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257
- 英文名:
RNase-free SDS
- 保质期:
长期
- 供应商:
北京百奥莱博科技有限公司
- 保存条件:
冷藏
特别声明:本产品及我公司所售其他产品均为科研类试剂产品,严禁用于药物、医疗及其他非科研用途。
百奥莱博专业生产供应10%SDS溶液(不含RNase)价格,我公司销*(代"售")全品类的分子生物学试剂,价格优惠,欢迎广大科研工作者垂询订购。
名称:10%SDS溶液(不含RNase)价格
规格:250mL
编号:BTN60702
英文名:RNase-free SDS
产地:国产|进口
品牌:百奥莱博
除10%SDS溶液(不含RNase)价格外,我公司正在打折促销以下产品:
·柱式血液DNA提取试剂盒
编号:BTN60306
英文名称:Blood DNA column extraction kit
规格:50次
本试剂盒是基于离心柱/硅胶膜原理的、专门用于从新鲜或冷冻的动物(包括人和禽类)抗凝全血中提取基因组DNA的试剂。
产品特点:
1. DNA纯净,OD260/280在1.8-2.0之间。不含蛋白质和RNA污染,可直接用于PCR、酶切、杂交等。
2.产量高,一般为1-10μg/mL全血(对哺乳动物血液)。
3. 操作简单,整个过程约20分钟,全室温操作,适合大规模样品处理。
4. 用量广泛,每次可以处理少达20μl(对禽类动物血液),多达1mL的血液(对哺乳动物血液)。
5. 安全无毒,本试剂盒对人体无毒,无腐蚀性和刺激性气味。
试剂盒组成:
| 成分 | 规格 |
| 红细胞裂解液(A型) | 25ml |
| 溶液A | 25ml |
| 离心吸附柱 | 50套 |
| 通用洗柱液 | 50ml |
| DNA洗脱液2.0 | 10ml |
| 说明书 | 1份 |
储存条件:常温运输、4℃保存,有效期一年。
使用方法:
1.在0.02-1mL新鲜或抗凝血液(冷冻血需先37℃水浴融化)中加入0.5mL红细胞裂解液(A型),吹打混匀。
a)哺乳动物,血液使用量以300μl以下为宜,使用量越大产量越高,但产率会降低。如果血液多于300μl,重复1-2步两次可以提高产率。
b)禽类动物,血液使用量以20μl以下为宜,可以从第3步做起。
2.室温12000~15000rpm离心5分钟,沉淀呈粉红色,小心倾去上清。
3. 再短暂离心半分钟,吸弃残留的液体。此步有利于后面的细胞裂解,但一般可以省略。
4. 向有沉淀的离心管内加入0.5mL溶液A(溶液A有少量晶体沉淀,用前需要摇晃均匀),用移液枪吹打使沉淀充分悬浮起来。此步目的是裂解细胞,释放DNA,所以吹打越充分越好。
5. 静置2分钟待溶液变清亮后,将液体转移到离心吸附柱中并静置2-5分钟,以使DNA与膜充分结合。
6. 12000rpm离心半分钟,DNA将吸附到膜上,弃收集管中的废液。
7. 加入0.7mL的通用洗柱液,12000rpm离心半分钟,弃收集管中的废液。
8. 加入0.3mL的通用洗柱液,12000rpm离心半分钟,弃收集管中的废液。
9. 12000rpm离心半分钟,甩干残留液体。此步很重要,以去除膜上残留通用洗柱液,否则会影响后续反应。
10. 将离心吸附柱置于一新的1.5mL塑料离心管(自备)中,加入适量50μl DNA洗脱液2.0,室温放置2分钟。如果将DNA洗脱液2.0在65℃预热后再使用,洗脱DNA的效果会更好。
11. 12000rpm离心半分钟,离心管底溶液即DNA溶液。可以立即使用或放冰箱长期保存。
10%SDS溶液(不含RNase)价格关键词:BTN60702,10%SDS溶液,10%SDS溶液(不含RNase),RNase-free SDS
10%SDS溶液(不含RNase)等科研试剂品质优良,受到广大科研工作者的一致肯定和赞许。质量品牌保证,价格公正,倾力为国内国外生命科学研究人员提供一流的产品。欢迎来电咨询!
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BTN81106 蛋白酶K干粉 Proteinase K Powder
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10%SDS溶液(不含RNase)价格关键词:BTN60702,10%SDS溶液,10%SDS溶液(不含RNase),RNase-free SDS
我公司专业供应高品质 elisa试剂盒,血清,抗体,培养基,标准品,10%SDS溶液(不含RNase),生物试剂,实验耗材,公司位于北京市海淀区,是一家专业从事“产品研发生产、市场销*(代"售")、技术服务”为一体的高科技生物技术公司。
·Southern级真菌DNA提取试剂盒
编号:BTN130943
英文名称:Fungus DNA extraction kit(Southern Grade)
规格:10次
·His标记蛋白质微量纯化套装(含核酸酶和溶菌酶)
编号:BTN100102B
英文名称:One-Stop His-Tagged Protein Miniprep Pack(B)
规格:2mL
本产品基于His-Ni亲和层析的蛋白质纯化方法是目前分离纯化重组表达蛋白质的重要方法,本产品就是专门用于上述实验的一站式产品。
产品特点:
1.一站式套装,含所需的介质、溶液和层析柱,用户只需要提供表达His蛋白的细菌(酵母、杆状病毒、培养细胞)即可,非常方便。
2. 专一性强,一次过柱即可获得纯度高达95%的His-标记蛋白。
3.变性和非变性条件均可使用,也适用于纯化包涵体中的His标记蛋白。
4. 每次可以处理20mL的表达菌液,适合初步筛选和鉴定。
5. 提供4mL浓度为50%的Ni-Agarose介质,其最大载量为20-30mg His标记蛋白质/mL介质。
6. 介质为CL-6B琼脂糖,含四个Ni离子螯合基团,比只有四个Ni离子螯合基团的Ni-IDA更有效。
7. 本介质可以反复使用多次。
试剂盒组成:
| 成份 | 规格 |
| Ni-Agarose介质,50% | 4mL |
| 1M咪唑溶液 | 25mL |
| 1M Tris-HCl pH7.9 | 25mL |
| 5M NaCl溶液 | 25mL |
| 溶菌酶(20 KU/mg) | 30mg(A型无) |
| Benzonase(2U/μL) | 20μL(A型无) |
| 盐*(代"酸")胍 | 6g |
| 尿素 | 20g |
| PMSF(10mg/mL) | 0.5mL |
| 亲和层析柱,6mL | 1套 |
| 使用手册 | 1份 |
储存条件:常温运输和保存,但介质需4℃保存,溶菌酶、Benzonase和PMSF需-20℃保存,有效期一年。
自备试剂:去离子水、20%乙醇、0.45μm滤膜
使用方法:
1.将Ni-Agarose介质充分混匀后,取适量加入到预放了一片筛板的层析柱中(介质用量需要根据His蛋白产量决定,其最大载量为20-30mg His标记蛋白质/mL介质,请根据实验需要取适量的Ni-Agarose介质加入层析柱)。
2.用5倍柱体积(指填料的体积,下同)自备去离子水洗柱,共三次。
3.用5倍柱体积的新配结合液洗柱(配方如下,以10mL为例),共三次:
| 成分 | 用量 | 在结合缓冲液中浓度 |
| 1M Tri-HCl(pH7.9) | 0.2mL | 20mM |
| 1M咪唑溶液 | 0.1mL | 10mM |
| 5M NaCl溶液 | 1mL | 500mM |
| 自备去离子水 | 8.7mL | - |
4.室温5000g离心10分钟收集20mL表达菌液,弃上清,沉淀(约100mg)放冰上待用或放-80℃保存。最好用不加诱导物的菌液做对照样。
5.如果用本产品A型:加入1mL冰浴的结合液(1mL菌液需要用50μL结合液),再加入25μL PMSF(10mg/mL)溶液,冰上超声裂解菌体直到在显微镜下看见绝大多数细胞破裂。超声参数需根据仪器型号自行摸索,但裂解物必须不粘稠,否则会堵塞层析柱。如果用本产品B型:加入1mL冰浴的含溶菌酶的结合液(先取20mL结合液,加入所有30mg溶菌酶干粉,溶解后分装成1mL/管,剩余的-20℃放置),再加入25μL PMSF(10mg/mL)溶液和1μL Benzonase,冰上放置30分钟。
6.4℃下13000-15000g离心10分钟,去除残留细胞和细胞碎片以防堵柱,收集上清,留样做SDS-PAGE电泳对照。如果要纯化裂解液中可溶部分的His标记蛋白,则直接进入第7步;如果要纯化裂解液中包涵体(沉淀部分)中的His标记蛋白,则直接进入第12步。
A、纯化细胞裂解液中可溶部分的His标记蛋白
7.将上步得到的上清液上柱,让重力使裂解液自然流出。如要提高His标记蛋白与介质的结合效率,可用试剂盒提供的红盖将层析柱下的漏液口堵上,让细菌裂解液和介质在4℃结合30分钟或过夜。
8.用10倍柱体积结合液洗柱(配方见上表),收集并保存穿透液(含杂质或没被吸附的His标记蛋白,可做SDS-PAGE电泳的对照)。
9.如果用一步式洗脱法(适合已经找到最佳咪唑浓度的情况),则直接用适量的新鲜配制的洗脱液洗柱,收集并保存穿透液(含His标记蛋白)。洗脱液的配方如下(以1mL体积和最佳咪唑浓度是500mM为例):
| 成分 | 用量 | 在洗脱液中的浓度 |
| 1M Tri-HCl(pH7.9) | 20μL | 20mM |
| 1M咪唑溶液 | 500μL | 500mM |
| 5M NaCl溶液 | 100μL | 500mM |
| 自备去离子水 | 380μL | - |
10.如果用多步式洗脱(适合不知道最佳咪唑浓度或一步式洗脱杂质多的情况),则按上表配制一系列咪唑浓度不同(如40、60、100、200、300和500mM),其他成分浓度不变的洗液,按从低到高的顺序洗涤并收集样品,SDS-PAGE电泳检测His标记蛋白所在的区域。
11.洗脱后,依次使用10倍柱体积的去离子水洗涤柱子,再用3倍柱体积的20%乙醇平衡(乙醇要将填料浸没),最后堵住层析柱下端的漏口,4℃保存待下次使用。
B、纯化包涵体中His标记蛋白
12.将第6步离心得到的包涵体沉淀重悬于1-3mL含盐*(代"酸")胍结合液中或1-3mL含尿素结合液中(建议优先使用尿素做变性剂,因为得到的洗脱液可以直接跑SDS-PAGE,而用盐*(代"酸")胍的洗脱液需先除盐后才能电泳)。冰浴1小时以使包涵体溶解,期间可轻柔摇晃几次。含变性剂的结合液配方如下(以10mL为例):
| 成分 | 含盐*(代"酸")胍结合液 | 含尿素结合液 |
| 1M Tri-HCl(pH7.9) | 200μL | 200μL |
| 5M NaCl溶液 | 1mL | 1mL |
| 盐*(代"酸")胍(MW=95.6) | 5.7g | 无 |
| 尿素(MW=60.1) | 无 | 4.8g |
| 自备去离子水 | 加水到10mL | 加水到10mL |
13.室温10000×g离心20分钟,沉淀为未溶解的包涵体。将上清(含溶解后的His标记蛋白)以自备的0.45μm滤膜过滤。
14.将滤过液上柱,后续纯化步骤同第7-第11步。只是所用结合液和洗脱液均含变性剂,含变性剂的洗脱液配方见下表(以1mL为例):
| 成分 | 含盐*(代"酸")胍洗脱液 | 含尿素洗脱液 |
| 1M Tri-HCl(pH7.9) | 20μL | 20μL |
| 1M咪唑溶液 | 500μL | 500μL |
| 5M NaCl溶液 | 100μL | 100μL |
| 盐*(代"酸")胍(MW=95.6) | 0.57g | 无 |
| 尿素(MW=60.1) | 无 | 0.48g |
| 自备去离子水 | 补水到1mL | 补水到1mL |
注意事项:整个实验需避免含巯基乙醇、DTT和EDTA等成分。若洗脱液不能将His标记蛋白洗脱下来,可改用pH6.5- 4.5的pH递减的Tris-HCl洗脱。
我公司是一家生物高新技术企业,主要从事免疫学、分子生物学和常规生化试剂的研发、销*(代"售")。致力于为广大高校、科研院所和企事业单位提供一流的科研试剂和完善的技术服务,满足生物化学、分子生物学 、10%SDS溶液(不含RNase)、细胞生物学、免疫学ELISA试剂盒等生物科技实验需求。我们诚以100%的热情换您100%的满意!
北京百莱博科技有限公司是生化试剂产品的专业生产供应销*(代"售")商,恭候您的咨询选购10%SDS溶液(不含RNase)价格。
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文献和实验RNase Protection Assay (Bowtell Lab)
gives large artifactual bands. 37� for 10-15min works well in many cases. 12. To stop the reaction add 20ul 10% SDS and 5ul 20mg/ml proteinase K. Incubate for 15min 37�. 13. Add 2-10ug tRNA carrier. Phenol chloroform extract and ethanol preciptate
RNase Protection Assay (Beverly Faulkner-Jones)
20 ml of 10% SDS and 10 ml of 10 mg / ml proteinase K solution and incubate at 37oC for a further 30 minutes13 14 Extract once with an equal volume of acid-phenol14 15 Remove the aqueous phase, add 20 mg of tRNA and precipitate with 600 ml
0.5%的SDS (Sodium dodecyl sulfate,抑制RNase的活性)浸泡过夜,然后用ddH2O冲洗干净,晾干备用;离心管,枪头等塑料器皿要用0.1%~0.2%DEPC水处理之后(DEPC有致癌之嫌,须小心操作)。37℃保温12h以上,然后高压灭菌,灭活DEPC ( Diethypyrocarbonate );溶液都需用经DEPC处理过的水配置, RNA提取的所有操作应尽可能在超净工作台上进行。 我们研究所里提 RNA 用的枪头和 EP 管都是高压两遍的,没有用DEPC水处理
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