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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 库存:
918
- 英文名:
Nonprotein Western Blocking Solution
- 保质期:
一年
- 供应商:
北京百奥莱博科技有限公司
- 保存条件:
低温运输,-20℃
特别声明:本产品及我公司所售其他产品均为科研类试剂产品,严禁用于药物、医疗及其他非科研用途。
百奥莱博专业生产销*(代"售")非蛋白型Western封堵液现货,我公司供应的分子生物学试剂品类齐全,且具有优势价格,欢迎新老客户垂询订购。
名称:非蛋白型Western封堵液现货
品牌:百奥莱博
英文名:Nonprotein Western Blocking Solution
产地:国产|进口
规格:250mL
本产品为即用型免疫印迹膜非蛋白型封堵缓冲液,其不包含任何蛋白质,不会产生使用蛋白类封闭剂时出现的诸如交叉反应和非特异性结合等问题,在保证有效的封闭效果的同时,还只具有极低的背景。。
产品特点:
1.高信噪比,得到最佳的灵敏度。
2.本产品包括A型(Tris缓冲盐溶液,pH7.4,含Kathon杀菌剂)和B型(磷酸盐缓冲液,pH7.4,含Kathon杀菌剂)。
储存条件:低温运输,-20℃保存,有效期一年。
想要了解更多关于非蛋白型Western封堵液现货的价格、品牌、厂家、说明书、促销信息,请和我们联*(代"系")。此外我公司还销*(代"售")下面的产品:
·BAL 31核酸酶
编号:BTN120409
英文名称:BAL 31 Nuclease
规格:50U
BAL 31核酸酶纯化自埃氏交替单胞菌BAL-31培养物。BAL-31核酸外切酶降解双链DNA的3´和5´末端,不切割分子内部。该酶同时还是高度特异性的单链核酸内切酶,在切刻、缺口、双链DNA单链区和双链RNA的单链区进行切割。其工作原理图如下:

产品特点:
1.从两端逐步对双链DNA进行切割,缺失的长度适合于100~1000个碱基左右。
2.加入EGTA可失活。
3.限制性酶切图谱的构建。
储存条件:低温运输,-20℃保存,有效期一年。
活性定义:1单位指在50μl反应体系,1X核酸酶BAL-31反应缓冲液,30℃条件下,10分钟从线性双链φX174 DNA(40μg/ml)的两端各切下200个碱基对所需要的酶量。
使用方法:
1.在离心管中加入下列溶液:
| 成分 | 用量 |
| pBR322 -Ava I fragment | 3μg(2.0pmol) |
| 2×反应 Buffer | 37.5μl |
| BAL 31 Nuclease | 3~6U |
| H2O | up to 75μl |
2.30℃保温。分别于1、2、3 min时各取样25μl。
3.加入20mM EGTA,65℃加热10分钟灭活酶。
4.用1% Agarose电泳确认DNA片段。
注意事项:
1.该核酸外切酶的双链产物是平齐末端和粘性末端的混合物。尽管要达到最佳连接效率需要用合适的聚合酶修复粘性末端,但该混合物仍可以直接进行克隆。
2.如果需要,可以在使用前用反应缓冲液稀释该酶。
3.只有在20mM EGTA存在条件下,酶的热失活才有效。
非蛋白型Western封堵液现货关键词:Nonprotein Western Blocking Solution,BTN140436,非蛋白型Western封堵液
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4578-31-8 5-单磷酸腺苷 AMPNa2
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非蛋白型Western封堵液现货关键词:Nonprotein Western Blocking Solution,BTN140436,非蛋白型Western封堵液
·pNPP干粉
编号:BTN131116
英文名称:p-nitrophenyl phosphate,disodiu*(代"m") salt
规格:1g
pNPP在ELISA应用中作为检测碱性磷酸酶的底物而被广泛使用。当碱性磷酸酶与PNPP反应后,形成黄色水溶性反应产物。该产物在405nm有光吸收,并可使用传统方法终止反应。其反应原理如下:
储存条件:常温运输,避光保存,有效期一年。
·动物RNA提取试剂盒(柱式Trizol)
编号:BTN71201
英文名称:Animal RNA column extraction kit(Trizol)
规格:50次
本试剂盒是动物总RNA快速提取试剂动物RNA提取试剂盒(BTN3070)的柱式升级产品,可用于从各种动物组织(包括白细胞)快速提取总RNA。
试剂盒特点:
1. 操作更加简单快速,整个过程只需要不到十分钟(对一个样品而言)。
2. RNA 纯度更高,OD260/OD280一般在2.0左右。
3.一般不含用RT-PCR可以检测到的基因组DNA污染。
4.适用于培养细胞、大部分动物组织和部分植物组织。
5. 得到的RNA可直接用于RT-PCR、Northern杂交、cDNA 合成等实验。
6. 性价比高于进口的柱式RNA提取产品。
试剂盒组成:
| 成分 | 50T |
| 溶液A | 50ml |
| 溶液B | 25ml |
| 离心吸附柱 | 50套 |
| 通用洗柱液 | 50ml |
| RNA 洗脱液 | 10ml |
| 说明书 | 1份 |
储存条件:常温运输,4℃保存,有效期一年。
使用方法:
下面的操作步骤是针对在1.5mL塑料离心管中进行的微量提取的,如果处理样品量大,请按比例增加各成份的用量并使用大的离心管和离心机。
1. 根据组织细胞类型的不同分为下面及种情况使用:
a)对贴壁细胞:吸尽培养液,在每10 平方厘米细胞中加入1mL溶液A,用枪轻柔吹打数次,确保细胞全部裂解。
b)对悬浮细胞:离心收集细胞,吸尽液体,在每1-5×106 悬浮细胞中加入1mL溶液A,用枪轻柔吹打数次,确保细胞全部裂解。如果是fibroblasts或carcinoma cell,1mL溶液A的细胞使用量不要超过1×106个细胞。
c)对新鲜组织:先将剪切成小块新鲜组织或液氮保存的组织放入10mL或15mL塑料离心管中,每50-100mg 组织加1mL溶液A,用匀浆器匀浆30秒左右。对肝、脾、胰、肾等细胞分裂十分旺盛的组织(细胞中含大量正在复制的DNA),建议组织的使用量不要超过50mg/ mL溶液A,否则十分容易产生DNA污染。
d)对RNAhold 保存组织:先用纸吸去RNAhold液体后再剪切成小块,其余操作同新鲜组织的处理。
2. 将裂解物转移至一个干净的1.5mL塑料离心管中,然后加入0.2倍体积的自备*仿(1mL溶液A需0.2mL *仿),振荡器上充分振荡混均30秒。
3. 12000rpm室温离心3~5分钟。
4. 将上清液(约0.6-0.8mL的无色透明水相,有时水相比重大时,水相在下层,有机相即蓝相在上层,吸取时应吸取透明水相)转移到一个干净的1.5mL塑料离心管中。注意:离心后下层有机相和中间层含有DNA和蛋白质,避免触及,否则将产生蛋白质和DNA污染。为保险起见,可以留下100μl上清液不取。同时吸取上清时最好缓慢进行,否则容易吸出交界面的不可见的丝状DNA。
5. 加入等体积的溶液B,充分颠倒混匀。
6. 将一半的溶液转移到离心吸附柱中,12000rpm室温离心半分钟,弃穿透液。
7. 将剩下的一半溶液转移到同一离心吸附柱中,12000rpm室温离心半分钟,弃穿透液。
8. 加0.7mL 通用洗柱液到离心吸附柱中,室温离心半分钟,弃收集管中的穿透液。一次洗涤一般足够去除杂质。
9. 加0.3mL 通用洗柱液,室温离心半分钟,弃穿透液。此步可以省略。
10.室温12000 rmp离心半分钟。此步十分重要,否则残留的通用洗柱液会影响RNA的使用。
11. 将离心吸附柱转移到一自备的RNase-free 收集管中,加入50-100μL RNA 洗脱液。
12.室温12000 rmp离心半分钟,离心管中溶液即为RNA样品,可以立即使用或存放于-80℃待用。
13. RNA的电泳检测:本试剂盒提取的RNA 最好用甲醛变性胶电泳,如果在非变性的普通琼脂糖胶(in TAE或TBE buffer)上电泳,一定要使用RNA 专用上样液RNAload(操作详见RNAload 使用手册),千万不要使用常用的DNA上样液,因为DNA上样液没有经过去RNase处理,也不能将RNA变性,得到的带型将十分杂乱。
14. RNA 完整性的电泳检测:如果需要做Northern杂交,强烈建议用户使用甲醛变性胶进行RNA电泳,因为非变性胶不能分离所有的RNA分子(BioTechniques,28:414,2000)。
15. RNA产量产率测定:将5-10μl RNA 溶于TE缓冲液中(pH7.5-8.2 之间)检测其在OD260的光吸收。通过光吸收可以得出RNA浓度(1 OD260的RNA=40μg/mL),进而计算出RNA的产量(浓度×体积)和产率(RNA产量/组织用量)。
16. RNA 纯度测定:无污染的总RNA的OD260/OD280一般在1.8-2.1 之间(具体数值与其碱基组成和溶液成分等多种因素有关),高于此范围则分别表示样品可能有蛋白质污染,但一般不影响RT-PCR等反应。
疑难解答:
Q:上样孔里的红色荧光物一定是DNA污染吗?
A:不是。用TAE或TBE电泳液和非变性胶电泳RNA时容易产生此现象,我们初步研究发现大部分红色荧光物是变性不充分的单链RNA通过碱基互补或通过硼*(代"酸")络合(如果使用TBE作电泳液的话)形成的复合物,加RNase处理后,这些红色荧光物(RNA)一般会消失。为避免此现象,建议最好使用甲醛变性胶电泳和RNA 专用上样液(如RNAload)。
Q:如何确认和去处除污染的基因组DNA?
A:如果怀疑有DNA污染,可以用RNase处理RNA样品,然后再电泳。如果上样孔里的红色荧光物不消失,则表示是基因组DNA污染。进一步确认可以使用PCR扩增法。去除污染的DNA可以使用百奥莱博的非酶的DNA去除剂DNA Scavenger或RNase-free DNase,由于RNase-free DNase一般都有残留的RNase污染,所以必须严格按照厂家提供的使用说明书进行操作。
我公司生产供应销*(代"售")的蛋白质研究正全品类优惠促销,十分期待您的咨询选购非蛋白型Western封堵液现货。
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文献和实验要注意,由于转膜是一个将胶里的Marker浓缩在洁白的膜上,所以需要的上样量相对少一些,如果想要在电泳过程中看到美丽的“彩虹”,或者单色的Marker往往需要比说明书里多加一些Marker的。 三、Western专用的蛋白分子量标准 ①生物素标记蛋白标准 未染色的Marker在做Western时,需要在印迹前先用丽春红或者是SYPRO荧光蛋白染色液等不干扰Western Blot的染色方法显色,在胶上做标记最后才能“拼”在最后的结果中,如果是预染的Marker
杂交膜的选择是决定 Western blot成败的重要环节。应根据杂交方案、被转 移蛋白的特性以及分子大小等因素,选择合适材质、孔径和规格的杂交膜。用于Western blot的膜主要有两种:硝酸纤维素膜(NC) 和 PVDF 膜。NC 膜是蛋白印迹实验的标准固相支持物,在低离子转移缓冲液的环境下,大多数带负电荷的蛋白质会与膜发生疏水作用而高亲和力的结合在一起, 但在非离子型的去污剂作用 下,结合的蛋白还可以被洗脱下来。根据被转移的蛋白分子量大小,选择不同孔 径的 NC 膜。因为随着膜孔径的不断
RT-PCR、Western blot和ELISA三者的区别
PCR是从转录水平上检测目的基因,而非蛋白,从转录到翻译还有复杂的过程,因此基因的表达量与蛋白的表达量不一定是正相关的。WB只能半定量,但是可以检测细胞膜蛋白,这点ELISA做不到,ELISA可用定量方法检测蛋白,也就是说你可以观察不同浓度刺激物对目的蛋白的影响。基因翻译蛋白质,PCR可以检测基因的表达量,绝对定量和相对定量。但基因翻译表达蛋白质是个复杂的过程,有可能出现基因量大而蛋白质少,或者相反,甚至其他情况。所以,PCR是从基因层面DNA或mRNA进行的检测, 而Western Blot
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