得到的蛋白直接用于MS分析有很多问题，其中最主要问题是常规银染所使用的试剂(包括强氧化剂和醛类)容易使蛋白质发生化学修饰，这样MS分析得到的*基酸信息跟蛋白质实际的*基酸信息并不相同。为了使银染得到的蛋白质可以用于MS分析，为此本公司开发MS 兼容型银染试剂盒。

 

产品特点：

1．跟MS 兼容，原理是避免使用能化学修饰蛋白质的试剂，所得蛋白质没有发生化学修饰，故可直接用于后续的MS(包括MALDI-TOF-MS和ESI-MS)分析。

2．银染的灵敏度比考马斯亮蓝染色高100倍左右，可达0.2-0.6ng蛋白质/条带。

3．可用于各种PAGE胶，包括变性PAGE胶(如SDS-PAGE，尿素-PAGE)，非变性PAGE胶，IEF胶(等电电泳胶)，2D胶等。

4．四种溶液都是现用现配，实验结果的可重复性好。

 

产品组成：

 

成分	规格
溶液A组分一干粉	1份
溶液A组分一溶剂	100ml
溶液A组分二干粉	10份
溶液B干粉	5g
溶液C组分一干粉	10份
溶液C组分二	2ml
溶液D干粉	10份
说明书	1份

 

储存条件：常温运输及保存，有效期一年。

 

准备工作：

所有溶液均需现配现用。以下按一块PAGE胶需要200mL溶液配制，用户可以根据自己PAGE胶的大小增减溶液的用量。

一、用自备试剂配制400mL固定液(按一次银染需要固定2次计算，每次固定需200mL固定液)

将160mL甲醇、40mL乙酸和200mL去离子水充分混合后即得400mL固定液。

二、配制200mL溶液A

先配制溶液A组分一储备液：将溶液A组分一干粉加入到100mL溶液A组分一溶剂中，充分摇晃溶解即得溶液A组分一储备液。此溶液可以4℃保存。将60mL甲醇、8mL溶液A组分一储备液、1 份溶液A组分二(干粉)和132mL 去离子水充分混合后即得200mL溶液A。

三、配制200mL溶液B

称0.5g溶液B干粉，溶于200mL 去离子水中，充分混合后即得200mL溶液B。

四、配制200mL溶液C

将1 份溶液C(干粉)溶解在200mL 去离子水中(干粉不容易溶解，需搅拌)即得溶液C。注意：使用前还需要再加入160μL溶液C组分二并充分混匀。

五、配制200mL溶液D

将1 份溶液D(干粉)溶解在200mL 去离子水中即得溶液D。

 

银染：

1．PAGE电泳(包括非变性PAGE，SDS-PAGE，尿素-PAGE，2D-PAGE，IEF-PAGE等)结束后，将PAGE胶转移到装有200mL 固定液的瓷盘或玻璃盘中，摇晃30分钟以去除干扰银染的组分(如甘*酸、SDS、尿素、DTT、甘油等)，倒掉固定液。注：此步很重要，否则银染背景很高。

2．重复上步一次。

3．将PAGE胶转移到200mL溶液A中，室温摇晃30分钟。

4．用200mL 去离子水漂洗3次，每次5分钟(不要延长或缩短)。

5．将PAGE胶转移到200mL的溶液B中，室温摇晃20分钟。

6．用200mL 去离子水漂洗2次，每次1分钟(不要延长或缩短)。

7．将PAGE胶转移到200mL的溶液C中，室温摇晃直到蛋白电泳条带显现(一般需要10分钟左右)。

8．将PAGE胶转移到200mL的溶液D中，室温摇晃终止反应。

9．用200mL 去离子水漂洗3次，每次5分钟(不要延长或缩短)。

10．切下条带或胶块进行后续的脱银，原位trypsin酶解，多肽沉淀和MS分析(略)。

 

技术资料：

MS前处理步骤(仅供参考)

1．脱银：将切下的银染斑点或条带用脱银液(30mM K3Fe(CN)3和100mM Na2S2O3的1：1的混合液)处理直到黑色消失。

2．还原：将胶块或胶条置于10mM DTT(溶剂为50mM NH4HCO3)，56℃处理一小时。

3．烷化：将胶块或胶条置于55mM 碘乙酰胺(溶剂为50mM NH4HCO3)，室温避光处理45分钟。

4．原位trypsin酶解：将胶块或胶条置于10 ng/uL 测序级别的trypsin溶液中(溶剂为25mM NH4HCO3)，37℃处理过夜。

5．多肽提取：用5%三*乙酸抽提酶解液，再用2.5%三*乙酸-50%ACN 混合液抽提酶解液，上清真空干燥，沉淀(多肽)最后溶于0.5%三*乙酸中。

6．MS分析：参考相关MS仪器使用手册。

北京质谱兼容型蛋白银染试剂盒厂商专业优质供应商：北京百奥莱博科技有限公司

关键词：质谱兼容型蛋白银染试剂盒,BTN100811,MS-Comp*(代"a")tible Silver Stain for Protein

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编号	类别	名称
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BTN130819	其他细胞生物学试剂	Bouin固定液
BTN70603	DNA纯化	土壤腐殖酸清除剂
BTN151103A	核酸电泳和回收	超级电泳液(含染料)
BTN120654E	核酸电泳和回收	Southern DNA Marker Oligo(生物素标记)
BTN100832	蛋白质研究	四氮唑蓝(NBT)
BTN120685	克隆与表达	先锋霉素溶液
BTN90602I	核酸电泳和回收	DNA marker(φX174 DNA/Hinc II)
BTN131048	蛋白质研究	胆酸*
BTN90801B	克隆与表达	一站式TA克隆试剂盒(含感受态细胞)
BTN131196	工具酶	Therminator II DNA聚合酶
BTN130602	工具酶	Vent DNA聚合酶
BTN130616	工具酶	Bsu DNA聚合酶，大片段
BTN130637	工具酶	Tma核酸内切酶III
BTN131190	核酸电泳和回收	糖原溶液(10mg/mL)(分子生物学级)
BTN131056	蛋白质研究	TCEP溶液(0.5M)
BTN90604C	探针标记及检测	PCR法DNA探针地高*(代"辛")标记试剂盒
BTN80206	核酸扩增(PCR)	两管式RT-PCR试剂盒(MMLV-Taq)

 

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