即用型BSA蛋白标准品系列品牌

特别声明：本产品及我公司所售其他产品均为科研类试剂产品，严禁用于药物、医疗及其他非科研用途。

百奥莱博专业生产销*(代"售")即用型BSA蛋白标准品系列品牌，我公司供应的分子生物学试剂品类齐全，且具有优势价格，欢迎新老客户垂询订购。

名称：即用型BSA蛋白标准品系列品牌
品牌：百奥莱博
英文名：Instant BSA Standard
编号：BTN131072
规格：7×1mL
本产品为预稀释型BSA蛋白标准品。性质稳定，过滤除菌，是配合BCA试剂和Bradford试剂测定蛋白浓度时的理想选择。

产品特点：
1．七个数据点，浓度范围为125-2000微克/毫升。
2．本产品可用于快速制备标准曲线或者微孔板曲线。
3．使用方便，无需自己准备梯度稀释液。
4．产品稳定，消除时间差异和操作差异。

产品组成：

 

成分	规格
BSA溶液，125μg/mL	1ml
BSA溶液，250μg/mL	1ml
BSA溶液，500μg/mL	1ml
BSA溶液，750μg/mL	1ml
BSA溶液，1000μg/mL	1ml
BSA溶液，1500μg/mL	1ml
BSA溶液，2000μg/mL	1ml
说明书	1份

储存条件：低温运输，-20℃保存，有效期两年。

使用举例：BCA法微孔板测定蛋白质浓度
1．取各个稀释浓度的BSA蛋白标准品和待测蛋白质样品各25μL，加入到微孔板中。
 注：如果样品有限，则可取标准品和待测未知样品10μL。
2．在每一个孔中加入200μL BCA测定工作液(本试剂盒不提供)，并在震荡器上震荡30秒，使其充分混合。
3．将微孔板密封，在37℃孵育30分钟。
4．将微孔板冷却到室温。使用微孔板读数仪，测量样品在562nm或该波长附近的吸光值。
5．将各个标准品和待测蛋白质样品在562nm处的吸光值减去空白标准品在 562nm处的平均吸光值。
6．将BSA标准品在562nm处经过空白校正的平均吸光值对其浓度(μg/mL)作图，绘制标准曲线。
 注：如果使用与微孔板读数仪相关联的曲线拟合算法，四参数(二次方程)或最佳曲线拟合将会比简单的线性拟合提供更加准确的结果。如果手工对这些结果作图，对于标准曲线上的各个点，采取点对点描画曲线的方法，比直接进行线性拟合的结果更好。

注意：若采用Bradford法、BCA试管法等其他方法测定蛋白浓度，实验步骤略有差异，详细操作方法请参考蛋白质浓度测定实验工具书。

欲咨询购买即用型BSA蛋白标准品系列品牌，请致电北京百奥莱博科技有限公司，为您提供最全面周到的产品服务，除此之外，我公司正在促销以下产品：

·生物素标记UTP溶液(Biotin-16-UTP )
编号：BTN151203
英文名称：Biotin-dUTP Solution
规格：25μL

·微量蛋白沉淀试剂盒
编号：BTN81217
英文名称：Mini Protein Precipitation Kit
规格：50次
本产品用于微量沉淀浓缩蛋白质样品，其原理是通过酸使蛋白质变性，溶解度降低，在离心条件下沉淀，而达到蛋白变性、蛋白浓缩、蛋白去盐的目的。他们还有一个重要的用途是去除污染的盐离子和其他小分子。

产品特点：
1. 操作方便迅速，只需要混匀后离心，不需要其他仪器。
2.产品稳定，可室温长期放置。
3.可以处理各种液体样品(如细胞或细菌培养物，细胞裂解物，蛋白质提取物等等)。
4.浓缩效果强，可浓缩浓度低达1μg/mL的蛋白。
5.可用于含SDS的样品，但灵敏度稍低(5μg/mL)。
6. 得到的蛋白质可用于后续的SDS-PAGE、免疫沉淀和质谱分析等实验。但蛋白已经变性，没有活性。

试剂盒组成：

成分	规格
溶液A	0.5ml
溶液B	1ml
溶液C	50ml
说明书	1份

储存条件：常温运输和保存，有效期一年。

使用方法一：用于不含SDS的样品，但样品蛋白浓度不能低于1μg/mL
1、将100μL需要沉淀浓缩的蛋白样品转移到一个自备的1.5mL塑料离心管中。
2、加入10μL溶液A，涡旋激烈震荡10-30秒混匀。
3、冰上放置15分钟。
4、加入10μL溶液B，轻轻混匀。
5、冰上放置60分钟。
6、4℃12000～15000×g离心10分钟。
7、小心移弃上清液，保留蛋白沉淀。
8、加入1mL 冰浴的溶液C，震荡混匀后4℃12000～15000×g离心15分钟。
9、小心移弃上清液，保留蛋白沉淀。
10、短暂离心，小心移弃残留上清液后，将有蛋白沉淀的离心管敞开放置在冰上，空气晾干。一般需要10分钟左右。
11、样品放4℃保存或立即电泳检测。可直接用1×SDS-PAGE上样液或其他电泳缓冲液溶解蛋白沉淀，取适量上样。如果蓝色的*酚蓝染料变黄，则说明有残留酸性物质TCA污染，必须加少量自备的1M Tris-HCl(pH8.8)缓冲液，直到颜色变成蓝色为止，否则将影响电泳结果。

使用方法二：用于含SDS的样品，但样品蛋白浓度不能低于5μg/mL
1、将200μL需要沉淀浓缩的蛋白样品(浓度不低于5μg/mL)转移到一个自备的1.5mL塑料离心管中。
2、加入8μl溶液B，涡旋激烈震荡10-30秒混匀。
3、冰上放置30分钟或-20℃放置15分钟(过夜放置更好)。
4、4℃ 12000～15000×g离心15分钟。
5、小心移弃上清液，保留蛋白沉淀。
6、加入1mL冰浴的溶液C，震荡混匀后4℃ 12000～15000×g离心15分钟。
7、小心移弃上清液，保留蛋白沉淀。
8、短暂离心，小心移弃残留上清液后，将有蛋白沉淀的离心管敞开放置在冰上，空气晾干。一般需要10分钟左右。
9、样品放4℃保存或立即电泳检测。可直接用1×SDS-PAGE上样液或其他电泳缓冲液溶解蛋白沉淀，取适量上样。如果蓝色的*酚蓝染料变黄，则说明有残留酸性物质TCA污染，必须加少量自备的1M Tris-HCl(pH8.8)缓冲液，直到颜色变成蓝色为止，否则将影响电泳结果。


即用型BSA蛋白标准品系列品牌关键词：BTN131072,Instant BSA Standard,即用型BSA蛋白标准品系列


·农杆菌EHA101感受态细胞
编号：BTN161205
英文名称：E.coli EHA101 Rosetta Competent Cell
规格：10×100μL
 EHA101菌株为C58型背景，核基因中含有筛选标签-利福平抗性基因rif，为了便于转化操作，此菌株携带一无自身转运功能的胭脂碱型Ti质粒pEHA101(pTiBo542DT-DNA)，此质粒含有vir基因，vir基因是T-DNA 插入植物基因组必需的元件。pEHA101(pTiBo542DT-DNA)质粒自身的T-DNA转移功能被破坏，但可以帮助转入的双元载体T-DNA顺利转移。pEHA101(pTiBo542DT-DNA)型Ti质粒含有筛选标签：kan，赋予EHA101菌株卡那霉素抗性，适用于玉米、水稻、烟草等植物的转基因操作。

 本公司生产的EHA101化学转化感受态细胞经特殊工艺制作，pK7WGF2质粒(壮观霉素抗性)检测转化效率>104cfu/μg DNA。EHA101农杆菌的基因型是：C58(rifR)TipEHA101(pTiBo542 D T-DNA)(kanR)Nopaline。

产品组成：

成分	规格
EHA101 农杆菌感受态细胞	0.1ml×10
pKWGF2(10ng/uL)	10μl
说明书	1份

储存条件：干冰运输，-80℃保存，有效期一年。

自备试剂：质粒DNA、液氮等。

使用方法：

转化前准备
1. 冰水浴和37℃水浴。
2.液氮或干冰/乙醇混合物。
3. 将抗性平板在28℃培养箱中平衡至少15分钟。
转化方法
1. 取-80℃保存的农杆菌感受态于室温或手心片刻待其部分融化，处于冰水混合状态时插入冰中。
2. 每100μL感受态加1μg(体积不大于10μL)质粒DNA，用手拨打管底混匀，依次于冰上静置5分钟、液氮5分钟、37℃水浴5分钟、冰浴5分钟。
3. 加入700μL无抗生素的LB或YEB液体培养基，于28℃振荡培养2～3小时。
4. 6000rpm离心一分钟收菌，留取100μl左右上清轻轻吹打重悬菌块涂布于含相应抗生素的LB或YEB 平板上，倒置放于28℃培养箱培养2-3天(当平板只含有转化所用双元载体抗生素时，28℃培养48小时即可；平板中同时加入双元载体抗生素，20μg/ml rif时，需28℃培养60小时；如果使用的平板含有50μg/ml rif 则需要28℃培养72-90小时)。

注意事项：
1、加入质粒时体积不应大于感受态体积的1/10；质粒不纯或存在乙醇等有机物污染，转化效率急剧下降；质粒增大一倍，转化效率下降一个数量级。
2、混入质粒时应轻柔操作。转化高浓度的质粒可相应减少最终用于涂板的菌量。
3、平板上阳性克隆密度过大时，由于营养不足，阳性克隆生长变慢，菌落变小，为了获得大的菌落，应减少质粒用量。
4、利福平浓度不应高于25μg/mL，过高的利福平浓度不利于农杆菌生长，会降低其生长速度和转化效率。本公司EHA101感受态计算转化效率时所用平板只含有50μg/mL kan，若所用平板含有20μg/mL rif 则转化效率降低到1/2。
5、培养基中加入利福平的目的是防止杂菌生长、筛选农杆菌；根据所用菌株抗性加入链霉素或庆大霉素可防止Ti质粒丢失，但链霉素不利于农杆菌的转基因操作，所以一般培养农杆菌时不考虑链霉素或庆大霉素，Ti质粒丢失的概率极低(可以忽略)。


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·Ficoll-Paque介质
编号：BTN131136
规格：100mL
本产品含Ficoll PM400、EDTA等成分，它化学惰性，其密度和浓度经过优化，专门用于从外周血中分离淋巴细胞的密度梯度离心介质，同时能保持B和T淋巴细胞的活性和完整性。内毒素含量低于0.2EU/mL。所得淋巴细胞可以用于DNA提取、RNA提取和其他体外实验。

储存条件：常温运输和保存，有效期一年。

·一站式MBP标签蛋白纯化套装
编号：BTN130871
英文名称：One-Stop MBP-Tagged Protein Miniprep Pack
规格：2mL
MBP(麦芽糖结合蛋白，Maltose Binding Protein)标签蛋白大小为40 kDa，由大肠杆菌K12的malE基因编码。MBP可增加在细菌中过量表达的融合蛋白的溶解性，尤其是真核蛋白。如果蛋白在细菌中表达，MBP可以融合在蛋白的N端或C端。MBP融合蛋白可通过交联淀粉亲和层析一步纯化，结合的融合蛋白可用10mM麦芽糖在生理缓冲液中进行洗脱。如果要去除MBP融合部分，可用位点特异性蛋白酶切除。可用MBP抗体或表达的目的蛋白特异性抗体检测MBP标签标记的重组蛋白。由于MBP融合蛋白原核表达载体具有表达效率高，易于纯化等优点。在现代分子克隆中MBP常作为融合蛋白被广泛应用。本产品就是专门用于分离纯化MBP融合蛋白的试剂盒，其原理如下：


产品特点：
1．一站式套装，含所需的直链淀粉和琼脂糖介质、溶液和层析柱，操作非常方便。
2．提供 2mL直链淀粉-琼脂糖介质，其最大载量为10mg MBP蛋白/mL介质。
3．采用麦芽糖温和洗脱，无去污剂和变性剂对蛋白活性的影响。
4．本介质可以反复使用多次。

试剂盒组成：

成分	规格
直链淀粉-琼脂糖介质	2ml
1 M Tris-HCl(pH7.4)	25ml
0.1 M EDTA溶液	25ml
2 M NaCl溶液	50ml
蔗糖	20g
PMSF(10mg/mL)	1ml
0.1mM MgCl2溶液	50ml
0.1 M麦芽糖溶液	25ml
层析柱(6mL)	1支
说明书	1份

储存条件：常温运输和保存，但介质需4℃保存，PMSF需要-20℃保存，有效期一年。

使用方法：
1．将直链淀粉-琼脂糖介质充分混匀后，取适量加入到预放了一片筛板的层析柱中(介质用量需要根据MBP蛋白产量决定，其最大载量为10mg MBP蛋白/mL介质，请根据实验需要取适量的介质加入层析柱中)。
2．用5倍柱体积(柱体积指的是填料介质的体积，下同)自备去离子水洗柱，共3次。
3．用5倍柱体积的新配的结合缓冲液洗柱，进行平衡，使填料介质处于与目的蛋白相同的缓冲体系下，起到保护蛋白的作用。结合缓冲液的配方如下(以10mL为例)：

成分	用量	在结合缓冲液中的浓度
1M Tris-HCl(pH7.4)	0.2mL	20mM
0.1M EDTA溶液	0.1mL	1mM
2M NaCl溶液	1mL	200mM
自备去离子水	8.7mL	-

4．4℃ 5000g离心10分钟收集20mL表达菌液，弃上清，将细胞沉淀(约100mg)悬于2mL冰冷的现配的细胞洗涤液中，4℃ 5000g离心15分钟收集细胞沉淀后，再次悬于2mL冰冷的细胞洗涤液中。(最好用不加诱导物的菌液做对照样。)细胞洗涤液的配方如下(以10mL为例)：

成分	用量	在细胞洗涤液中的浓度
1M Tris-HCl(pH7.4)	0.1mL	10mM
2M NaCl溶液	0.15mL	30mM
自备去离子水	9.75mL	-

5．制备细胞裂解物：
1)如果所用载体不带MBP信号肽序列(如pMAL-c2)
a)超声破碎细胞，功率30 W，保持细胞低温(0℃)，直到在显微镜下看见绝大多数细胞破裂。(超声参数需根据仪器型号自行摸索，但裂解物必须不粘稠，否则会堵塞层析柱。)
b)为使溶液澄清，向上述细胞洗涤液中加入35μl PMSF(10mg/mL)。
c)4℃下13000-15000g离心30分钟，以去除残留细胞和细胞碎片以防堵柱，收集上清样品，留样做 SDS-PAGE电泳对照，其余样品用于纯化MBP融合蛋白，直接进入第6步。
2)如果所用载体带MBP信号肽序列(如pMAL-p2)
a)4℃ 5000g离心15分钟收集细胞，沉淀悬于1mL冰冷的现配的细胞裂解液中。细胞裂解液的配方如下(以10mL为例)：

成分	用量	在细胞裂解液中的浓度
1M Tris-HCl(pH7.4)	0.3mL	30mM
0.1M EDTA溶液	0.01mL	0.1mM
蔗糖	2g	20%(m/V)
自备去离子水	加水到10mL	-

b)加入25μl PMSF(10mg/mL)，室温搅动15分钟，于4℃ 13000-15000g离心10分钟收集细胞。
c)旋动细胞沉淀，加入2mL冰冷的0.1mM MgCl2溶液，4℃搅动10分钟。
d)休克细胞4℃ 13000-15000g离心10分钟，在上清中加入10mM Tris-HCl(pH7.4)(可将1 M Tris-HCl，pH7.4稀释100倍配制而成)至pH为7.4。
e)上清用0.22μm或0.45μm滤膜过滤，滤液用100倍体积的10mM Tris-HCl(pH7.4)(配方如上)4℃透析。
f)收集透析后样品，留样做 SDS-PAGE电泳对照，其余样品用于纯化MBP融合蛋白，直接进入第6步。
6．将样品加到平衡好的直链淀粉-琼脂糖介质中(保证目的蛋白与介质充分接触，以提高目的蛋白的回收率)，收集流出液。
7．用10-15倍柱体积的结合缓冲液(配方见上表)进行清洗，去除非特异性吸附的杂蛋白，收集洗杂液。
8．使用5-10倍柱体积的现配的麦芽糖洗脱液洗脱结合的融合蛋白，收集洗脱液(即目的蛋白组分)。麦芽糖洗脱液的配方如下(以10mL为例)：

成分	用量	在麦芽糖洗脱液中的浓度
1M Tris-HCl(pH7.4)	0.2mL	20mM
0.1M EDTA溶液	0.1mL	1mM
0.1M麦芽糖溶液	1mL	10mM
自备去离子水	8.7mL	-

9．将纯化得到的样品(包括流出液、洗杂液和洗脱液)以及原始样品使用SDS-PAGE检测纯化效果。
10．填料介质清洗：依次使用3倍柱体积的结合缓冲液和5倍柱体积的去离子水平衡介质，最后再用5倍柱体积的20%的乙醇平衡，然后保存在等体积的20%的乙醇中，置于4℃保存，防止填料被细菌污染。本介质可重复使用。
蛋白酶切割释放靶蛋白(可选步骤，所用试剂需自备)
11．用适当的蛋白酶切割融合蛋白释放靶蛋白。
1)加入自备的凝血酶、肠激酶或Xa因子(根据融合蛋白中的位点选择)。每毫升介质中加入50单位的溶于1mL PBS溶液的蛋白酶。颠倒离心管数次混匀，室温下振荡2-16小时。
2)4℃以500 g离心5分钟，上清小心转移到新离心管中。
3)用传统的层析方法或SDS-PAGE电泳分离靶蛋白和蛋白酶。

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