北京现货丝状真菌线粒体DNA提取试剂盒特价促销

特别声明：本产品及我公司所售其他产品均为科研类试剂产品，严禁用于药物、医疗及其他非科研用途。

百奥莱博专业生产销*(代"售")北京现货丝状真菌线粒体DNA提取试剂盒特价促销，我公司供应的分子生物学试剂品类齐全，且具有优势价格，欢迎新老客户垂询订购。

名称：北京现货丝状真菌线粒体DNA提取试剂盒特价促销
英文名：Filamentous fungal mitochondria DNA extraction kit
编号：BTN130831
产地：国产|进口
规格：15次
线粒体是重要的、负责能量产生的极其重要的细胞器。对丝状真菌线粒体进行生化，遗传和分子生物学研究都需要先进行线粒体纯化。本产品就是基于密度梯度离心的，专门用于从丝状真菌叶片中纯化完整线粒体、再从中纯化线粒体DNA的试剂盒。

试剂盒特点：
1. 即用型试剂盒，用户不需要单独配制各种溶液。
2. 所得线粒体可用于后续的SDS-PAGE、Western、ELSIA、蛋白组分析、线粒体DNA和线粒体RNA纯化。
3. 本产品足够15次线粒体纯化和15次线粒体DNA提取，每次可处理10-20g菌丝体，能得到1-5mg左右线粒体。
4. 已经成功用于Aspergillus candidus、Aspergillus nidμLans、Magnaporthe oryzae、Neurospora crassa、Penicillium chrysogenum、Rhizopus stononifer等丝状真菌。

试剂盒组成：

 

成分	规格
溶液A	250mL×2
成分B	150g
溶液C	120ml
带柄尼龙滤膜	1个
通用线粒体DNA溶液A	10ml
通用线粒体DNA溶液B	5ml
通用线粒体DNA溶液C	15ml
说明书	1份

储存条件：常温运输和保存，保存期限一年。

使用方法：
注意：纯化DNA提取用的线粒体的要求比纯化功能研究用的线粒体的要求要低，但整个操作还是最好在冰上或者在冷室进行，所用器皿和溶液最好在4℃预冷，离心最好要在4℃进行，离心力以g而不是rpm计算。

一：菌丝的摇瓶培养
1. 使用合适的丝状真菌培养基，接种孢子至终浓度为2×10E6/mL。一般100mL液体培养基可以得到0.8-1.2g菌丝体，而本方法一次可以处理10-20g菌丝体，故最好一次培养1-2升。
2.在合适的温度(如25℃、30℃或37℃，根据真菌不同而不同)250rpm/min摇晃培养16-20小时。
3. 用多层纱布或多层过滤纸过滤收集菌丝，用冰浴的自备去离子水洗涤菌丝三次去除残留的培养基。
4. 用吸水纸吸干菌丝的水分，称重后立即使用。如果在-80℃或液氮长期放置，线粒体回收效率将减低。

二：线粒体粗提液的制备
5. 制备溶液A工作液：每次提取需150mL溶液A工作液，制备方法是将20mL溶液A和130mL自备去离子水混合，冰上预冷即可。
6.在200mL烧杯中，加入100mL预冷的溶液A工作液，再加入新制备的菌丝体，然后全部转移到Waring匀浆机(家用果汁匀浆机)中，低速匀浆10秒，避免起泡沫。用玻璃棒把菌丝按入匀浆机底部后，再低速匀浆10秒。注意：还可以选择Dounce玻璃匀浆器，Polytron匀浆机和研磨(加玻璃珠)等方法，但它们单次处理量一般都较小，需多份处理再汇集。
7. 用带柄尼龙滤膜过滤匀浆液，用预冷的200mL量筒收集穿透液。
8. 将剩下的菌丝体转移到Waring匀浆机中，再加入40mL预冷的溶液A工作液，低速匀浆10秒，用上步的带柄尼龙滤膜过滤，用预冷的200mL量筒收集穿透液。注意：带柄尼龙滤膜后可反复使用。
9. 将穿透液分到4个预冷的50mL的塑料离心管中(每个约35mL)。
10.在水平转子离心机上4℃ 4000g离心10分钟，小心转移上清(含线粒体的部分)到4个新的离心管中。沉淀含细胞核和未裂解的细胞，可以弃之不用。如果要用于纯化细胞核DNA，则可以放-80℃长期保留。
11. 将含上清液的4个离心管在4℃ 10000g离心20分钟。
12. 每个离心管中加2.5mL预冷的溶液A工作液重悬线粒体沉淀并汇集(共约10mL)，此为线粒体粗提液。
13. 如果直接用线粒体粗提液提取线粒体DNA，容易有细胞核DNA污染。
 具体步骤是：在水平转子离心机上4℃ 10000g离心7分钟，小心弃上清，沉淀为线粒体，直接用于第三步的线粒体DNA提取。
14. 如果需要高纯度、无污染的线粒体DNA，则需要用密度梯度离心法将完整的线粒体和其他细胞碎片进一步分离。具体见下步线粒体精提液的制备。

三：线粒体精提液的制备(密度梯度离心法)
15. 制备重液和轻液：将4.1克成分B干粉加到6.3mL溶液C中，充分摇晃混匀得10mL重液。将4.1克成分B干粉加到6.3mL去离子水中，充分摇晃混匀得10mL轻液。
16.在50mL塑料离心管中先加入10mL重液，再在其上轻轻加上10mL轻液，最后加上第11步所得的约10mL线粒体粗提液。
17. 加平衡离心管后在水平转子冷冻超速离心机上4℃ 43000g离心2小时，重液和轻液间的带为完整线粒体。
18. 用广口吸管小心将线粒体转移到新的离心管中，加入等倍体积的预冷的溶液C，轻柔混匀。取少量在相差显微镜下检查线粒体完整性。
19.在水平转子离心机上4℃ 19000 g离心20分钟，小心将上清吸出后，线粒体沉淀可以直接用于DNA提取。

四：线粒体DNA提取
20. 将600μL通用线粒体DNA提取试剂盒溶液A加入到上步得到的线粒体沉淀中并吹打混匀，然后转移到1.5mL离心管中。
21. 65℃放置5分钟。
22. 加入300μL通用线粒体DNA提取试剂盒溶液B，震荡混匀10-30秒。
 注意：溶液B非常粘稠，可以将其预热到65℃并剪掉一截枪头后再取。
23. 加入200μL自备的*仿，震荡混匀10-30秒。
24. 12000g室温离心3分钟。此时上清液将变得透明，中间层有白膜。
25.小心转移上清液(约0.8mL)到一个新的1.5mL离心管中，避免触及中间层的白膜，可留少量上清不取。
26. 加入1倍体积的通用线粒体DNA提取试剂盒溶液C，颠倒30次混匀。
27. 12000g室温离心5分钟，小心弃上清液。
28.在离心管中加入1mL自备的75%乙醇，震荡30秒。
29. 12000g室温离心1分钟，小心弃上清液。
30. 12000g室温离心半分钟，残留液体将汇集在管底。
31. 用洗液枪吸弃管底残留液(约50μL)。
32. 加50-100μL自备的TE缓冲液，溶解DNA沉淀即得线粒体DNA溶液。直接取5-10μL电泳检测，其余放直接使用或放-80℃冰箱备用。

北京现货丝状真菌线粒体DNA提取试剂盒特价促销极具性价比，此外，我公司正火爆促销以下产品：

·非酶多糖清除剂(RNA样品专用)
编号：BTN60204
英文名称：Non-enzymatic Polysaccharide Scavenger
规格：10mL
用Trizol等方法提取的总RNA样品中经常会含有多糖(Polysaccharide，PS)污染,这些污染会影响下游的RT-PCR和Northern杂交等实验。目前没有十分有效的方法去除这一污染。我公司开发的非酶法PS清除剂能够比较好的解决这一问题。

产品特点：
1.高效，能有效地去除总RNA中的PS污染,使RNA溶液不再粘稠。
2. 不含RNase污染，RNA分子完整性不会受到任何影响。
3.快速，全部操作在样品管中完成，只需要二十多分钟。
4. 稳定，本产品为非酶产品，可以常温运输和4℃长期保存。

储存条件：低温运输，4℃保存，有效期一年。

使用方法：
1. 将十分粘稠的总RNA样品用RNase-free水稀释到100-500μl左右，加入等体积的65℃预热10分钟后的PS Scavenger，振荡器上充分振荡1分钟。
2. 加入等体积的*仿，振荡器上充分振荡1分钟。
3. 12000～15000g离心2分钟，转移上清到一新的离心管中，交界处将有白膜样的多糖沉淀。
4. 加入0.1倍体积的3 M NaOAc(pH5.2)和两倍体积的无水乙醇，混匀后12000～15000g离心10-20分钟。小心弃上清。
5. 加入1mL 75%乙醇，振荡器上短暂振荡后12000～15000g离心2分钟，小心弃上清。
6. 短暂离心，用移液枪小心吸去残留液体后，加入适量RNase-free水或具有灭活残留RNase的液相RNase Scavenger。立即使用或-80℃保存。

·DNA粘转平试剂盒
编号：BTN60107
英文名称：DNA Polishing Kit
规格：20次
本产品利用Pfu DNA polymerase所具有3´到5´的聚合酶活性和5´到3´外切酶活性，将3´或5´突出的DNA片段转化成平末端，用于克隆工作。

产品特点：
1. 简单，精心优化过的2×Polishing Buffer中含有所需要的所有成分，不需要单独准备。
2.适用于任何平末端的DNA载体。

产品组成：

成分	规格
Pfu DNA Polymerase(3U/μL)	20μl
2×Polishing Buffer	0.5ml
说明书	1份

储存条件：低温运输，-20℃保存，保存期限为一年。

使用方法：

1. DNA片段的准备：
无论是来源Taq，Tth,T7，Klenow和Vent等DNA聚合酶合成的DNA片段，还是用限制性内切酶制备的DNA片段，粘转平之前均需要将DNA沉淀以便去除反应液中的无关成份。沉淀DNA的方法包括经典的盐/纯沉淀法，离心柱DNA 吸附法和百奥莱博的一管式非醇超快DNA沉淀法。
2. 设置粘转平(Polishing)反应：

在一个干净的离心管中，分别加入
3´或5´突出的DNA片段	10-500ng
2×Polishing Buffer	25μL
Pfu DNA polymerase	1μL
补水到	50μL
72℃保温2小时。

注意：如果不使用热盖式PCR 仪器加热，则需要在反应管中再加入适量液体石蜡以防反应过程中水份蒸发。
3.反应后处理
粘转平反应后，样品可以放-20℃长期保存，也可以直接用于T4 DNA连接酶催化的连接反应。对10μL的连接反应体系，一般需要加入1-2μL粘转平反应液。由于Pfu DNA polymerase在连接反应的温度条件下几乎没有活性，所以不必去除。但文献报道，去除后连接效率更高。


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·PCR法DNA探针生物素标记试剂盒
编号：BTN90604B
英文名称：PCR DNA Labeling Kit(Biotin)
规格：5次
PCR标记的原理是用带标记的dNTP进行PCR，最后得到的PCR产物将带有标记，可以直接用于杂交试验。其原理示意图如下：


产品特点：
1.一站式，本试剂盒提供经过优化的试剂，不需要用户自己摸索。
2. 足够10次50μl体系的常规PCR(用于制备标记反应的模板和设置对照反应)和5次50μl体系的标记反应。
3.一次标记可以得到μg级的双链DNA探针或约700ng的单链DNA探针，足够多次杂交实验用。
4. 既可用于制备双链探针，也可以用于单链探针。
5. 90604A需自备含标记核苷酸的dNTP，90604B和90604C分别含生物素和地高*(代"辛")标记的底物。自备的标记包括fluorescein-dUTP、hydroxycoumarin-dUTP、resorufin-dUTP和aminoallyl-dUTP等。
6. 本产品得到的探针参入率一般为4-5%(每100个核苷酸中有4-5个将带有非同位素标记)，有效降低了空间阻碍，检测效果最佳。
7.可以用于Southern和Northern Blot、原位杂交、菌落和斑点印迹杂交等分析。

试剂盒组成：

成分	规格
2×标记专用PCR Mix	500μl
dNTP，2mM each	50μl
含Biotin-11-dUTP的dNTP	25μL(仅B有)
含DIG-11-dUTP的dNTP	25μL(仅C有)
超纯水	1ml
说明书	1份

注：标记专用PCR Mix不含dNTP。

储存条件：低温运输，-20℃保存，有效期一年。

使用方法：

一：准备工作
1. 按常规的方法设计PCR引物，使探针长度在400-800bp之间。过短则标记参入少，探针杂交信号强度减弱；过长则非特异杂交增加，背景变强。
2. 根据PCR引物优化PCR条件。
3. 由于标记的dNTP比较珍贵，所以本试剂盒不推荐以基因组DNA或其他复杂DNA为模板直接进行PCR标记，而是建议采取下述的两步法标记来提高成功率，即先制备非标记PCR产物，再以之为模板制备标记的PCR产物。
二：非标记PCR产物的制备
4. 设置50μL PCR的反应体系：

成份	用量
2×标记专用PCR Mix	25μl
dNTP，2mM each	5μl
自备的探针引物一(10pmol/μL)	1μL(10μM)
自备的探针引物二(10pmol/μL)	1μL(10μM)
自备的模板DNA	1μg基因组DNA或1ng质粒DNA
超纯水	补到50μL

5. 按已经优化的PCR参数进行PCR。
6.电泳检测和胶回收所需的PCR产物，并定量。用10 pmol引物一般能得到1μg左右的PCR产物(具体取决于PCR产物的长度)。注意：最好采取胶回收而不是PCR回收以避免残留引物干扰后续的标记PCR。
三：标记PCR反应(最好做一个不加标记的对照用于定量)
说明：在设置下面反应时，如果加一种引物，就得到单链标记的PCR产物；如果加两种引物，则得到双链标记的PCR产物。由于双链PCR探针在杂交前虽然要变性成单链后使用，但杂交时变性的双链彼此还会复性，这种复性会与探针-靶DNA杂交反应相竞争，降低杂交效率，因此强烈推荐使用单链标记的DNA探针。

成份	样品	对照
2×标记专用PCR Mix	25μl	25μl
含Biotin-11-dUTP的dNTP或 含DIG-11-dUTP的dNTP或 自备的含其他标记dUTP的dNTP	5μl	不加
dNTP，2mM	不加	5μl
双链标记：探针引物一和引物二 单链标记：探针引物一或引物二	每种50 pmol 一种50 pmol	每种50 pmol 一种50 pmol
上步胶纯化所得PCR产物 (单链标记可用100ng)	10 ng	10 ng
超纯水	补到50μL	补到50μL

 注意：本试剂盒提供的dNTP混合物中，标记底物与非标记底物的比例已经进过优化，如果自备标记dUTP，其与dTTP的最佳比例需要优化，标记不同，比例不同。对DIG-11-dUTP，最佳比例1：3；对BrdUTP，最佳比例为1：1。
7. 按第5步的PCR参数进行标记PCR，但需要进行下列修改：一是循环数增加到35-55个循环。由于模板为纯化后的PCR产物，探针对扩增长度完整性要求不高(长度不均的探针由于能形成网络结构，效果反而更好)，所以可以增加循环数；二是延伸时间增加15秒，因为标记dUTP参入到DNA的速度比常规的dTTP慢；三是降低复性温度5-7℃，因为标记核苷酸参入到DNA后，新模板的Tm值将降低。
8. 标记探针的定量：取标记反应和对照反应的产物1-5μl，在琼脂糖凝胶上跟浓度已知的DNA marker一起电泳，并判断探针的浓度。由于标记反应的PCR产物中额外带有非同位素的配体(生物素，地高*(代"辛")等)、因此其泳动速度将慢于非标记PCR产物(但同位素标记不能用此法)。
 注意：如果扩增的是单链DNA探针，其结合EB的能力远低于双链DNA(EB是嵌合到双链碱基对之间的，而单链DNA没有碱基对，只有一些局部区域折叠形成的有限双链区，因此能结合的EB很少)，因此EB染色的强弱不能准确反应DNA的浓度，可以采用银染定量(跟marker比较)。一般100ng模板按上述条件经过单链PCR扩增可得到700ng左右探针。
9. 剩余的PCR标记产物可以不经过纯化，直接加入(对单链PCR探针)杂或加热变性并急冷后加入(对双链PCR探针)到杂交液中使用。如果暂时不用请放-20℃长期保存。如果需要纯化，请使用乙酸铵/乙醇沉淀法。


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PY02-235  T1N0肉汤  250克  
BTN131045 辛甲基硫吡喃葡萄糖苷 OTG
75-12-7 Formamide,Deionized 去离子甲酰胺

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