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- 详细信息
- 技术资料
- 库存:
864
- 英文名:
Animal-Plant Membrane Protein Miniprep Kit
- 保质期:
一年
- 供应商:
北京百奥莱博科技有限公司
- 保存条件:
2~8℃
特别声明:本产品及我公司所售其他产品均为科研类试剂产品,严禁用于药物、医疗及其他非科研用途。
百奥莱博专业生产销*(代"售")动植物膜蛋白微量制备试剂盒北京价格,我公司供应的分子生物学试剂品类齐全,且具有优势价格,欢迎新老客户垂询订购。
名称:动植物膜蛋白微量制备试剂盒北京价格
英文名:Animal-Plant Membrane Protein Miniprep Kit
产地:国产|进口
品牌:百奥莱博
编号:BTN91204
规格:50次
细胞膜蛋白质参与了很多重要的细胞活动,根据它们与膜结合的位置一般分为两种,一种是附着在细胞膜上,另一类是嵌入到细胞膜中间。附着型膜蛋白疏水性较弱,比较容易提取和纯化;而嵌入型膜蛋白疏水型很强,所以在水溶液里面很难溶解,非常难以提取和纯化。百奥莱博根据上述特点,经过精心优化的、开发出本产品,专门用于分离纯化这两种膜蛋白。
产品特点:
1. 两步法提取,先纯化含膜组分,再分离附着型膜蛋白和嵌合型膜蛋白。
2. 膜蛋白(附着型+嵌入型)产量高,对肝脏组织而言,其线粒体膜蛋白产率为10μg/mg左右,过氧化物酶体为1μg/mg左右,内质网为25-30μg/mg。
3. 所得的膜蛋白大部分具有生物活性,可用于活性研究。
4.可用动物、植物培养细胞和实体细胞为材料,也可用预先纯化的含膜组分或细胞器(如线粒体、叶绿体、内质网、过氧化物酶体)为材料(本试剂盒不含纯化细胞器的试剂)。
5. 本方法重复性好。
6. 本试剂盒足够50次微量提取,分A型和B型两种。A型用于附着型膜蛋白,B型用于嵌合型膜蛋白和附着型膜蛋白。
试剂盒组成:
| 成分 | A型 | B型 |
| 溶液A | 100ml | 100ml |
| 溶液B | 10ml | 10ml |
| 溶液C | 50ml | 100ml |
| 说明书 | 1份 | 1份 |
储存条件:常温运输及保存,有效期一年。
使用方法:
1. 对培养细胞:收集1×107个培养细胞(动物细胞、植物细胞),用20mL自备的冰浴的PBS 洗涤三次,每次洗涤后需要4℃下1000 g离心2分钟,然后小心弃上清。对实体组织:由于各种动植物的各种实体组织的属性差别太大,故本手册的纯化膜组分的操作步骤(第1-7 步)不一定完全适合,用户需要自行优化以纯化含膜组分或含膜的细胞器(如细胞质膜、内质网、线粒体、叶绿体等),再将含膜组分或细胞器沉淀直接用于第8 步的膜蛋白提取。
2. 将洗涤后的细胞沉淀重悬在2mL溶液A中,冰上静置10分钟。注意:膜蛋白有膜的保护,在纯化过程中对蛋白酶的降解没有胞浆蛋白敏感,一般可以不加蛋白酶抑制剂。但如果纯化的膜蛋白的确有降解的话,可以在溶液A中加入自备的蛋白酶抑制剂混合物。
3.转移到容积为2mL的Dounce 玻璃匀浆器上下匀浆20-50次(具体次数取决于细胞种类,293T细胞一般需要20次左右,而MEF细胞一般需要50次左右。最好用样品先进行预实验以摸索最佳匀浆次数,最佳匀浆次数时在显微镜下能看见细胞破裂但细胞核完整)。
4. 将匀浆液转移到15或50mL塑料管中,加入相当于匀浆液体积1/10的溶液B,其间可以轻柔颠倒混匀3-5次,留少量样品作为对照1(匀浆液)。
5. 4℃ 2500rpm离心20分钟,沉淀为细胞核,上清为胞浆和膜成分,留少量样品作为对照2(胞浆和膜成分)。
6. 将上清液用Beckman Optima 台式超速离心机100,000 g 4℃离心60分钟。也可以使用其他冷冻超速离心机,但离心力应该为100,000g,否则有可能得不到膜成分沉淀。
7.小心转移上清(胞浆部分)并留少量样品作为对照3(胞浆)。
8. 将沉淀(含膜组分)重悬于1mL 冰浴的溶液C中后,冰上静置30分钟,留少量样品作为对照4(膜成分)。本成分电泳前,需要先用自备的TCA沉淀(TCA 终浓度为10%),再用冰冷的丙*(代"酮")洗涤两次后再溶解在1×上样液中待用。对照1-3 号不需要这样的预处理。
9. 用Beckman Optima 台式超速离心机100,000g 4℃离心60分钟。也可以使用其他冷冻超速离心机,但离心力应该一致,否则有可能得不到沉淀。
10. 如果需要附着型膜蛋白,则取上清(含附着型膜蛋白)弃沉淀(含膜和其中的嵌合型膜蛋白)。上清可以放-20℃长期保存,如果需要电泳,需要先用自备的TCA沉淀(TCA 终浓度为10%),再用冰冷的丙*(代"酮")洗涤两次后再溶解在1×上样液中与对照1-4 号一起上样电泳。
11. 如果需要嵌合型膜蛋白,则取出上清(含附着型膜蛋白)并留少量样品作为附着型膜蛋白样品,然后再用1mL 冰浴的溶液C重悬沉淀,然后100,000g 4℃离心60分钟,去掉上清(上清含残留的附着型膜蛋白,可以留样作为洗涤后的附着型膜蛋白样品)。沉淀含膜和其中的嵌合型膜蛋白。如果需要测定膜蛋白的浓度,则将其溶解在自备的0.5 M NaOH溶液。
动植物膜蛋白微量制备试剂盒北京价格正在火爆热销,除此之外,为您推荐下别热销产品:
·生物素化的蛋白G
编号:BTN131098
英文名称:Biotin-Protein G
规格:0.5mg
本产品为生物素标记的蛋白G,可用于生物素化二抗的替代物。可以检测或定位位于细胞表面或组织中免疫球蛋白。
储存条件:低温运输,-20℃保存,有效期一年。
·核酸清除剂
编号:BTN81216
英文名称:Nucleic Acid Scavenger
规格:1.5mL
本产品用于去除蛋白样品中的核酸污染。蛋白双向电泳的关键是制备好的样品,其中包括核酸的清除,因为核酸能与蛋白质结合,影响聚焦。同时,核酸的分子量大,容易堵塞凝胶,造成条带拖尾。此外,如果使用银染的方法检测蛋白质,污染的核酸也会被染色,为此我司开发了本产品。
产品特点:
1. 使用简单,加入样品中简单保温即可。
2. 效率高,10分钟内可以清除核酸(DNA和RNA)对蛋白质电泳的干扰。
3.基于酶学消化,所以会引入DNase和RNase。
储存条件:低温运输,-20℃保存,有效期一年。
使用方法:
1.在样品中加入0.1倍体积的本产品,轻柔混匀。
2.在冰上保温10-30分钟,使核酸降解成单核苷酸或寡核苷酸。
注意事项:
这两种酶也有可能在双向电泳图谱呈现蛋白斑点。用超离心方法也能除去核酸,但也可能除去大片分子质量的蛋白质,在低离子强度时,带负电的核酸和带正电的蛋白质会形成复合物,所以用高pH和高离子强度的溶液能减少这种反应,单最后还必需去盐。
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·即用型蓝白T载体D型(无RNA启动子,有MCS)
编号:BTN120514
英文名称:Instant Blue-White Vector T,Type D
规格:20次
本产品是用Xcm I酶切线性化的DNA片段,其两个末端的5´都有一个突出的T,可以用于快速克隆具有加尾活性的耐热酶(如Taq DNA聚合酶)扩增得到的PCR片段。
产品特点:
1. 由于是通过酶切制备,所以载体两端的带T率为100%,远高于用Taq DNA聚合酶和TdT末端转移酶在平末端载体加尾得到的T载体。
2. 克隆的阳性率一般在90%以上,缩短了筛选过程。
3. 插入位点两侧有多克隆(CMS)位点,便于对克隆的PCR片段进行近一步的分析。
4. 来源于pUC19质粒,两侧无RNA聚合酶启动子。
5.可以使用pUC/M13 Forward和Reverse测序引物测定插入片段的序列。
6. T克隆位点位于β-半乳糖苷酶的α 肽编码区内,可以进行蓝白斑筛选。
7.含有丝状噬菌体f1 复制起始子,可以制备单链DNA。
产品组成:
| 组分 | 规格 |
| 即用型蓝白T载体D型(10ng/μL) | 60μl |
| 阳性对照(35ng/μl) | 30μl |
储存条件:低温运输,-20℃保存,有效期两年。
质粒图谱
多克隆位点
动植物膜蛋白微量制备试剂盒北京价格关键词:动植物膜蛋白微量制备试剂盒,Animal-Plant Membrane Protein Miniprep Kit,BTN91204
抑肽酶溶液(Aprotinin,2mg/ml) 1ml
CYB162022 兔抗猴IgG(抗血清) 0.5ml
F030405 胶体金标记山羊抗小鼠IgG抗体 Goat Anti-Mouse IgG*GOLD
铋试剂Ⅰ 3-Isocyanatopropyltrimethoxysilane 1072-71-5
D-对羟基*甘*酸 Complex amino acid 22818-40-2
酒石酸泰乐菌素 PEPC 74610-55-2
100bp DNA ladder(100-1500bp) 100次
11081-40-6 葡聚糖凝胶G-15 Sephadex G-15 medium
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86-87-3 NAA α*乙酸
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