一站式蛋白质非变性PAGE电泳套装(中pH)报价

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百奥莱博专业生产销*(代"售")一站式蛋白质非变性PAGE电泳套装(中pH)报价，我公司供应的分子生物学试剂品类齐全，且具有优势价格，欢迎新老客户垂询订购。

名称：一站式蛋白质非变性PAGE电泳套装(中pH)报价
产地：国产|进口
规格：30次
品牌：百奥莱博
编号：BTN81212B
非变性聚丙*(代"烯")酰胺凝胶电泳(Native PAGE)是目前电泳法分离活性蛋白的主要方法之一，跟SDS-PAGE根据分子量大小分离蛋白质不同，它是根据蛋白质分子大小、形状、电荷密度三个主要参数分离蛋白质。由于蛋白质的pI各不相同，所以对不同蛋白质需要选用具有不同pH的电泳体系。单独配制不同pH的Native PAGE电泳胶十分繁琐，为此本公司开发了本产品。

产品特点：
1．即开即用，不需单独准备各种成分，十分方便。还免去了实验人员接触粉末状的剧毒物品丙*(代"烯")酰胺
2．非变性，电泳过程中蛋白质保持天然的构象和亚基之间的相互作用，得到的蛋白质一般都具有生物活性(而SDS-PAGE得到的蛋白没有活性)。
3．可用于分析蛋白质和DNA或RNA的相互作用、蛋白修饰、蛋白构型改变、回收有活性蛋白质等试验。
4．电泳后可直接用于考染、银染、Western杂交等实验。
5．提供具有3种不同pH的缓冲液套装，便于客户选择最适合的缓冲液体系。

产品组成：

 

成分	规格
丙*(代"烯")酰胺干粉	60g
甲叉双丙*(代"烯")酰胺干粉	3g
TEMED	1.5ml
过硫*(代"酸")铵干粉	1g
高中低缓冲液套装选一	ABC之一(见下)
说明书	1份
高pH缓冲液套装(只有BTN81212A有此成分)
高pH浓缩胶配胶液(pH6.7)，4×	100ml
高pH分离胶配胶液(pH8.9)，4×	200ml
高pH电泳液(pH8.3)	10L(干粉)
高pH上样液，5×	1ml
中pH缓冲液套装(只有BTN81212B有此成分)
中pH浓缩胶配胶液(pH5.5)，4×	100ml
中pH分离胶配胶液(pH7.5)，4×	200ml
中pH电泳液(pH7.0)干粉A	55.2g
中pH电泳液(pH7.0)干粉B	10g
中pH上样液，5×	1ml
低pH缓冲液套装(只有BTN81212C有此成分)
低pH浓缩胶配胶液(pH6.7)，4×	100ml
低pH分离胶配胶液(pH4.3)，4×	200ml
低pH电泳液(pH4.5)	10L(干粉)
低pH上样液，5×	1ml

注：高、中和低pH缓冲液套装里面均含100mL浓缩胶配胶液、200mL分离胶配胶液、10 L电泳液(干粉)和1mL上样液，只是pH不同。

储存条件：常温运输和保存(上样液需-20℃保存)，保存期为一年。

使用方法：
如何选择缓冲液?
高pH浓缩胶，高pH分离胶，高pH电泳液和高pH上样液一定要配套使用。中pH和低pH系列也是如此，绝不能高pH的成分跟其他pH的交叉使用。选择适当pH的缓冲液(包括上样液，电泳液，配胶液等)对蛋白质非变性PAGE非常重要，缓冲液的最佳pH又跟目的蛋白质的pI值密切相关。如果pH远离pI，则蛋白质分子带电多(电荷密度大)，电泳速度快，分辨率高。但过酸过碱又容易使蛋白质结构变性，失去活性，所以最佳pH条件就是在电泳分辨率和维持活性之间寻找平衡，需要针对每种蛋白质进行摸索或通过滴定曲线来确定，没有通用的电泳缓冲体系。由于有近半数的蛋白质pI在4-6.5，所以在不知道目标蛋白的pI时，可以先选用高pH缓冲系统。

一、配制分离胶
1．确定浓度。对分子量在100Kd以上的蛋白质，可选用3-5%的胶；对分子量在20-150KD之间的蛋白质，可选用5-10%的胶；对分子量在10-80KD之间的蛋白质，可选用10-15%的胶。对未知样品，建议使用7.5%的胶。
2．配制10%的APS(过硫*(代"酸")铵)：按每0.1克过硫*(代"酸")铵干粉加1mL去离子水的比例配制10%的APS溶液，该溶液可以在4℃存放一周。
3．配制30%丙*(代"烯")酰胺-甲叉双丙*(代"烯")酰胺(19:1)溶液:在本产品提供的装有60克丙*(代"烯")酰胺干粉的塑料瓶中加入146mL自备的去离子水和3g甲叉双丙*(代"烯")酰胺,充分摇晃直到溶解(约需10-20分钟)即得200mL 30%丙*(代"烯")酰胺(19:1)溶液。此溶液最好在一个月内用完，必须4℃避光保存。
4．配10mL分离胶(如果配制其他体积,请按比例调节各成分用量):在一个25mL的三角瓶中，先加入4.2mL去离子水、3.3mL 30%丙*(代"烯")酰胺-甲叉双丙*(代"烯")酰胺(19：1)溶液和2.5mL 4×分离胶配胶液。
5．摇晃混匀后抽真空10-15分钟以去除溶液中的氧气(氧气能抑制丙*(代"烯")酰胺聚合反应，不去除的话将影响丙*(代"烯")酰胺聚合反应)。
6．加入50μL新配制的10%APS和10μL TEMED(这是配制10mL胶的用量，配制更大体积的胶则按比例增加)，迅速摇匀后倒胶。注意：如果购买的是低pH缓冲系统，由于在低pH缓冲液中PAGE聚合速度降低，所以需要增加上述两成分的用量。
7．在胶面距离顶部1-1.5 cm的时候停止灌胶。然后覆盖一层1-5 mm厚的水，使胶顶部液面平整。由于比重不同，水和丙*(代"烯")酰胺溶液不会混合。
8．室温聚合30-60分钟后，用1×分离胶配胶液洗涤凝固的胶的顶部，待用。

二、配制浓缩胶(浓缩胶可以提高分辨率，适合于成分复杂的样品，一般使用浓度为4%。使用浓缩胶时蛋白质泳动速度主要跟其尺寸和形状相关。因浓缩胶pH跟分离胶pH不同，蛋白质可能会发生聚合和沉淀。对成分单一的样品，可以不用浓缩胶，此时蛋白的泳动速度主要跟其电荷密度，尺寸和形状相关。)
1．配10mL浓缩胶(如果配制其他体积,请按比例调节各成分用量):在一个25mL的三角瓶中，先加入6.2mL去离子水、1.3mL 30%丙*(代"烯")酰胺-甲叉双丙*(代"烯")酰胺(19：1)溶液和2.5mL 4×浓缩配胶液。
2．摇晃混匀后抽真空10-15分钟以去除溶液中的氧气(氧气能抑制丙*(代"烯")酰胺聚合反应，不去除将影响丙*(代"烯")酰胺聚合反应)。
3．按上表用量加入50μL 10%APS和15μL TEMED(这是配制10mL胶的用量，配制更大体积的胶则用量需按比例增加)，迅速摇匀后在已经凝固的分离胶上倒胶。
4．在液面达到顶部时停止灌胶，插入梳子。
5．室温聚合30-60分钟，拔出梳子，用1×电泳液冲洗加样孔。

三、电泳
1．将凝胶板固定在电泳装置上，往上槽和下槽加入足够1×电泳液。注：本产品提供10升的三种不同pH的电泳液干粉中的一种，低PH和高PH值电泳液用前需将所有干粉溶解在1 L水中得10×电泳液，可以室温放置，用时再稀释成1×电泳液。一般不需要再调节pH，但保险起见，可以用pH试纸测试一下1×电泳液。高中低pH电泳缓冲液的pH分别是8.3，7.0和4.5。
 注意：中pH值的电泳液干粉只能配1x电泳液，否则不溶解。称取中pH电泳液(pH7.0)干粉A，5.52g,中pH电泳液(pH7.0)干粉B 1g混匀，加去离子水至彻底溶解，调PH7.0，定容至1L。客户根据可实际需要量按比例增减。
2．连接电极。如果浓缩胶和分离胶的pH高于目标蛋白pI，目标蛋白将带负电荷并向阳极移动，可以按标准的SDS-PAGE方法接通电极(上阴极下阳极)；如果浓缩胶和分离胶pH低于目标蛋白pI，目标蛋白将带正电荷并向阴级移动，此时应该下阴极上阳极。
3．300V预电泳直到电流不再降低(约需要30分钟)以去除残留过硫*(代"酸")铵。
4．换电泳液。
5．在液体蛋白质样品中加入5×上样液(16μl液体样品加4μL上样液)后上样。0.75 mm厚的胶可以上10μl，1.5 mm厚的胶可以上20μl。在未用加样孔中也要加1×上样液以防有样品的空道的样品扩散。注意：如果用考染检测，每个孔的蛋白最好在50-100μg总蛋白，如果银染则只需要1ug即可。样品如果是蛋白质沉淀，可用1×上样液直接溶解蛋白质沉淀后再上样。蛋白质溶液或沉淀中不能含有能够改变上样液pH的残留成分(如蛋白质沉淀剂TCA)，用前最好用pH试纸测试一下，不在上样液的pH范围时就用酸或碱调到正常范围。大量样品可用透析法调pH。
6．上样自备的天然PAGE蛋白质标准或等电电泳的标准品(如果有的话)。
7．用15 mA(对0.75 mm厚的胶)或30mM(对1.5mm厚的胶)的电流电泳直到染料移动到分离胶底部。微型胶一般需要1-2小时。注意：电泳过程最好在冷室或有冷却系统，以免电泳产热使蛋白质变性。
8．终止电泳，取出凝胶进行后续的实验处理(如染色或酶活性检测)。

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E0602 脱纤维裂解大牛血(无菌) 100ml/500ml
ARB13187 小鼠胰岛素样生长因子结合蛋白1(IGFBP-1)代做ELISA实验 Mouse insulin-like growth factor binding protein 1,igfbp-1 ELISA KIT
可溶型单组分TMB底物溶液 
ZCSXQ01 鼠血清 100ml
ARB10440 人甲状腺结合球蛋白(TBG)尿液中含量检测 Human thyroxine-binding globulin assay,tbg ELISA KIT
三(2-羧乙基)膦盐*(代"酸")盐 Glutathione Reductase from baker"s yeast 51805-45-9
Weil髓鞘染色液   4×50ml
9039-53-6 尿激酶 Urolinase
9041-35-4 Sephadex G-25 medium(葡聚糖凝胶G-25)
19-119kDa预先染色分子量MARK U 5′-P
PY04-075  *霉素溶液  10mg/支×10支  "  每支添加于100ml孟加拉红琼脂培养基基础中。
ARB10628 人血清白蛋白(HSA)ELISA代测服务 Human sreum albumin,hsa ELISA KIT
木聚糖酶 SPA 9025-57-4
ARB13415 鸡B因子(BF)含量测试 Chicken factor b,bf ELISA KIT
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·无内毒素质粒DNA大量提取试剂盒
编号：BTN81107
英文名称：Endotoxin-free plasmid DNA large-scale extraction kit
规格：5次
本试剂盒是整合大提质粒DNA提取试剂盒和菌体内毒素清除剂两产品而成。菌体内毒素清除剂是我司独家推出的产品，在质粒提取前就把细胞壁上的内毒素清除掉，彻底避免了目前通用的先提取DNA+内毒素混合物，再从中纯化质粒DNA的弊端。用本产品提取的质粒DNA，内毒素的污染浓度低，适合于转染等对内毒素的污染敏感的实验。

试剂盒特点：
1. 操作简单，只在经典的柱式质粒DNA提取前，增加菌体内毒素清除一步。
2. 去内毒素效果好，处理一次可以去除99%以上的内毒素。
3.质粒丢失少，产率只比柱式质粒DNA提取试剂盒低5-10%，效果好于先提质粒DNA，再用液相内毒素清除剂处理的方法。
4. DNA可以直接用于转染等实验。

试剂盒组成：

成分	规格
菌体内毒素清除剂	200ml
溶液A	25ml
溶液B	25ml
溶液C	35ml
RNase A溶液(10mg/mL)	300μl
吸附柱活化液	12.5ml
大提离心吸附柱	5套
通用洗柱液	100ml
DNA洗脱液3.0	10ml
说明书	1份

储存条件：RNase A溶液需4℃或-20℃保存，其余成分可室温保存，如有沉淀可加热溶解后再使用。

使用方法：
1. 用50mL塑料离心管收集不超过40mL的E.coli 饱和菌液，5000rpm离心5-10分钟，弃上清，得到细菌沉淀。
2. 加入10mL菌体内毒素清除剂，温和混匀后5000rpm离心5-10分钟，弃上清(含内毒素)。
3. 重复上述操作3次，得到的菌体将丢失了绝大部分细胞表面的内毒素。
4. 往细菌沉淀中加入5mL溶液A(第一次使用时需要将RNase A溶液全部加入并混合均匀，未用完的部分放4℃保存)，充分振荡悬浮。注意：充分重悬细胞沉淀(无块状物)对于获得高的质粒产量十分重要。
5. 加5mL溶液B，温和翻转10 余次至透明。若混合液不透明，应减少细菌的用量或室温放臵5-10分钟直到裂解液变透明。注意: 避免剧烈振荡，否则细菌基因组DNA 将断裂为小片段，与质粒难以分离，污染质粒DNA。
6. 加入冰浴的7mL溶液C，颠倒混匀，冰上放臵10分钟。混合物中将有白色絮状物形成。注意不要过分振荡。
7.在等待期间，活化离心吸附柱。在离心吸附柱中加入2.5mL活化液，套上收集管后室温放臵2分钟，然后5000rpm离心2分钟，倒弃穿透液，再将吸附柱套上收集管后待用。活化后的离心吸附柱必须立即使用。如果不活化，质粒得率将低20-40%左右。
8. 6000rpm离心10分钟。如果离心管承受能力强，离心速度还可以适当提高以充分沉淀絮状物。
9. 将上步得到的上清液移入到大提离心吸附柱中，放入50mL收集管中。室温放臵5分钟左右以便让质粒DNA跟膜结合。
10. 6000rpm离心5分钟，质粒DNA 将与大提离心吸附柱中的膜结合。弃穿透液。
11. 将10mL通用洗柱液加入到离心吸附柱中，室温静臵2分钟后6000rpm离心5分钟，弃穿透液。
12. 重复上步一次。
13.室温6000rpm 空甩5分钟，弃穿透液。注意：此步很重要，不能跳过，否则残留乙醇会影响后续实验。
14. 将大提离心吸附柱放入一个干净的50mL塑料离心管中，加0.5mL DNA洗脱液3.0(洗脱液如加热到50-65℃效果更佳)，室温静臵2分钟后6000rpm离心5分钟，收集液即是质粒DNA溶液。
15. 重复上步3-4次可洗脱更多的质粒DNA。DNA 洗脱液3.0 不够可以用TE或超纯水替代。
16. 合并所得质粒DNA，立即使用或-20℃储存。

注意事项：
1．细菌培养时间一般为12-16小时，但接种量大时应减少时间。过度培养会降低质粒的质量甚至导致质粒DNA突变。
2．注意溶液A：溶液B：溶液C的比例为5：5：7。若细菌量增大，需按比例放大这些溶液的使用量。
3．随菌体增多应延长溶液B的作用时间，直至溶液成粘稠透明状。但时间过长会导致质粒DNA变性。
4．加溶液C后形成的白色沉淀中有变性的蛋白质、细菌基因组DNA和细胞碎片，离心后应避免带入到后续处理中。
5．通用洗柱液洗涤离心柱后必须甩干一次，否则残留通用洗柱液中的乙醇会干扰后续实验。
6．质粒的具体产量跟细菌量、质粒拷贝数、质粒大小和操作规范程度密切相关。一般1.5mL 过夜培养菌体可收获约10μg高拷贝质粒。
7．纯化的质粒在电泳中表现为2-3 条带有时甚至为4-6 条带均属正常，未分开的环套质粒，易被误判为基因组DNA。


一站式蛋白质非变性PAGE电泳套装(中pH)报价关键词：BTN81212B,一站式蛋白质非变性PAGE电泳套装,一站式蛋白质非变性PAGE电泳套装(中pH),One-Stop Protein Native PAGE Pack(B)

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吩嗪乙基硫*(代"酸")盐 3,5-Dihydroxytoluene 10510-77-7
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2-脱氧-2,2-二*-D-赤型-1-呋*(代"喃")酮糖-3,5-二*甲酰酯 Acetylene tetrabromide 122111-01-7
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A3601-15 马血清 100ml|500ml
LB Lennox固体培养基粉剂   1L
ARB13469 鸡免疫球蛋白E(IgE)elisa检测 Chicken immunoglobulin e,IgE ELISA KIT

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