北京AMV逆转录酶厂家

特别声明：本产品及我公司所售其他产品均为科研类试剂产品，严禁用于药物、医疗及其他非科研用途。

百奥莱博专业生产销*(代"售")北京AMV逆转录酶厂家，我公司供应的分子生物学试剂品类齐全，且具有优势价格，欢迎新老客户垂询订购。

名称：北京AMV逆转录酶厂家
编号：BTN90502
英文名：AMV Reverse Transcriptase
产地：国产|进口
品牌：百奥莱博
AMV逆转录酶分离自禽类成髓细胞瘤病毒(AMV)，其方法由Houts等人的方法改进而来。分离得到的酶是分子量为157KD的αβ全酶。本酶经高度纯化，完全无核酸酶污染。本酶可用于cDNA合成，也可用于RNA和DNA的双脱氧测序。AMV逆转录酶以总RNA或polyA+ RNA为模板，具有以RNA为模板的DNA聚合酶活性，DNA为模板的DNA聚合酶活性和RNase H酶活性，最适反应温度在42-55℃，最高可达60℃，如果使用焦磷酸*，最适温度为37-41℃。按照标准使用方法可以得到长至10-12 kb cDNA。本AMV逆转录酶比普通AMV逆转录酶和MMLV逆转录酶能耐受更高的温度和合成更长的cDNA。

产品特点：
1．高灵敏度,可以1ng的总RNA进行cDNA合成。
2．反应温度可升高到60℃，可有效打开RNA二级结构，适用于二级结构复杂的RNA模板。
3．可合成长至10-12kb的cDNA。
4．可用于first strand cDNA合成、RT-PCR、RNA测序和双脱氧法DNA测序、引物延伸和DNA片段的3´-末端标记。
5．本酶具有内源性的RNase H活性，所以最好不要用于cDNA文库的构建。

产品组成：

 

成分	规格
AMV 逆转录酶(10U/μL)	20μl
5×AMV Buffer	200μl
说明书	1份

储存条件：低温运输，-20℃保存，有效期一年。

活性定义：以poly(rA)为模板，以oligo(dT)12-18 为引物，在37℃温度下，在10分钟将1nmol的dTMP掺入入到多核苷酸中所需酶量为一个单位。

使用方法：(合成1st-strand cDNA)
1．按下表配制RT反应体系:

加入物	加入量
总RNA 或poly(A)mRNA 或专一的RNA	500-2000ng 50-500ng 0.05pg-500ng
注：RNA样品不能有基因组DNA污染。
Oligo(dT)18(0.5ug/μL) 或随机引物(0.2ug/μL) 或RNA模板专一性引物	1μL 1μL 15-20pmol
注：随机引物于RNA模板的比例跟最后得到的cDNA的平均长度成反比
RNase-free水	补水到11μL

2．70℃保温5分钟后立即冰浴。
3．严格按下表顺序加入各成分：

5×AMV Buffer(本产品提供)	5μL
RNase Inhibitor(40U/μL,自备)	1μL
焦磷酸* 40mM(预热到42℃)	2.5μL
dNTP(10mM each,自备)	2.5μL
AMV逆转录酶	1-3μL(=10-30U)

4．补水使反应终体积为25μL。
5．42℃保温60分钟(对Oligo dT引物或模板专一引物)或37℃保温60分钟(对随机引物)。如果不使用焦磷酸*，反应温度可以提高到42-55℃，最高可达60℃。
6．70℃保温10分钟以终止反应，放置在冰上待用。合成的cDNA可以直接作为PCR模板使用，不需要纯化。50μL Taq DNA聚合酶催化的PCR体系中最多可以使用25μL的RT产物，一般使用10μL AMV催化的RT产物即可。

除北京AMV逆转录酶厂家外，我公司正在打折促销以下产品：

·Dicer(RNase III)
编号：BTN130676
规格：200U
Dicer(RNase III)能在含有锰离子的反应缓冲液中，将较长双链RNA切割成一组由18-25bp组成的小片段干扰RNA(siRNA)，更适合用于哺乳动物细胞的RNA干扰实验。用1.5个单位(1μl)的Dicer(RNase III)能够将1μg的dsRNA完全切割成siRNA，其反应图如下：


产品特点：
1．为RNA干扰研究提供siRNA；
2．基因沉默；
3．靶标确认；
4．去除dsRNA；
5．无核酸内切酶和外切酶污染。

储存条件：低温运输、-20℃保存，有效期两年。

活性定义：1单位指50μl的反应体系中，37℃条件下，20分钟将1μg dsRNA切割成siRNA所需要的酶量。

·革兰氏阳性菌DNA提取试剂盒(Southern级)
编号：BTN130951
英文名称：Gram positive bacteria DNA extraction kit(Southern Grade)
规格：10次
Dicer(RNase III)能在含有锰离子的反应缓冲液中，将较长双链RNA切割成一组由18-25bp组成的小片段干扰RNA(siRNA)，更适合用于哺乳动物细胞的RNA干扰实验。用1.5个单位(1μl)的Dicer(RNase III)能够将1μg的dsRNA完全切割成siRNA，其反应图如下：


产品特点：
1．为RNA干扰研究提供siRNA；
2．基因沉默；
3．靶标确认；
4．去除dsRNA；
5．无核酸内切酶和外切酶污染。

储存条件：低温运输、-20℃保存，有效期两年。

活性定义：1单位指50μl的反应体系中，37℃条件下，20分钟将1μg dsRNA切割成siRNA所需要的酶量。

·柱式质粒DNA提取试剂盒
编号：BTN60205
英文名称：Plasmid DNA column extraction kit
规格：50次
本试剂盒是用于质粒DNA小量制备与纯化的试剂盒。菌体先经碱裂解法处理，再通过离心吸附柱，专一结合DNA，最后洗去杂质，高效快速提取质粒DNA，全*(代"套")操作可以在30分钟之内完成。使用本试剂盒可从1-5mL过夜培养的菌液纯化得到高达20μg的高纯度质粒DNA(OD260/OD280 = 1.8-2.0)，可以直接用于酶切、转化、测序及PCR等。

试剂盒特点：
1.快速、步骤少，整个操作在半个小时之内完成。
2. 不需要预平衡离心吸附柱。
3. 洗柱液即开即用，不需要额外加乙醇。
4. 纯度高，采用本试剂盒提取的质粒OD 比值在1.8-2.0 之间。
5.产量高，每毫升过夜培养的细菌可以提取到2-5μg/mL。
6. 用途广，适用于低拷贝和高拷贝质粒。
7. 价格低，比多数国内同类产品的价格更便宜。

试剂盒组成：

成分	规格
溶液A	13ml
溶液B	13ml
溶液C	18ml
RNase A溶液(10mg/mL)	0.15ml
通用洗柱液	50ml
DNA洗脱液2.0	10ml
离心吸附柱，6层	50只
说明书	1份

储存条件：常温运输和保存，RNase A 需要-20℃保存，有效期一年。

使用方法：
1. 先将全部RNase A溶液全部加入到溶液A中，摇匀后再取用，未用完的溶液A最好在4℃保存。
2.从筛选平板上挑取单菌落至含抗生素的培养基中，37℃震荡培养12-16小时(摇床转速200-300)。注意：建议使用LB培养基，营养更丰富的培养基会使菌体浓度过高，超过纯化系统处理能力而降低DNA 质量。另外，延长培养时间有利于提高质粒DNA浓度，但是菌液培养过长时间会因细胞死亡、裂解而造成质粒DNA浓度降低。
3. 用1.5mL离心管收集1-4mL 过夜培养饱和菌液，室温12000rpm离心1分钟，弃上清，再短暂离心，吸弃残留液体。
4. 加入250μL溶液A，用枪头充分吹打使菌体重悬(此步在冰上操作效果更佳)。
 注意：细胞未充分悬浮会影响后续操作，可以使用漩涡振荡器帮助混匀或使用Tip 吸头吹打沉淀至完全混匀。
5. 加入250μL溶液B(如果溶液B有沉淀，用前须37℃加热溶解后冷却到室温方可使用)，温和反复颠倒混匀4-6次，看到溶液变粘即可，然后冰上放置不超过4-5分钟。注意：此步处理不能超过5分钟，否则DNA的碱损伤比较严重。同时千万不要剧烈振荡，否则基因组DNA 断裂产生的片段非常容易污染质粒DNA。溶液B用后需要将盖拧紧存放，否则空气中的二氧化碳会进入溶液，形成碳酸，中和溶液B中的NaOH，降低其效率)。
6. 加入350μL 冰上预冷的溶液C，反复颠倒混匀4-6次，可见白色沉淀物产生，然后冰上放置至少5分钟。
7. 最高转速(12000rpm以上)4℃离心5分钟，小心将上清液转移到离心吸附柱中。由于此时的溶液比重较大，有时候出现沉淀漂浮是正常现象，取上清时避开漂浮的沉淀即可。如果此步的离心在室温进行，更容易出现沉淀物漂浮的现象。
8. 静置2分钟以让质粒DNA与吸附柱充分结合，此步十分重要。
9.室温12000rpm离心1分钟，弃收集管中的废液。
10. 加入500μL的通用洗柱液，室温12000rpm离心1分钟，弃收集管中废液。
 注意：通用洗柱液中含乙醇，用后需要将盖拧紧存放，否则乙醇会挥发。
11. 重复上步1次。
12.室温12000rpm离心1分钟，甩干残留液体。此步不能省略，否则残留乙醇会影响DNA的后续使用(如DNA上样时不能沉淀到加样孔中)。
13. 将离心吸附柱置于一个新的1.5mL塑料离心管(自备)中，加入30-100μL65-80℃预热的DNA 洗脱液2.0，室温放置2分钟。常温的DNA 洗脱液2.0也可以用于洗脱，但产量稍微有所降低。
14.室温12000rpm离心1分钟，离心管底溶液即质粒DNA。
15. 由于百奥莱博的吸附柱结合DNA 能力较强，如果再加适量DNA 洗脱液2.0 到离心吸附柱中，往往还能洗脱下很多质粒DNA(相当于第一次洗脱的20-30%)，但注意不要使用上步得到的DNA洗脱液2.0来洗脱。


北京AMV逆转录酶厂家关键词：BTN90502,AMV Reverse Transcriptase,AMV逆转录酶


·柱式藻类RNA大量提取试剂盒
编号：BTN120504
英文名称：Algae RNA Column large-scale extraction kit
规格：5次
本试剂盒是在本公司柱式藻类RNA提取试剂盒(BTN120503)的大提升级产品，跟柱式藻类RNA提取试剂盒相比，它具有下列特点：
1.样品处理量大，最多可以处理50mL液体藻类培养物。
2. 操作简单快捷，整个过程只需要约30分钟。
3. RNA 纯度高，OD260/280一般都在2.0左右，可直接用于RT-PCR、Northern杂交、microarray hybridization、cDNA 合成等。
4. RNA产量高，一般在20-70μg/mL液体藻类培养物(约2.0×107个细胞)。非酶细胞破裂法，适用于各种形态的藻类和各个种属的藻类。

试剂盒组成：

成分	规格
溶液A	50ml
溶液B	50ml
溶液C	150ml
溶液D	50ml
大提离心吸附柱	5套
通用洗柱液	100ml
RNA 洗脱液	10ml
说明书	1份

储存条件：常温运输，4℃保存，有效期一年。

使用方法：
1. 将50mL液体藻类培养物在塑料离心管中5000-7,000rpm 4℃离心1分钟，并弃尽液体培养基(可以分多次离心)。
2. 加入10mL溶液A并充分吹打混匀。注意：溶液A存放时容易产生沉淀，如果有沉淀，用前请置于65℃融化并充分摇晃均匀。
3. 加入10mL溶液B，剧烈振荡30秒。
4. 65℃保温5分钟。注意：不要超过5分钟，否则RNA 容易降解。
5. 5000-7,000rpm 4℃离心3～5分钟，转移上清到一自备的、干净的50mL塑料离心管中。
6.在上清液中加入2mL自备的*仿，充分振荡30秒混匀。
7. 4℃ 5000-7,000rpm离心3～5分钟，转移上清液到一自备的、干净的50mL塑料离心管中。
8. 加入相当于上清液(约10mL左右)3倍体积的溶液C和1倍体积的溶液D，充分混匀。如果上清为10mL，则加入30mL溶液C和10mL溶液D。
9. 将混合液分多次转移到离心吸附柱中，每次转移后需要室温放置2-3分钟以让RNA跟吸附膜充分结合，然后5000-7,000rpm室温离心30-60秒，弃收集管中的穿透液，然后再加入后一批混合液，重复操作，直到混合液全部挂柱。
10. 第一次洗涤：将10mL 通用洗柱液加到离心吸附柱中，室温离心半分钟，弃收集管中的穿透液。
11. 第二次洗涤：一次洗涤一般足够去除杂质，但如果样品OD260/280 比值不高，可以再用10mL 通用洗柱液重复上步洗涤一次。
12.室温离心空柱子(带收集管)半分钟。此步十分重要，否则残留的通用洗柱液会影响RNA的使用。
13. 将离心吸附柱转移到一自备的RNase-free 50mL塑料离心管中，加入1mL RNA 洗脱液。
14.室温离心半分钟，离心管中溶液即为RNA样品，可以立即使用或存放于-80℃待用。
15. RNA完整性的电泳检测：
注意：普通DNA上样液不含变性剂，更没经过去RNase处理，所以最好不要用于RNA电泳。
16. RNA产量和纯度产率测定：
将5-10μL RNA 溶于TE缓冲液中(pH7.5-8.2 之间)检测其在OD260的光吸收。通过光吸收可以得出RNA浓度(1 OD260的RNA=40μg/mL)，进而计算出RNA的产量(浓度×体积)和产率(RNA产量/细菌用量)。注意不要将RNA 稀释在DEPC 水中检测OD260和OD280，否则光吸收比在TE中测得的低10%-15%；也不要稀释过度，使OD读数在仪器的有效范围之外，这样得到的OD 比值没有意义。

疑难解答：
Q：上样孔里的红色荧光物一定是污染的基因组DNA 吗？
A：不是。用TAE或TBE电泳液和非变性胶电泳RNA时容易产生此现象，百奥莱博初步研究发现大部分红色荧光物是变性不充分的单链RNA 通过碱基互补或通过硼*(代"酸")络合(如果使用TBE作电泳液的话)形成的复合物，加RNase处理后，这些红色荧光物一般会消失。为避免此现象，建议最好使用甲醛变性胶电泳。如果需要使用非变性胶，也必须在上样前使RNA变性。使用百奥莱博优化的上样/变性/染色三用溶液RNAload可以使RNA在非变性胶上电泳时也有较好分辨率。使用非变性胶时，可以使用TAE或超快电泳液SuperBuffer-2，最好不要使用TBE缓冲液，因为TBE中的硼*(代"酸")能与RNA的多羟基形成复合物，RNA 很难形成锐利的条带。
Q：如何确认和去处除污染的基因组DNA？
A：如果怀疑有DNA污染，可以用RNase处理RNA样品，然后再电泳。如果上样孔里的红色荧光物不消失，则表示是基因组DNA污染。进一步确认可以使用PCR扩增法。去除污染的DNA可以使用5分钟柱式DNA 清除剂、非酶的DNA 去除剂DNA Scavenger或RNase-free DNase，由于RNase-free DNase一般都有残留的RNase污染，所以必须严格按照厂家提供的使用说明书进行操作。


北京AMV逆转录酶厂家关键词：BTN90502,AMV Reverse Transcriptase,AMV逆转录酶


·非冻型拭子DNA保存液(含专用拭子)
编号：BTN80802B
英文名称：DNAhold Swab RNA non-freezing preservation
规格：100mL
本品拭子是一种常用的的生物样品取材方法，可以用于PCR等分子生物学分析。拭子取材的主要特点是快捷和非介入性(不会对对象造成伤害)，尤其适用于大规模筛查取样和特殊群体(如儿童)和组织(如口腔)的取样。但是，对于野外采集的拭子样品和跨区域采集的拭子样品，如何保存并运输到统一处理中心一直是一个非常棘手的问题，本产品就是为这一需要而开发的。

产品特点：
1. 常温保存时间长达半年，方便了拭子样品的野外采集和长途运输。
2. 使用广泛，适用于各种拭子样品，包括口腔拭子、鼻腔拭子、阴道拭子等。
3. 价格实惠，提供的试剂足够保存200个拭子样品。
4.跟各种纤维棉拭子兼容。但使用本公司专用拭子效果更佳(因为所有优化都是在此专用拭子的基础上完成的，80801B包装含200只专用拭子)。
5. 保存的拭子可以用柱式拭子DNA提取试剂盒(BTN80801)提取其DNA，从一个拭子一般可以提取到0.5μg左右的DNA。
6.一个样品可以用一个微型离心管保存，最大程度地避免了样品间的交叉污染。
7. 试剂本身安全环保无毒。

产品组成：

成分	100ml(A型)	100ml(B型)
非冻型拭子DNA保存液	100ml	100ml
专用拭子	无	200只
说明书	1份	1份

储存条件：室温运输及保存，有效期两年。

使用方法：
1. 将0.5mL非冻型拭子DNA 保存液加入到自备的1.5mL塑料离心管中待用。
2. 用拭子涂抹口腔内表面、鼻腔表面或其他待取样器管的表面约十次。
3. 将拭子放入到加有的1.5mL塑料离心管中，剪去专用拭子柄部，留药棉头于离心管中，盖上离心管管盖后即可长期保存、运输。
4. 提取拭子DNA的步骤见柱式拭子DNA提取试剂盒(BTN80801)。

我公司正在打折促销工具酶全系列产品，恭候您的咨询选购北京AMV逆转录酶厂家。