BTN17-0270型限制性内切酶SpeI(BcuI)现货供

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名称：BTN17-0270型限制性内切酶SpeI(BcuI)现货供应
英文名：Spe I(Bcu I) Restriction Endonuclease
编号：BTN17-0270
产地：国产|进口
规格：400U
Spe I限制性内切酶识别位点：
5´...A↓C T A G　T...3´
3´...T　G A T C↑A...5´

产品组成：

 

成分	规格
Spe I，10U/μL	40μl
Buffer B，10×	1ml
使用手册	1份

储存条件：低温运输，-20℃保存，有效期一年。

贮存Buffer：Spe I储存液组成为：10mM Tris-HCl(pH7.5 at 25℃)，300mM KCl，1mM DTT，0.1mM EDTA，0.2mg/mL BSA and 50% glycerol。

1×Buffer B：33mM Tris-acetate(pH7.9 at 37℃)，10mM magnesium acetate，66mM potassiu*(代"m") acetate，0.1mg/ml BSA。

活性定义：一个活性单位是指50μl反应体系中，37℃条件下，1小时内将1μg的对照组 DNA完全分解所需的酶量。对照组DNA为插入Spe I识别位点的pUC19载体。

热灭活：80℃孵育20分钟不能灭活该酶。

使用方法：
1．单酶切DNA：
①在离心管中加入下列溶液：

成分	用量
Spe I	0.5-2μL
10× Buffer B	2μL
DNA(0.5-1μg/μL)	1μL
nuclease-free water	16L

②轻柔混匀，短暂离心。
③37℃孵育1-16小时。
2．双酶切或多酶切DNA：
需选择适当的可以兼容两个或多个内切酶的缓冲液(一般Buffer B可作为双酶切Buffer)，然后参考上表设置反应体系。如果没有合适的缓冲液可以选择，可以在一种酶消化完毕后进行纯化，纯化完毕后再进行另外一种酶切反应。
3．直接酶切PCR产品：
①在离心管中加入下列溶液：

成分	用量
PCR reaction mixture	10μL(~0.1-0.5μg of DNA)
nuclease-free water	18μL
10×Buffer B	2μL
SpeI	1-2μL

②轻柔混匀，短暂离心。
③37℃孵育1-16小时。

我公司的BTN17-0270型限制性内切酶SpeI(BcuI)现货供应，性价比高，货期短，送货上门，欢迎您来电咨询购买，另外，我公司还生产供应销*(代"售")下列产品：

·DNA拓扑异构酶 I
编号：BTN120414
英文名称：DNA Topoisomerase I
规格：100U
DNA拓扑异构酶I来源于小牛胸腺，与来源于原核生物的酶性质不同，在无Mg2+的条件下也具有活性。而且，原核生物的DNA Topoisomerase I只作用超螺旋分子的负链，而本酶则能使来源于超螺旋分子正负链均形成松散型，DNA Topoisomerase I催化4种反应：
➤ 使环状超螺旋分子的超螺旋解开。
➤在单链环状DNA分子内形成绳结(Knotting)和解开绳结(Unknotting)。
➤ 催化具有互补碱基序列的环状单链DNA形成双链闭环状DNA分子。
➤ 2个环状双链DNA分子之中的一个存在DNA链的切口时，发生两个分子的连结反应(Catenation)或者逆反应(Decatenation)。

产品组成：

成份	规格
DNA拓扑异构酶I(5000U/mL)	20μL
10×Buffer	1mL
BSA,10mg/mL	10mL
使用手册	1份

储存条件：低温运输，-20℃保存，有效期一年。

活性定义：1单位指在25μl反应体系，37℃条件下，15分钟内能催化超过95%的0.5μg pUC19RFI型(负超螺旋)DNA 松弛所需要的酶量。DNA超螺旋化通过不含*化乙啶的琼脂糖凝胶电泳来检测。

热灭火：65℃加热20分钟。

注意事项：
➤ pBR322 DNA和φX174 DNA的RF I(超螺旋分子)用DNA Topoisomerase I反应后电泳，胶中含*乙锭(EB)时，反应前后DNA带的位置不发生变化。这是因为由DNA Topoisomerase I作用而转换为松散型的DNA受EtBr的影响，再次变为超螺旋状态。因此，使用Topoisomerase I反应后，一般使用不含EB的琼脂糖凝胶电泳，电泳终了后再用EB染色。
➤ 如果在10×添附Buffer中直接加入0.1%小牛血清白蛋白溶液，会产生大量的白色沉淀。因此，在反应液调制时需按以下顺序添加试剂：dH2O→10×反应缓冲液→0.1% BSA→底物DNA。
➤ BSA在-20℃下易产生沉淀，应尽量避免多次反复冻融。短期使用请在4℃下保存。产生稍许沉淀不影响反应效果。


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·植物RNA柱式提取试剂盒2.0
编号：BTN90404
英文名称：Plant RNA Column extraction kit 2.0
规格：50次
本试剂盒是柱式植物RNA提取试剂盒(BTN71203)与柱式DNA清除剂(BTN90318)整合后得到的升级产品，它解决了提取的植物总RNA中出现基因组DNA污染这一难题，提取的RNA通过PCR验证不含基因组DNA污染。

试剂盒特点：
1. 操作简单快速，处理一个样品只需要约十几分钟。
2. RNA纯度更高，平均 OD260/280一般都在2.0左右，能够有效去除大多数植物中的多糖污染。
3. 所提取RNA不含基因组DNA污染(电泳及PCR均检测不到)。
4. 得到的RNA可直接用于RT-PCR、Northern杂交、cDNA合成等实验。
5. 性价比高于进口的柱式植物RNA提取产品。
6. 本试剂盒方法提取不到总RNA中的miRNA。

试剂盒组成：

成分	规格
溶液A	50ml
溶液B	15ml
溶液C	50ml
离心吸附柱	50套
通用洗柱液	100ml
膜反应液	2.5ml
RNase-free DNase(1U/μL)	0.5ml
RNA洗脱液	10ml

储存条件：常温运输，4℃保存(DNase 需要-20℃保存)，有效期一年。

使用方法：
1. 估算组织细胞的用量。每次微量提取一般需要100-200mg植物叶片、或50-100mg植物种子、或200-500mg植物果实。
2. 先将新鲜植物组织剪切成小块(保存在RNAhold中的植物组织需用纸吸去RNAhold液体后再剪切成小块)，放入10-15mL塑料离心管中，加入1mL 65℃预热的溶液A(用前需要摇晃混匀)，然后用匀浆器匀浆5-20秒。匀浆时会产生泡沫，但不影响提取效果。也可以使用液氮研磨法破碎植物组织，研磨完后加入1mL溶液A，但效果比较差，因为研钵本质是二氧化硅，在溶液A存在时会吸附RNA。
3. 将匀浆物或研磨物转移至干净的1.5mL塑料离心管中(可以不必转移非液体的细胞碎片)。有的植物组织(比如果实)含有大量水份，匀浆液会多于1mL，转移时也只取1mL。
4.在离心管中加入0.3mL的溶液B和0.2mL自备*仿，在振荡器上振荡30秒混匀，此时溶液呈均匀的乳浊状。振荡器振荡时必须使管底溶液震荡起来。
5.室温12000rpm离心3～5分钟，两相间将有约5毫米厚的细胞破碎物。
6. 将上清液(约0.6mL)转移到另一干净的1.5mL塑料离心管中，下层有机相和中间层含有DNA、蛋白质和其他杂质，避免触及或吸取。最好留下100μL上清液不取。
7. 加入跟上清液等体积的溶液C，充分颠倒混匀。如果有沉淀产生(对某些植物，属于正常现象)，千万不要去掉沉淀，一定要把所有的混合物上柱。
8. 将一半的混合液(含沉淀物，如果有的话)转移到离心吸附柱中，12000rpm室温离心半分钟，弃穿透液。
9. 将剩下的一半的混合液(含沉淀物，如果有的话)转移到同一离心吸附柱中，12000rpm室温离心半分钟，弃穿透液。
10. 加0.7mL通用洗柱液，12000rpm室温离心半分钟，弃穿透液。再加0.3mL通用洗柱液，12000rpm室温离心半分钟，弃穿透液。一般样品如此洗涤两次即可，但对于在第7步加入溶液C后有沉淀产生的样品，则需要洗三次，每次加入的通用洗涤液的量分别为0.4、0.3和0.3mL，其他操作不变。
11. 12000rpm室温离心10秒以便去除残留液体。此步很重要，否则残留的通用洗柱液会抑制后续反应中DNase的活性。
12. 将10μL(10 U)的RNase-free DNase加入到50μL 37℃预热的DNA膜反应液中，吹打混匀配制成DNase工作液。
13. 将DNase工作液在37℃预热1分钟，然后全部加入到离心吸附柱中，室温放置5分钟。注意：5分钟一般足够降解大多数情况下的DNA污染。如果DNA没有彻底降解(可能由于样品中残留的杂质抑制了DNase的活性)，此步的保温时间可以适当延长到10分钟或15分钟。
14. 直接在离心吸附柱中加0.7mL通用洗柱液，盖上盖后颠倒数次混匀。
15. 12000rpm室温离心半分钟，弃穿透液。
16. 再加0.3mL通用洗柱液到离心吸附柱中，12000rpm室温离心半分钟，弃穿透液。
17. 12000rpm室温离心半分钟。此步十分重要，否则残留的乙醇(通用洗柱液中的成分)会影响RNA的使用。
18. 将离心吸附柱转移到RNase-free收集管中，加入30-50μL RNA洗脱液，室温放置1-2分钟。
19. 12000rpm室温离心半分钟，离心管中溶液即为RNA样品。本产品提供的离心吸附柱吸附力较强，一次洗脱不能全部将膜上RNA洗下，如有必要，可以再加入30-50μL RNA洗脱液一次。
20. 所得RNA溶液可以立即使用或存放于-80℃待用。如果要进行甲醛变性电泳检测。如果使用非变性胶电泳，则必须使用RNAload上样液。千万不能使用DNA上样液(因为它一般没经过去RNase处理)。



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SJ0678 Marker Ⅳ

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