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909
- 英文名:
SYBR GreenⅠ, electrophoretic grade
- 保质期:
一年
- 供应商:
北京百奥莱博科技有限公司
- 保存条件:
常低温运输,-20℃
特别声明:本产品及我公司所售其他产品均为科研类试剂产品,严禁用于药物、医疗及其他非科研用途。
百奥莱博专业生产销*(代"售")电泳级SYBR Green I厂家价格,我公司供应的分子生物学试剂品类齐全,且具有优势价格,欢迎新老客户垂询订购。
名称:电泳级SYBR Green I厂家价格
规格:50μL
品牌:百奥莱博
英文名:SYBR GreenⅠ, electrophoretic grade
产地:国产|进口
编号:BTN3280
SYBR Green I,EG是电泳级低毒高灵敏的花青类DNA荧光染料,适用于各种核酸电泳分析。
产品特点:
1.低毒安全,其致突变性低于EB 数倍甚至数十倍。
2. 髙灵敏,SYBR Green I与dsDNA 结合,荧光信号会增强800-1000倍,至少可检出 20 pg DNA,灵敏度高于EB染色法10-25倍。
3.适用范围广,可适用于多种电泳分析,包括琼脂糖凝胶,聚丙*(代"烯")酰胺凝胶电泳和毛细管电泳等。与我司的SuperBuffer-2 兼容。
4. 不影响其它修饰酶(Taq酶、逆转录酶、内切酶、T4连接酶等)作用。
5. 操作简单,无须脱色或冲洗。
储存条件:常低温运输,-20℃闭光保存,有效期一年。
使用方法之一:电泳前染色
本方法是在上样时对DNA进行染色,只适于琼脂糖凝胶电泳。
1. 用高纯度的无水DMSO 将10000×的SYBR Green I 稀释100倍成100×电泳前染色液。染色液可以在-20℃和闭光条件下可以保存一个月以上。
2. 按常规方法制备胶,胶的厚度最好不要超过5mm,胶中不能含任何染料。
3. 将100 X电泳前染色液与DNA样品(包括DNA Marker)按1:10的比例混合,室温放置10-15分钟,加上样液后上样。
4.上样后电泳。
5.在300nm的UV下观察。UV的功率最好为90W(15W X 6),手持UV一般功率不够,难以得到满意的灵敏度。除300nm外,SYBR Green I还可以在500nm和380nm的激发光下观察(如使用Dark Reader 蓝色可见光透色仪)。也可以用激光扫描仪记录电泳结果。
6. 用配置了520-550nm 滤光片(一般呈黄色或深黄色)的相机拍照。
注意:不要使用与EB 兼容的红色滤光片(能阻挡520-550nm的光)。如果能再加上能滤去UV的滤光片,效果会更好。
7.后续Southern或Northern转膜或胶回收按常规操作进行。
使用方法之二:电泳中染色
本方法是将SYBR Green I 加入到琼脂糖凝胶中,优点是不需要额外的染色处理,只适于琼脂糖凝胶电泳。
1. 将10000×SYBR Green I 直接加入到融化的、但温度已经降低到50℃左右的琼脂糖凝胶中,使其终浓度在0.5-1X左右,混合均匀后倒胶,厚度最好不要超过5 mm。
2. 按常规方法上样和电泳。
3.电泳后观察和照相处理同方法一。
注意:由于在琼脂糖凝胶中的SYBR Green I在加热融化时会大量分解,所以琼脂糖凝胶最好需要多少配多少。
使用方法之三:电泳后染色
本方法是在电泳后对DNA进行染色,适用于琼脂糖凝胶电泳和PAGE,检测灵敏度可达20 pg DNA,但该方法需要单独的染色处理。
1. 按照常规方法进行电泳。
2. 用pH7.0-8.3的缓冲液(如:TAE,TBE或TE)将10000×SYBR Green I 稀释10000倍成1×电泳后染色液。
3. 将电泳后染色液倒入合适的聚丙*(代"烯")容器中,放入琼脂糖凝胶,用铝箔等盖住容器使染料避光。室温振荡染色10-30分钟。对聚丙*(代"烯")酰胺凝胶,可取下一块玻璃板,然后将配好的电泳后染色液轻轻地倒在PAGE胶板上,让染色液均匀地覆盖整个PAGE胶板,静置染色30分钟。避免让染色液与玻璃表面接触。
4. 观察和照相处理同方法一。
注意:电泳后染色液可以冷冻避光储存一个星期。反复使用次数取决于胶的大小(胶越大,非特异吸附产生的损耗就越大),一般可重复使用4次。
注意事项:
1. 融化:本产品溶于DMSO中,融化时一定要让其彻底融化,否则SYBRGreen I在液相和固相中浓度不均,影响实验的可重复性。
2. 容器:SYBR Green I 对聚丙*(代"烯")材料的亲和力非特意吸附最小,故建议在稀释、贮存、染色等使用过程中使用专用的聚丙*(代"烯")类容器,容器表面会被染成橙色。不要使用玻璃和非聚丙*(代"烯")容器。
3. 反复使用:由于凝胶和容器的非特意吸附,使用过的SYBR Green I 再染色时效率会逐渐降低。
4. 稳定性:稀释后的SYBR Green I工作液体最适保存条件是闭光、密封、低温(4℃)、pH在7.5-8.3。避免将本产品直接加入热的琼脂糖凝胶中,禁止用微波加热处理SYBR Green I。
5. 稀释液:可以用电泳缓冲液稀释SYBR Green I,包括常用的TAE、TBE、TE、SuperBuffer-2等。最好不要使用水和pH7.8(25℃)的Tris缓冲液。后者的pH在4℃时会升高到8.4。
6.其他影响因素:染色液中最好不要有SDS,也不要用去污剂洗涤染色用的聚丙*(代"烯")容器时,0.1-.3% SDS 能抑制SYBR Green I与DNA 结合。用deaza-G 替代G的DNA 不能有效染色。
疑难解答:
Q:DNA 条带为何出现弯曲或模糊?
A:DNA 过量,将DNA 用量降低到1-5 ng/条带。电泳时间不要超过2小时,否则SYBR Green I 会从DNA上分离出来,会产生弥散状条带。电压不能太高,否则产热会影响SYBR Green I与DNA的结合。
Q:醇/盐沉淀法能否把结合在DNA上的SYBR Green I 去掉?
A:可以。其中乙醇效果最好,异丙醇次之。但正丁醇、*仿和*酚抽提不能去除与DNA 结合的SYBR Green I。
Q:用SYBR Green I 染过的胶能否用于Southern或Northern Blot?
A:可以,但最好在预杂交和杂交溶液中加入0.1%-0.3%的SDS。SDS 能是SYBR Green I与DNA 分开。
Q:能否用SYBR Green I染色膜上的DNA。
A:可以用来染色带正电的尼龙膜上的DNA,不能用于中性尼龙膜和硝酸纤维素膜。
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电泳级SYBR Green I厂家价格关键词:SYBR GreenⅠ, electrophoretic grade,电泳级SYBR Green I,BTN3280
·X-gal干粉
编号:BTN100885
英文名称:X-Gal Powder
规格:0.5g
X-Gal的学名为5-*-4-*-3-吲哚基-β-D-半乳糖苷,分子式为C14H15BrClNO6,分子量为408.63。CAS号为7240-90-6。溶于甲醇、DMSO和二甲基甲酰胺,溶解度可达20mg/mL。
储存条件:低温运输、-20℃避光保存、有效期一年。
·磷酸化蛋白纯化试剂盒
编号:BTN130883
英文名称:Phosphorylated proteins purification kit
规格:50次
X-Gal的学名为5-*-4-*-3-吲哚基-β-D-半乳糖苷,分子式为C14H15BrClNO6,分子量为408.63。CAS号为7240-90-6。溶于甲醇、DMSO和二甲基甲酰胺,溶解度可达20mg/mL。
储存条件:低温运输、-20℃避光保存、有效期一年。
·随机引物法DNA探针生物素标记试剂盒
编号:BTN90603B
英文名称:Random Primer DNA Labeling Kit(Biotin)
规格:5次
本试剂盒是基于Feinberg和Vogelstein发明的随机引物标记法而开发出来的即用型DNA探针标记试剂盒,标记过程由双链DNA热变性、随机引物与单链DNA结合、在Klenow DNA聚合酶催化下,引物的延伸合成DNA探针并掺入标记的核苷酸三步组成,可用下面的示意图表示:

本产品对Feinberg和Vogelstein经典方法进行了改良。
产品特点:
1. 提供的标记反应液整合了除酶和模板外的所有成分,简化了反应加样步骤,提高了标记反应的可重复性。
2. 使用无外切活性的Klenow exo- DNA聚合酶,已标记DNA探针不会被酶降解。
3.快速,最快1小时即可完成标记反应。
4. 得到的DNA探针比活性高(如果是同位素,可以达到109cpm/μg DNA),检测灵敏度高。
5. 所需模版DNA量少(只需要10ng以上即可),DNA可以是各种形状(线状和环状)的、也可以是单链或双链的,长度在100bp以上均可。
6. 得到的探针长度在200-400nt之间,可以用于Southern杂交、Northern杂交、原位杂交、菌落和斑点印迹杂交等。
7. 提供三种标记选择,其中BTN90603A可用于各种同位素标记和其他任何非同位素标记,但需自备标记底物;BTN90603B和BTN90603C可分别用于生物素和地高*(代"辛")标记,不需自备标记底物。
试剂盒组成:
| 成分 | 规格 |
| 2×A型标记反应液(自备标记物型) | 50μl(仅A型有) |
| 2×B型标记反应液(生物素型) | 50μl(仅B型有) |
| 2×C型标记反应液(DIG型) | 50μl(仅C型有) |
| dATP,2mM | 10μL(仅A型有) |
| dTTP,2mM | 10μL(仅A型有) |
| dGTP,2mM | 10μL(仅A型有) |
| dCTP,2mM | 10μL(仅A型有) |
| Klenow exo-聚合酶(2U/μL) | 5μl |
| 超纯水 | 1ml |
| 说明书 | 1份 |
储存条件:低温运输,-20℃保存,有效期一年。
使用方法:
1.在一干净的硅化的塑料离心管中加入下列成分:
| 成分 | 用量 |
| 模板DNA | 50-150ng |
| 2×标记反应液(ABC三种之一) | 10μl |
| 超纯水 | 补水到15μl |
注意:非同位素标记物由于疏水性强,容易与常用的塑料离心管表面非特异性结合,所以一定要使用硅化的塑料离心管。模板DNA并非越多越好,因为模板会在杂交反应中跟标记的探针杂交,竞争性地抑制探针跟靶分子的杂交。
2. 沸水浴5-10分钟,或在PCR仪上100℃加热5-10分钟使DNA模版充分变性,立即放冰上待用。注意:如果PCR仪器不能设置到100℃,99℃加热5分钟也可。
3.高速离心数秒使所有液体集中在管底,根据试剂盒类型加入下列成份:
| 试剂盒类型 | 成分及用量 |
| BTN90603A型 | dATP、dGTP、dCTP各1μl(共3μL,浓度均为2mM) 自备的2mM dTTP/标记dUTP混合物(见注)1μL 1μl Klenow exo聚合酶 |
| BTN90603B型 | 1μl Klenow exo聚合酶 4μl超纯水 |
| BTN90603C型 | 1μl Klenow exo聚合酶 4μl超纯水 |
注:上表中的dTTP/标记dUTP混合物中dTTP和标记的dUTP的总浓度为2mM(在20μL体系中混合液的终浓度为0.1mM,dTTP与生物素或DIG标记的dUTP的比例最好为65:35)。由于空间阻碍,并非标记生物素或DIG标记的dUTP越多灵敏度越高,一般dTTP与标记dUTP的比例在65:35为最佳。但如果使用自备的其他标记核苷酸,如fluorescein、hydroxycoumarin、resorufin和aminoallyl标记的dUTP,则用户需要自己摸索其与dTTP之间的最佳比例,如果使用32P标记的dUTP,则比活最好为3000Ci/mmol,浓度为好为10uCi/μL,并且不需要加入dTTP。
4. 轻柔吹打混匀。如有液滴沾在管壁上,高速离心数秒使所有液体集中在管底。
5. 37℃保温1-20小时。标记效率跟模版量和保温时间相关,具体见下表:
| 模版DNA用量 | 1小时后探针合成量 | 20小时后探针合成量 |
| 10ng | 80ng | 900ng |
| 30ng | 150ng | 1.35μg |
| 100ng | 350ng | 1.65μg |
| 300ng | 750ng | 2.2μg |
| 1μg | 1.3μg | 2.6μg |
| 3μg | 1.6μng | 2.6μg |
6. 加1μl自备的0.5M EDTA(pH8.0)终止反应,立即放冰上待用或放-20℃保存一年。用前需要加热100℃ 5分钟使DNA探针变性成单链,然后直接加入到杂交反应液中即可。如果电泳检测,标记产物将是弥散状态。
注意:本方法标记核苷酸掺入率极高,因此可以不经纯化直接使用。如果需要纯化,注意不要用酚抽提法纯化非同位素(生物素、DIG和其他等)标记的DNA探针,因为这些标记分子疏水性强,能使标记的DNA进入疏水的有机相而丢失,但可以用乙醇沉淀和Sephadex G50回收(可另购非同位素探针柱式纯化试剂盒)。对比活高的同位素探针,由于其极其不稳定,因此应该立即使用,不要长久放置。
电泳级SYBR Green I厂家价格关键词:SYBR GreenⅠ, electrophoretic grade,电泳级SYBR Green I,BTN3280
·*霉素溶液
编号:BTN60207
英文名称:Chloramphenicol Solution
规格:10mL
本产品是浓度为25mg/mL的*霉素溶液,可以加入到细菌液体或固体培养基中培养含*霉素抗性基因的细菌。
作用原理:*霉素通过与细菌核糖核蛋白体的50S亚基23S rRNA的A2451和A2452位点结合,抑制peptidyle transferase活性而阻断蛋白质的合成,最后抑制细菌生长。
抗性机制:抗性基因cat特异性表达*霉素乙酰转移酶(chloramphenicol acetyltrasnferase),它通过乙酰化*霉素而使之不能与核糖体结合。
储存条件:低温运输,-20℃避光保存,有效期6个月。
·地塞米松
编号:BTN131234
英文名称:Dexamethasone DXM Solution
规格:1mL
本产品为浓度为50mg/mL的地塞米松乙醇溶液。地塞米松(Acido*(代"c")ont,Deronil,Dexacortal,dexametona)又名*美松、*甲强地松龙、德沙美松。分子式:C22H29FO5,分子量:392.5,CAS号:50-02-2。溶于乙醇。地塞米松属于糖皮质类激素,具有抗炎、抗过敏、抗风湿、免疫抑制等作用。
储存条件:低温运输,-20℃避光保存,有效期6个月。
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